A431 sejtek - Epidermoid karcinóma sejtek mélyreható elemzése a bőrgyógyászati kutatásban

Megduplázódási idő:

Az A431 sejtek populáció megduplázódási ideje 80 és 100 óra között mozog.

Adherens vagy szuszpenzióban:

Az A431 egy adherens sejtvonal.

Ültetési sűrűség:

1 x^{104 sejt/cm2} sejtsűrűség ideális az A431 sejtvonalhoz. A sejtek konfluenssé válása ennél a sűrűségnél csaknem 4 napot vesz igénybe. Az adherens sejteket PBS-szel (1x) mossuk és Accutase passzázsoldattal inkubáljuk. Ezt követően a sejteket tenyésztőközegben reszuszpendáltuk és centrifugáltuk. A kinyert sejteket ismét reszuszpendáltuk és új lombikokba adagoltuk a növekedéshez.

Növesztőközeg:

Az A431 sejtvonal tenyésztéséhez 10% magzati szarvasmarha szérummal, 4,5 g/L glükózzal, 1,0 mM nátrium-piruváttal, 1,5 g/L NaHCO3-mal és 4 mM L-Glutaminnal kiegészített DMEM táptalajt használtunk. A tápfolyadékot hetente 2-3 naponta kell cserélni.

Növekedési feltételek:

Az A431 rákos sejteket 5%-os CO2-forrással ellátott, párásított inkubátorban, 37°C-os hőmérsékleten tenyésztjük.

Tárolás:

A sejtvonal tárolható elektromos fagyasztóban vagy folyékony nitrogén gőzfázisában -150°C alatti hőmérsékleten, mivel ez segít a sejtek életképességének megőrzésében.

Fagyasztási folyamat és közeg:

A CM-1 vagy a CM-ACF az A431 sejtekhez használt két nagyon ajánlott fagyasztási közeg. A sejtek fagyasztása lassú fagyasztási módszerrel történik, amely lehetővé teszi, hogy a hőmérséklet percenként csak 1 fokkal csökkenjen.

Felolvasztási folyamat:

A lefagyasztott A431 sejteket 37 °C-os vízfürdőben, antimikrobiális szert tartalmazó vízfürdőben 40-60 másodpercig olvasztjuk fel. Amikor már csak egy kis jégcsomó marad, a sejteket a táptalajhoz adjuk és centrifugáljuk. A kinyert sejteket reszuszpendáljuk, és tenyésztőlombikokba öntjük a növekedéshez.

Biológiai biztonsági szint:

Az A431 kultúrák kezelésére és fenntartására az első biológiai biztonsági szint ajánlott.