NCI-H1299 sejtek: NCI-H1299 tüdőráksejtek kutatása és klinikai vonatkozásai
AzNCI-H1299 egy immortalizált humán nem kissejtes tüdőrák sejtvonal, amelyet széles körben használnak az immunonkológiai, rák- és gyógyszerkutatásban. Ezen túlmenően a kutatók ezeket a sejteket a gyógyszerérzékenység, a mögöttes jelátviteli útvonalak és a tüdőrákkal kapcsolatos molekuláris mechanizmusok vizsgálatára használták. Emellett ezeket a sejteket vírusfertőzések, például a SARS-CoV-2 tanulmányozására is használják.
Az NCI-H1299 sejtek általános jellemzői és eredete
Az első dolog, amit egy sejtvonalról tudni kell, az a származása és általános jellemzői, mivel ezek segítenek megtervezni a kutatásban való felhasználását. A cikk ezen része segítséget nyújt Önnek abban, hogy megismerjen néhány fontos információt az NCI-H1299 eredetéről és jellemzőiről. Mint például, hogy mik az NCI-H1299 tüdőráksejtek? Milyen típusú sejt az NCI-H1299? Milyen méretűek az NCI-H1299 sejtek? Mi a különbség az A549 és az NCI-H1299 között?
- Az NCI-H1299 sejtvonal egy 43 éves kaukázusi férfi rákos beteg tüdőjének nyirokcsomó-metasztázisából származik.
- Ezek a sejtek a p53 gén homozigóta részleges deléciójával rendelkeznek; így nem expresszálják a p53 fehérjét. Az NCI-H1299 p53 fehérje expressziójának hiánya hozzájárul a H1299 tüdőráksejtek proliferációs hajlamához.
- A p53 mellett ezek az immortalizált sejtek a jelentések szerint NCI-H1299 KRAS mutációval rendelkeznek, amely felelős növekedésükért, proliferációjukért, migrációjukért és inváziós tulajdonságaikért.
- Az NCI-H1299 kariotípusa közel diploid.
- Az NCI-H1299 sejtek epithelsejt-szerű morfológiával rendelkeznek.
- Ezek a sejtek lapítottak és vastagságuk kevesebb, mint 5 µm.
NCI-H1299 és A549
Az NCI-H1299 és az A549 nem kisméretű tüdőrákos sejtvonalak. Az NCI-H1299 sejtek agresszívebbek és érzékenyebbek az A549-hez képest. Mindkettő viszonylag hasonló mutációkkal rendelkezik, mint például a KRAS. Az NCI-H1299 sejtekkel ellentétben azonban az A549 sejtek expresszálják a P53 gént.
Kultúrált információ
Egy sejtvonal-kultúra fenntartása nem könnyű, amíg nem ismerjük az összes kulcsfontosságú információt, többek között: Mi az NCI-H1299 megduplázódási ideje? Mekkora az NCI-H1299 vetési sűrűsége? Milyen az NCI-H1299 sejtközeg? Hogyan kell az NCI-H1299 sejtvonalakat tenyészteni? Ez a rész segít Önnek abban, hogy megtudja a választ az NCI-H1299 sejttenyésztéssel kapcsolatos összes ilyen kérdésre.
Az NCI-H1299 sejtek tenyésztésének legfontosabb pontjai
|
Megduplázódási idő: |
Az NCI-H1299 sejtek megduplázódási ideje 22-30 óra között mozog. |
|
Adhezív vagy szuszpenzióban: |
Az NCI-H1299 egy adherens sejtvonal. |
|
Szubkultivációs arány: |
Az NCI-H1299 sejteket 1:3 és 1:6 közötti ajánlott arányban szubkultiválják. A sejtek beültetéséhez az adherens sejteket 1x PBS-szel mossuk, és Accutase passzázsoldattal inkubáljuk 8-10 percig szobahőmérsékleten. A levált sejteket friss táptalajjal adjuk hozzá és centrifugáljuk. A sejtpelletet ezután reszuszpendáljuk, és a sejteket új tenyésztőközeget tartalmazó lombikokba öntjük. |
|
Növesztőközeg: |
Az RPM1 1640 ideális NCI-H1299 sejtközeg. Ez 10% magzati szarvasmarha szérummal, 4500 mg/L glükózzal, 2,0 mM L-glutaminnal, 1 mM nátrium-piruváttal, 1500 mg/L NaHCO3-mal és 10 mM HEPES-szel van kiegészítve. A táptalajt 2-3 hetente kell megújítani. |
|
Növekedési feltételek: |
Az NCI-H1299 tüdőráksejtkultúrákat 37 °C-on, 5%-os CO2-ellátás mellett párásított inkubátorban tartjuk. |
|
Tárolás: |
Az NCI-H1299 sejtvonal hosszú távon tárolható folyékony nitrogén gőzfázisában vagy ultraalacsony hőmérsékletű fagyasztókban -150°C alatti hőmérsékleten. |
|
Fagyasztási folyamat és közeg: |
A CM-1 vagy a CM-ACF az NCI-H1299 sejtek fagyasztási közege. A sejteket lassú fagyasztási eljárással fagyasztják le, amely a sejtek életképességének védelme érdekében percenként csak 1 fokos hőmérsékletcsökkenést tesz lehetővé. |
