Cultivo de células de mamíferos: Fundamentos y técnicas
El cultivo de células de mamífero es una técnica fundamental en la investigación biológica, que permite a los científicos estudiar células en un entorno controlado fuera de los organismos vivos. Este proceso implica aislar células de tejidos, mantenerlas en condiciones cuidadosamente controladas y propagarlas para diversos fines experimentales. El cultivo de células de mamífero es crucial para comprender los procesos celulares, los mecanismos de las enfermedades y el desarrollo de nuevas terapias, incluidas las que utilizan líneas celulares inmortales
Puntos clave:
- Las células pueden aislarse de los tejidos mediante digestión enzimática o métodos de cultivo de explantes
- Las células primarias tienen una vida útil limitada, mientras que las líneas celulares inmortalizadas pueden proliferar indefinidamente
- Las condiciones de cultivo, incluida la composición de los medios de crecimiento, son fundamentales para la supervivencia y la proliferación celular
- Las células pueden cultivarse en suspensión o como cultivos adherentes, dependiendo de su tipo y de las necesidades de la investigación
- Los medios de cultivo habituales son MEM, DMEM y RPMI 1640, cada uno adaptado a un tipo celular específico
- Las condiciones de crecimiento habituales son 37 °C de temperatura, 5% de CO2 y 95% de humedad relativa
- Cada vez se utilizan más alternativas al suero, como el lisado de plaquetas humanas (hPL), para evitar posibles problemas de contaminación
Técnicas de aislamiento celular
El proceso de creación de un cultivo celular comienza con el aislamiento de las células de los tejidos. Existen varios métodos para lograrlo, cada uno de ellos adecuado para diferentes tipos de tejidos y objetivos de investigación. En el caso de las muestras de sangre, el aislamiento celular es relativamente sencillo, siendo los glóbulos blancos el principal objetivo del cultivo debido a su capacidad de crecimiento. Los tejidos sólidos requieren técnicas de aislamiento más complejas. Un método habitual es la digestión enzimática, en la que se utilizan enzimas como la colagenasa, la tripsina o la pronasa para romper la matriz extracelular y liberar células individuales en suspensión. Alternativamente, los investigadores pueden emplear el método de cultivo de explantes, en el que pequeños trozos de tejido se colocan directamente en medios de crecimiento, permitiendo que las células migren hacia fuera y proliferen. La elección entre estos métodos depende a menudo del tipo de tejido específico, la población celular deseada y el uso experimental previsto. Es importante señalar que las células aisladas directamente de un organismo se denominan células primarias y, con algunas excepciones como las células derivadas de tumores, suelen tener una vida útil limitada en cultivo antes de sufrir senescencia
Productos esenciales para el cultivo de células de mamífero
| Nombre del producto | Número de producto | Categoría | Aplicación |
|---|---|---|---|
| DMEM, w: 4,5 g/L Glucosa, w: 4 mM L-Glutamina, w: 1,5 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Piruvato sódico | 820300a | Medios de cultivo | Medio de uso general para varios tipos de células de mamíferos |
| DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L Glucosa, w: 1,6 mM L-Glutamina, w: 15 mM HEPES, w: 1,0 mM Piruvato sódico, w: 1,2 g/L NaHCO3 | 820400a | Medios de cultivo | Adecuado para una amplia gama de células de mamíferos, especialmente células epiteliales |
| RPMI 1640, w: 2,1 mM Glutamina estable, w: 2,0 g/L NaHCO3 | 820700a | Medios de cultivo | Comúnmente utilizado para células linfoides y líneas celulares híbridas |
| Accutase | 830100 | Disociación celular | Solución de disociación celular suave para células adherentes |
| Medio de congelación CM-1 | 800150 | Criopreservación | Para la congelación y el almacenamiento a largo plazo de células de mamíferos |
| Medio de congelación CM-ACF, sin suero | 800650 | Criopreservación | Medio sin componentes animales para la congelación de células |
| PBS | 860015 | Solución tampón | Para lavar las células y mantener el equilibrio del pH |
| Medio de crecimiento de células endoteliales | 820731 | Medio especializado | Optimizado para el cultivo de células endoteliales |
| Prueba de micoplasma | 900159 | Control de calidad | Esencial para detectar la contaminación por micoplasma en los cultivos |
| Autenticación de línea celular - Humana | 900154 | Control de calidad | Verifica la identidad de líneas celulares humanas |
Esta tabla representa una selección de productos esenciales para el cultivo de células de mamíferos. Si desea consultar nuestra gama completa de productos para el cultivo celular, incluidos medios y reactivos especializados, visite nuestra página de la categoría Medios y reactivos.
