HEK293T sejtek: a transzfekciós vizsgálatokban rejlő lehetőségek kiaknázása
A HEK293T sejtek emberi embrionális vese sejtek, amelyeket széles körben alkalmaznak az ipari biotechnológiában, a toxikológiában és a rákkutatásban. Ezeket az immortális sejteket különféle terápiás fehérjék és vírusok előállítására is használják.
- Növekedési tápközeg
- A HEK293T sejteket EMEM-ben (Eagle's minimal essential medium) tenyésztik, amely 1,0 g/l L-glükózt, 2,2 g/l NaHCO3-t, 2,0 mM L-glutamint és 10% borjú szérumot tartalmaz. A táptalajt hetente kétszer kell cserélni.
- Duplázódási idő
- A HEK293T sejtek esetében a megadott duplázódási idő 30 óra.
- Növekedési típus
- A HEK293T egy adhezív sejtvonal.
- Biológiai biztonsági szint
- BSL-1
- Kapható
- Cytion — HEK293T megrendelése
- A HEK293T sejtek általános jellemzői és eredete
- A HEK293T sejtek sejttechnológiai és orvostudományi alkalmazásai
- A HEK293T sejtvonal kutatási alkalmazásai
- A HEK293T sejtek felhasználásával megvalósuló sejtterápiás innovációk
- Innovatív technikák a HEK293T sejtkultúrában
- HEK293 sejtek vásárlása kutatási célokra
- A HEK293T sejtvonal tenyésztésével kapcsolatos információk
- HEK293T sejtvonal: előnyök és korlátozások
- Gyakran feltett kérdések a HEK293T sejtkultúrával és alkalmazásaival kapcsolatban
- HEK293T sejtek: Kutatási publikációk
- Források a HEK293T sejtvonalhoz: protokollok, videók és egyebek
- Hivatkozások
- Gyakran feltett kérdések
A HEK293T sejtek általános jellemzői és eredete
Ez a cikk a HEK293T sejtvonal eredetét és általános jellemzőit mutatja be.
- A HEK293T sejtvonal laboratóriumban tenyésztett elsődleges emberi embrionális vese sejtekből származik. A kutatók az 1970-es évek elején fejlesztették ki ezeket a sejteket azáltal, hogy embrionális vese sejteket transzfektáltak felaprózott 5-ös típusú adenovírus DNS-fragmentumokkal. A kutatók a HEK293T sejtvonalat úgy hozták létre, hogy a HEK293 sejtek genomjába bejuttatták a simian vírus 40 (SV40) nagy T-antigént. Ez a módosítás lehetővé tette a kutatók számára a 293 sejtek egyszerű transzfekcióját, és alkalmassá tette őket fehérjeelőállításra és génkifejeződési vizsgálatokra [1].
- A HEK293T sejtek epitheliális jellegű morfológiával rendelkeznek. Hosszúkás, lapított alakúak, határozott sejthatárokkal.
- A HEK293T sejtek átmérője 11 és 15 µm között mozog.
- Az SV40 nagy T-antigénnel rendelkező HEK293T sejtek komplex kariotípussal rendelkeznek. Ezek a sejtek hipotriploidok, háromszor kevesebb kromoszómát tartalmaznak, mint egy haploid gaméta, és a kromoszómaszámuk 64.
Mi a különbség a HEK293T és a HEK293 között?
Mind a HEK293, mind a HEK293T sejtvonal emberi eredetű. A HEK293T a HEK293 sejtvonal népszerű származéka. A tudósok ezeket a sejteket az eredeti emberi embrionális vese 293 sejtekből fejlesztették ki azáltal, hogy SV40 nagy T antigénnel transzfektálták őket, míg az immortális HEK293 sejteket emberi embrionális vese sejtek transzformálásával és tenyésztésével hozták létre, hasított emberi adenovírus 5 DNS-fragmentumok felhasználásával.