|
Felolvasztási folyamat: |
A fagyasztott NCI-H1299 sejteket 37 Celsius-fokos előmelegített vízfürdőben 40-60 másodpercig gyorsan kevergetjük, amíg egy kis jégdarab nem marad. A felolvasztott sejteket friss tápfolyadékkal adjuk hozzá, és közvetlenül új lombikokban tenyészthetjük vagy centrifugálhatjuk. Az előbbi esetben a tápfolyadékot 24 óra inkubáció után ki kell cserélni. A centrifugálás segít eltávolítani a fagyasztó médiumelemeket. Ezt követően a begyűjtött sejteket friss tápfolyadékban reszuszpendáljuk, és a tenyésztéshez új lombikba adagoljuk. |
|
Biológiai biztonsági szint: |
Az NCI-H1299 sejtkultúra kezeléséhez 1. biológiai biztonsági szintű laboratórium szükséges. |
NCI-H1299 sejtvonal megvásárlása: Kiváló minőségű kutatási eszközök a tüdőrák biológiájának vizsgálatához
Az NCI-H1299 sejtek előnyei és hátrányai
Más humán rákos sejtvonalakhoz hasonlóan az NCI-H1299 is rendelkezik néhány megkülönböztethető tulajdonsággal, amelyek sajátos előnyökkel és hátrányokkal járnak. Az alábbiakban néhány jelentőset foglaltunk össze.
Előnyök
Az NCI-H1299 nem kissejtes tüdőrák sejtvonal fő előnyei a következők:
-
In vitro tüdőrákmodell
Az NCI-H1299 sejtvonalakat a tüdőrák nyirokcsomó-metasztázisából fejlesztették ki, és így viszonylag hasonló tulajdonságokkal rendelkeznek. Ezért ezek a sejtek in vitro modellként szolgálhatnak a tüdőrák biológiájának, sejt- és molekuláris mechanizmusainak vizsgálatára, valamint a potenciális terápiás szerek szűrésére és tesztelésére.
-
Könnyen tenyészthető
Az NCI-H1299 sejteket könnyű tenyészteni és fenntartani a kutatólaboratóriumban. Nincsenek kényes sejttenyésztési követelmények és eljárások.
-
NCI-H1299 P53 és NCI-H1299 KRAS mutáció
Az NCI-H1299 sejtekből hiányzik a p53 gén kifejeződése, ami lehetővé teszi a sejtek erőteljes szaporodását. Ezenkívül rendelkeznek KRAS-mutációval, amely hozzájárul a sejtek növekedéséhez, proliferációjához, inváziójához és migrációjához. Ezeket figyelembe véve a kutatók a H1299 sejteket a KRAS és a P53 mutációkkal kapcsolatos molekuláris mechanizmusok vizsgálatára használják.
Hátrányok
Az NCI-H1299 sejtek hátrányai a következők:
-
Szövetspecifikusság
Az NCI-H1299 sejtek tüdőszövetből származnak. Ezért alkalmazhatósága többnyire a tüdőkarcinóma kutatására korlátozódik. Lehet, hogy nem képviseli teljes mértékben más ráktípusok heterogenitását és általános jellemzőit.
Az NCI-H1299 sejtek kutatási alkalmazásai
Az NCI-H1299 sejtvonalat széles körben használják a tüdőrák kutatásában. A következőkben e sejtvonal néhány ígéretes alkalmazását említjük meg.
- Rákbiológia: Az NCI-H1299 sejtek kiváló kutatási eszközként szolgálnak a rák kialakulásának, progressziójának és a kapcsolódó sejt- és molekuláris mechanizmusok vizsgálatához. Ezek a sejtek bizonyos mutációkkal rendelkeznek, lehetővé téve a kutatók számára, hogy feltárják a kapcsolódó rákos sejtek viselkedését, jelátviteli útvonalakat és génexpressziós profilokat. Számos tanulmányban használták az NCI-H1299 nem kissejtes tüdőrák sejtvonalat a tüdőrák biológiájának tanulmányozására. Egy 2018-ban végzett tanulmány például a tüdőráksejtek apoptózisában szerepet játszó jelátviteli útvonalat vizsgálta NCI-H1299 sejtek felhasználásával. A kutatók megállapították, hogy a PI3K/AKT útvonal hozzájárul a sejtek proliferációjához, és gátlása a rákos sejtek pusztulását okozhatja [1]. Hasonlóképpen, egy másik kutatás az NCI-H1299 epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) mechanizmusait vizsgálta. Ez a tanulmány azt javasolta, hogy egy extracelluláris fehérje, a SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine) hozzájárul az NCI-H1299 EMT-hez és a migrációhoz, így elősegíti a sejtek tumorigenezisét - a SPARC fehérje a TGF-β1 jelátvitel közvetítőjeként működik [2].