- Una alternativa suave a la tripsina
Accutase es una solución de disociación celular que está revolucionando la industria del cultivo celular. Es una mezcla de enzimas proteolíticas y colagenolíticas que imita la acción de la tripsina y la colagenasa. A diferencia de la tripsina, Accutase no contiene ningún componente mamífero o bacteriano y es mucho más suave con las células, por lo que es una solución ideal para el desprendimiento rutinario de células del material plástico estándar de cultivo de tejidos y del material plástico recubierto de adherencia. En esta entrada del blog, exploraremos los beneficios y usos de Accutase y cómo está cambiando las reglas del juego en el cultivo celular.
Ventajas de Accutase
Accutase tiene varias ventajas sobre las soluciones tradicionales de tripsina. En primer lugar, puede utilizarse siempre que se necesite un desprendimiento suave y eficaz de cualquier línea celular adherente, lo que la convierte en un sustituto directo de la tripsina. En segundo lugar, Accutase funciona extremadamente bien en células madre embrionarias y neuronales, y se ha demostrado que mantiene la viabilidad de estas células después del pasaje. En tercer lugar, Accutase conserva la mayoría de los epítopos para su posterior análisis por citometría de flujo, por lo que es ideal para el análisis de marcadores de superficie celular.
Además, no es necesario neutralizar Accutase al pasar células adherentes. La adición de más medio después de dividir las células diluye Accutase de modo que ya no es capaz de desprender células. Esto elimina la necesidad de un paso de inactivación y ahorra tiempo a los técnicos de cultivo celular. Por último, Accutase no necesita alícuotas y una botella es estable en el frigorífico durante 2 meses.
Aplicaciones de Accutase
Accutase es un sustituto directo de la solución de tripsina y puede utilizarse para el pasaje de líneas celulares. Además, Accutase funciona bien al separar células para el análisis de muchos marcadores de superficie celular mediante citometría de flujo y para la clasificación celular. Otras aplicaciones posteriores del tratamiento con Accutase incluyen el análisis de marcadores de la superficie celular, el ensayo de crecimiento de virus, la proliferación celular, los ensayos de migración de células tumorales, el pasaje celular rutinario, el escalado de la producción (biorreactor) y la citometría de flujo.
Composición de Accutase
Accutase no contiene componentes mamíferos ni bacterianos y es una mezcla enzimática natural con actividad enzimática proteolítica y colagenolítica. Está formulada a una concentración mucho menor que la tripsina y la colagenasa, lo que la hace menos tóxica y más suave, pero igual de eficaz.
Eficacia de Accutase
Accutase ha demostrado ser eficaz en el desprendimiento de células primarias y madre y en el mantenimiento de una alta viabilidad celular en comparación con enzimas de origen animal como la tripsina. el 100% de las células se recuperan al cabo de 10 minutos, y no hay ningún inconveniente en dejar las células en Accutase hasta 45 minutos, gracias a la autodigestión de Accutase.
En resumen
En conclusión, Accutase es una potente solución que está cambiando las reglas del juego en el cultivo celular. Por su naturaleza suave, eficacia y versatilidad, Accutase es la alternativa ideal a la tripsina. Si está buscando una solución fiable y eficaz para el desprendimiento celular, Accutase es la solución para usted.