A HEK293T sejtek sejttechnológiái és orvostudományi alkalmazásai
Sejtkultúra és sejtbank a HEK293T-kutatásban
A humán embrionális vese 293 sejtekből származó HEK293T sejtek széles körben használatosak a sejtkultúrában, mivel erőteljesen szaporodnak és könnyen transzfektálhatók. Ezekkel a sejtekkel való munkához a kutatóknak prioritásként kell kezelniük a sejtbanki tárolást, amely magában foglalja a sejtek tárolását hosszabb távú kutatási és terápiás felhasználás céljából. A sejtek tulajdonságainak megőrzése és a sejtek hosszú távú életképességének biztosítása érdekében fokozatos sejtbanki megközelítést kell alkalmazniuk. A sejtbankok létrehozása megköveteli a helyes gyártási gyakorlatra vonatkozó előírások betartását, hogy biztosítani lehessen a sejtek életképességét és integritását a terápiás alkalmazásokhoz.
A helyes gyártási gyakorlatok elengedhetetlenek a HEK293T sejtbankok létrehozásában, amelyek alapvető fontosságúak mind a kutatás, mind a terápiás alkalmazások szempontjából. A fősejtbank referenciapontként szolgál minden későbbi sejttermék számára. Ezeknek a sejteknek a terápiás alkalmazásokra történő előállítása, például a génterápiákhoz szükséges lentivírusok előállítása, szigorú szabályozási előírásoknak felel meg, hogy biztosítsa a végtermékek biztonságát és hatékonyságát.
HEK293T-t alkalmazó protokollok és vizsgálatok
A citotechnológiában speciális protokollokat és vizsgálatokat dolgoztak ki a HEK293T sejtek tulajdonságainak értékelésére. Ezek közé tartozik a génterápiás vektorok hatékonyságának értékelése, valamint a sejtek és az extracelluláris mátrix közötti interakció vizsgálata tenyésztőedényben vagy szuszpenziós tenyészetben. A HEK293T sejtek integritásának megőrzése érdekében a kutatók precízen választják ki a transzfekcióhoz szükséges reagenseket, és a nyersanyagokat szigorú minőség-ellenőrzési teszteknek vetik alá.
A HEK293T sejtvonal kutatási alkalmazásai
- Vakcinafejlesztés: A HEK293T sejtvonalat vírusok tanulmányozására és vírusvektor-alapú vakcinák előállítására használják különböző vírusfertőzések leküzdésére. Egy tanulmányban ezt az embrionális vese sejtvonalat használták a COVID-19 vírus emberi angiotenzin-konvertáló enzim 2-n (ACE2) keresztül történő sejtbejutásának szerkezeti és funkcionális alapjainak vizsgálatára [3]. Ezenkívül egy közelmúltbeli tanulmányban HEK93T sejteket használtak SARS-CoV-2 spike-pszeudotípusú lentivírus részecskék előállítására [4].
- Toxikológiai kutatás: Ezt az emberi embrionális vese sejtvonalat széles körben használják gyógyszerek toxicitásának és hatékonyságának vizsgálatára. Egy 2022-ben végzett kutatásban a HEK293T-t normál emberi sejtvonalaként használták a Caladium lindenii kivonatok májrákos HepG2 sejtvonalra gyakorolt citotoxikus potenciáljának validálására [5].
- Génkifejeződési vizsgálatok: Az SV40 nagy T-antigénnel rendelkező HEK293T sejtvonal rendkívül jól alkalmazható transzfekcióra, így alkalmas génkifejeződési vizsgálatokra. Egy tanulmányban HEK293T sejteket használtak a hosszú, nem kódoló SNHG16 RNS szerepének vizsgálatára a trofoblasztfunkciók szabályozásában. A tanulmány kimutatta, hogy az LncRNA SNHG16 a miR-218-5p/LASP1 tengellyel kölcsönhatásba lép, hogy közvetítse ezeket a hatásokat [6].