- Gyógyszerkutatás és szűrés: Az NCI-H1299 humán tüdőrákos sejtvonalat széles körben alkalmazzák a potenciális gyógyszerek toxicitásának és hatékonyságának értékelésére. Emellett a kutatók a daganatellenes gyógyszerek hatásmechanizmusának vizsgálatára is használják. A tanulmányok ezeket a sejteket a lehetséges gyógyszercélpontok és rezisztencia-mechanizmusok azonosítására is felhasználták. Xiao-Yun Shen és munkatársai által végzett kutatás például a természetes brucein D (BD) vegyület rákellenes potenciálját vizsgálta. Az eredmények azt mutatták, hogy a BD jelentősen gátolja az NCI-H1299 sejtek proliferációját, invázióját és migrációját. Ezért potenciális adjuváns terápiának tekinthető a nem kissejtes tüdőrák kezelésében [3]. Hasonlóképpen, egy vizsgálatban értékelték a xantohumol citotoxikus hatását önmagában és ciszplatin kemoterápiás szerrel kombinálva az NCI-H1299 tüdőráksejtekre [4].
NCI-H1299 sejteket tartalmazó kutatási publikációk
Az NCI-H1299 tüdőkarcinóma sejtvonalról szóló néhány jelentős és legtöbbet idézett kutatási publikáció itt található.
Ez a cikk a Human and Experimental Toxicology folyóiratban jelent meg (2021). A tanulmány azt javasolta, hogy az indol-3-karbinol a reaktív oxigénfajok (ROS) szintjének emelésén keresztül indukálja az apoptózist a H1299 sejtekben.
Ez a kutatás 2018-ban jelent meg a Cellular Physiology and Biochemistry folyóiratban. A kutatási eredmények azt mutatták, hogy a kávésav és a paclitaxel kombinációja szinergista rákellenes hatást fejt ki a nem kissejtes tüdőrák NCI-H1299 sejtvonalában.
Ez a kutatási cikk a Molecular Medicine Reports című folyóiratban jelent meg (2018). A tanulmány a tubimozid-1, egy triterpenoid szaponin tumorellenes hatását és a mögöttes mechanizmusokat értékelte az NCI-H1299 sejtvonalon.
A pristimerin apoptózist indukál és gátolja a proliferációt, migrációt a H1299 tüdőráksejtekben
A Journal of Cancer (2020) című folyóiratban megjelent cikk azt javasolta, hogy a Pristimerin, egy természetes vegyület elnyomja az NCI-H1299 sejtek proliferációját és migrációját.
A VIPR1 gén szabályozásának mechanizmusa a humán tüdő adenokarcinóma H1299 sejteknél
A Medical Oncology (2019) című szaklapban megjelent tanulmány a VIPR1 gén túlexpressziójának lehetséges hatásait vizsgálta az NCI-H1299 adenokarcinóma sejtvonalra.
Források az NCI-H1299 sejtvonalhoz: H121212 N1212 Nine: Protokollok, videók és egyéb anyagok: Protokollok, videók és egyéb
Az alábbiakban néhány online erőforrást mutatunk be, amelyekben az NCI-H1299 sejtek szerepelnek.
- NCI-H1299 transzfekció: Ez a videó elmagyarázza az NCI-H1299 sejtvonal tranziens transzfekciós protokollját.
- Adherens sejtvonal szubkultiválása: Ez a videó segít elsajátítani egy adherens sejtvonal általános szubkultúrázási eljárását.
A következő link az NCI-H1299 sejtekre vonatkozó sejtkultúrával kapcsolatos információkat tartalmaz.
- NCI-H1299 sejtvonal: Ez a link segíthet megismerni az NCI-H1299 sejtek passziválási és transzfekciós protokollját.
Gyakran ismételt kérdések az NCI-H1299 sejtvonalról
Hivatkozások
- Gu, J., et al., Study of EGCG induced apoptosis in lung cancer cells by inhibiting PI3K/Akt signaling pathway. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): p. 4557-4563.
- Sun, W., et al., A SPARC a TGF-β1 közvetítőjeként működik az epiteliális-meszenchimális átmenet elősegítésében az A549 és H1299 tüdőráksejtekben. Biofactors, 2018. 44(5): p. 453-464.
- Shen, X.-Y., et al., A bruceine D mechanizmusának vizsgálata a nem kissejtes tüdőrák H1299 sejtek kezelésében. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): p. 500.
- Long, B., et al., A xanthohumol és a ciszplatinnal való kombinációjának citotoxikus hatása emberi metasztatikus tüdőrák H1299 sejtekre. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): p. 1-15.