A HEK293T sejtek felhasználásával megvalósuló sejtterápiás innovációk
A HEK293T-vel végzett sejtterápia fejlődése
A HEK293T sejtek jelentősen hozzájárulnak a sejtterápia területéhez, különösen a génterápiához szükséges vírusvektorok előállításában. Ezek a sejtek elengedhetetlenek a helyes gyártási gyakorlatra vonatkozó előírásoknak megfelelő gyártási folyamatokban, mivel biztosítják a kiváló minőségű génterápiás termékek előállítását. A gyártószemélyzet képzése is a HEK293T sejtek egyedi tulajdonságainak kezelésére és az ezekből a sejtekből származó gyógyszerek magas színvonalának fenntartására összpontosít.
A HEK293T sejtek a klinikai vizsgálatokban és a génterápiában
A HEK293T sejtvonal kulcsfontosságú szerepet játszik a génterápiás termékek fejlesztésében, és elengedhetetlen része azoknak a klinikai vizsgálatoknak, amelyek célja új sejtterápiák piacra hozatala. Ez magában foglalja a sejtvonal magas transzfektivitásának kihasználását a génbejuttatáshoz, olyan vektorok alkalmazásával, mint a lentivirális csomagoló vektorok, ahol az integráz D64V mutáció jelentős előrelépést jelentett a biztonság növelése terén.
Innovatív technikák a HEK293T sejtkultúrában
A HEK293T sejtek sokoldalúsága támogatja az innovatív technikákat mind a kétdimenziós, mind a bonyolultabb dimenziójú sejtkultúrákban. Ez az alkalmazkodóképesség kulcsfontosságú a különböző típusú orvosbiológiai kutatásokhoz szükséges sejtes termékek feltárásában, beleértve a rákkutatást is, ahol ezeket a sejteket tumorigenikus folyamatok tanulmányozására és gyógyszervizsgálatokra használják. Ezenkívül a HEK293T vonal döntő szerepet játszik a lentivirális részecskék előállításában, amelyek mind a kutatás, mind a terápiás vektorok gyártási folyamatai szempontjából kritikus jelentőségűek.
Vásároljon HEK293 sejteket kutatásához
Tegye kutatását magasabb szintre HEK293 sejtjeinkkel, amelyek a génkifejeződéses vizsgálatokban és a vakcinaelőállításban való alkalmazkodóképességükről híresek. Kínálatunkban olyan sokoldalú származékok találhatók, mint a HEK293T, a szuszpenzióhoz adaptált HEK293 vonal, a HEK293T/17, az AAV-293 és a 2V6.11. Fedezze fel széles választékunkat, hogy támogassa és elősegítse kísérleti munkáját.
A HEK293T sejtvonal tenyésztésével kapcsolatos információk
A HEK293T sejteket széles körben tenyésztik a kutató laboratóriumokban. A HEK293T sejtkultúra kialakítása előtt tudnia kell: Mennyi a HEK293T sejtek duplázódási ideje? Mi a HEK293T táptalaj? Mi a HEK293T beültetési sűrűsége?
A HEK293T sejtek tenyésztésének legfontosabb pontjai
Duplázódási idő:
A HEK293T sejtek esetében a megadott duplázódási idő 30 óra.
Adherens vagy szuszpenziós:
A HEK293T egy adhezív sejtvonal.
Beültetési sűrűség:
A HEK293T sejteket 1 x 104 sejt/cm2 sűrűséggel vetjük be. Ezen a bevetési sűrűségen a sejtek körülbelül 4 nap alatt konfluens monoréteget képeznek. A bevetéshez az adhezív sejteket Accutase disszociációs oldattal választjuk le. A leválasztott sejteket centrifugálják, majd gondosan reszuszpendálják tenyésztő tápközeg segítségével. Ezt követően a sejteket új lombikokba helyezik tenyésztés céljából.
Növekedési tápközeg:
A HEK293T sejteket EMEM-ben (Eagle's minimal essential medium) tenyésztik, amely 1,0 g/l L-glükózt, 2,2 g/l NaHCO3-t, 2,0 mM L-glutamint és 10% borjúszérumot tartalmaz. A táptalajt hetente kétszer kell cserélni.
Növekedési feltételek:
A HEK293T sejtkultúrákat 37 °C-os, párásított inkubátorban, 5% CO2-ellátással tartják.
Tárolás:
Az emberi embrionális vese HEK293T sejteket folyékony nitrogén gőzfázisában vagy -150 °C alatti hőmérsékleten tárolják hosszabb ideig.
Fagyasztási folyamat és táptalaj:
A HEK293 sejtek CM-1 vagy CM-ACF fagyasztó tápközegben fagyaszthatók. A HEK293T sejtek életképességének megőrzése érdekében lassú fagyasztási eljárás ajánlott, amely során a hőmérséklet fokozatosan, 1 °C-os lépésekben csökken.
Felolvasztási folyamat:
A fagyasztott sejtfiolát vízfürdőben (37 °C) gyorsan rázják, amíg csak egy kis jégdarab marad benne. A sejteket táptalajban reszuszpendálják és centrifugálják, hogy eltávolítsák a fagyasztó táptalaj összetevőit. A visszanyert sejteket ezután növekedési táptalajt tartalmazó új lombikokban tenyésztik.
Biológiai biztonsági szint:
A HEK293T sejtkultúrák kezeléséhez és fenntartásához 1. szintű biológiai biztonsági laboratórium szükséges.
HEK293T sejtvonal: Előnyök és korlátok
Az emberi embrionális vese 293T sejtekhez egyedi előnyök és korlátozások társulnak. Itt áttekintjük ennek a sejtvonalnak néhány fő előnyét és hátrányát.
A HEK293T sejtek előnyei és hátrányai
A HEK293T sejtek jelentős előnyei közé tartozik a magas transzfektivitásuk, ami azt jelenti, hogy a sejtvonal rendkívül hatékonyan veszi fel az idegen DNS-t és termel bőséges mennyiségű fehérjét. Ez a tulajdonságuk miatt széles körben kedveltek mind az átmeneti, mind a stabil transzfekciós vizsgálatokban. Ezenkívül a HEK293T sejtkultúrák könnyű fenntartásukról ismertek, ami robusztusságuknak és egyszerű kezelési követelményeiknek köszönhetően kiváló választássá teszi őket különböző laboratóriumi kísérletekhez.
A HEK293T sejtkultúrákkal azonban vannak korlátozások is. Az egyik legfőbb aggodalomra okot adó tényező a mikrobiális szennyeződés kockázata, amely jelentősen befolyásolhatja a sejtek morfológiáját, a génexpressziót és más kritikus jellemzőket, ami potenciálisan pontatlan kísérleti eredményekhez vezethet. Továbbá, bár a HEK293T sejtek alkalmasak hosszú távú kísérletekre, a hosszabb tenyésztési időszakok veszélyeztethetik a sejtek egészségét. Ez befolyásolhatja transzfekciós hatékonyságukat és növekedési sebességüket, ezért általában ajánlott a sejtek integritásának megőrzése érdekében a passzálási számot 20-ra vagy annál alacsonyabbra korlátozni.
Gyakran ismételt kérdések a HEK293T sejtkultúráról és alkalmazásokról
HEK293T sejtek: Kutatási publikációk
Ebben a részben néhány ígéretes, a HEK293T sejteket bemutató kutatási publikációt említettünk.
Ez a publikáció 2022-ben jelenik meg a BioRxiv-ben. A tanulmány HEK293T sejteket használt a spike gén N-terminális és RBD (receptor-kötő domén) doménjeit kódoló COVID-19 vírus mRNS-vakcinák kifejlesztéséhez.
A kör alakú HER2-RNS-pozitív hármas negatív emlőrák érzékeny a pertuzumabra
Ez a kutatás 2020-ban jelent meg a Molecular Cancer folyóiratban. A tanulmány azt állította, hogy a hármas negatív emlőrákos sejtekben a kör alakú HER2 RNS expressziója érzékennyé teszi azokat a pertuzumab gyógyszeres kezelésre. A kutatók ebben a tanulmányban HEK293 sejteket használtak a lentivírus előállításához és a kör alakú HER2 gén transzfekciójához.
Az IFITM3 antivirális szerepe a prototípusos habos vírusfertőzésben
Ez a cikk 2022-ben jelent meg a Virology Journal folyóiratban. A tanulmány HEK293T sejteket használt az IFITM3 (interferon-indukált transzmembrán fehérje 3) antivirális hatásának vizsgálatára egy prototípus habvírus (PFV) fertőzésben.
A Nature Scientific Reports (2017) folyóiratban megjelent kutatási cikk HEK293T sejteket használt, és azt vizsgálta, hogy a miRNA-21 a PI3K/AKT jelátviteli útvonal, valamint a SMAD7 és PTEN génexpresszió szabályozásával közvetíti a metformin által kiváltott antiangiogén hatásokat.
A mikroRNS-608 az AKT/FOXO3a jelátviteli útvonalon keresztül gátolja a hólyagrák szaporodását
Ezt a kutatást 2017-ben publikálták a Molecular Cancer folyóiratban. A tanulmány HEK293 sejteket használt a miRNA-608 hólyagrák elleni antiproliferatív potenciáljának vizsgálatához.
Források a HEK293T sejtvonalhoz: protokollok, videók és egyebek
Az alábbiakban néhány forrás található a HEK293T sejtekről:
- HEK293T sejtek transzfekciója.
- HEK sejtek transzfekciója: Ez a videó bemutatja az emberi embrionális vese sejtvonal, a HEK293 általános transzfekciós protokollját.
- Sejtek átültetése: Ez a videó az adhezív sejtek felosztásának vagy szubkultiválásának eljárását magyarázza.
Sejtkultúra-protokollok
A HEK293T sejtek sejtkultúra-protokolljai itt találhatók.
- HEK293T sejtek szétválasztása: Ez az oldal részletes, lépésről lépésre bemutatja a HEK293 sejtek szubkultiválásának folyamatát.
- Emberi embrionális vese sejtek tenyésztése: Ez a link a HEK293T sejtek tenyésztési protokollját tartalmazza.
Hivatkozások
- Tan, E. és társai, A HEK293 sejtvonal mint platform rekombináns fehérjék és vírusvektorok előállításához. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology, 2021, 9.
- Kim, M.J. és munkatársai, Az AMPKα1 szabályozza a tüdő- és emlőrák progresszióját a TLR4 által közvetített TRAF6-BECN1 jelátviteli tengely szabályozásával. Cancers (Basel), 2020, 12(11).
- Wang, Q. és társai, A SARS-CoV-2 emberi ACE2-n keresztüli behatolásának szerkezeti és funkcionális alapjai. Cell, 2020. 181(4): 894–904. o.
- Gale, E.C. és munkatársai, A receptor-kötő domén alegységből álló vakcina hidrogél-alapú, lassú felszabadulása semlegesítő antitestválaszokat vált ki a SARS-CoV-2 ellen. bioRxiv, 2021.
- Kalsoom, A. és munkatársai, A Caladium lindenii kivonatok citotoxikus potenciáljának in vitro értékelése humán hepatokarcinoma HepG2 és normál HEK293T sejtvonalakon. Biomed Res Int, 2022, 1279961. o.
- Yu, Z. és munkatársai, Az LncRNA SNHG16 a miR-218-5p/LASP1 tengelyen keresztül szabályozza a trofoblaszt funkciókat. J Mol Histol, 2021. 52(5): 1021–1033. o.