La solución salina tamponada con fosfato (PBS) es una solución tampón muy utilizada en la investigación biológica y química. Desempeña un papel crucial en el mantenimiento del equilibrio del pH y la osmolaridad durante diversos procedimientos experimentales, como el procesamiento de tejidos y el cultivo celular. Nuestra solución PBS está meticulosamente formulada con ingredientes de gran pureza para garantizar la estabilidad y fiabilidad en cada experimento. La osmolaridad y las concentraciones de iones de nuestra PBS imitan fielmente las del cuerpo humano, por lo que es isotónica y no tóxica para la mayoría de las células.
Composición de nuestra solución PBS
Nuestra solución PBS es una mezcla de soluciones salinas y tampones de fosfato de grado ultrapuro con pH ajustado. A una concentración de trabajo de 1X, contiene:
8000 mg/L de cloruro sódico (NaCl)
200 mg/L Cloruro potásico (KCl)
1150 mg/L Fosfato sódico dibásico anhidro (Na2HPO4)
200 mg/L Fosfato potásico monobásico anhidro (KH2PO4)
Esta composición garantiza un pH y un equilibrio iónico óptimos, adecuados para una amplia gama de aplicaciones biológicas.
Aplicaciones de nuestra solución PBS
Nuestra solución PBS es ideal para diversas aplicaciones en investigación biológica. Sus propiedades isotónicas y no tóxicas la hacen adecuada para la dilución de sustancias y el enjuague de contenedores celulares. Las soluciones de PBS que contienen EDTA son eficaces para desprender células adheridas y aglomeradas. Sin embargo, los metales divalentes como el zinc no deben añadirse al PBS, ya que pueden provocar precipitación. En tales casos, se recomiendan los tampones de Good. Además, nuestra solución de PBS es una alternativa aceptable al medio de transporte viral para el transporte y almacenamiento de virus de ARN, incluido el SARS-CoV-2.
Control de calidad
Filtrado estéril
Almacenamiento y vida útil
Almacenar a +2°C a +25°C, protegido de la luz.
Una vez abierto, conservar entre 2°C y 25°C y utilizar antes de 24 meses.
Condiciones de envío
Temperatura ambiente
Conservación
Conservar refrigerado a +2°C a +8°C en la oscuridad. Evitar la congelación y el calentamiento frecuente a +37°C, ya que reduce la calidad del producto.
No calentar el medio a más de 37°C ni utilizar fuentes de calor no controladas, como aparatos de microondas.
Si sólo se va a utilizar una parte del medio, retirar la cantidad necesaria y calentarla a temperatura ambiente antes de su uso.
Composición
Categoría
Componentes
Concentración (mg/L)
Sales
Cloruro de potasio
200
Fosfato potásico monobásico anhidro
200
Cloruro sódico
8000
Fosfato sódico dibásico anhidro
1150
Método de análisis
CLS ofrece pruebas a corto y largo plazo para la detección de micoplasmas. En el primero, las muestras se analizan inmediatamente después de su llegada, mientras que en el segundo se inicia el cultivo celular y las células se analizan tras 14 días de cultivo sin antibióticos. El análisis de micoplasmas se realiza mediante un sistema de detección de dos puntos con el PlasmoTest™
- Kit de detección de micoplasmas (Invivogen) y el Certus QC
- kit de detección mycoADVANCED (Certus).
Muestras
Para la prueba rápida, proporcione un mínimo de 50 µl de suspensión celular que contenga 50.000 células. La suspensión celular puede enviarse a temperatura ambiente.
Para la prueba premium, por favor proporcione un mínimo de 1 millón de células en un medio de congelación adecuado para asegurar un cultivo robusto y sano para el cultivo y posterior prueba de las células. Envíe las muestras en hielo seco.
Rellene el formulario de muestras para la prueba de micoplasma e inclúyalo con su envío de muestras.
Ensayo reportero colorimétrico
Esta prueba es un ensayo colorimétrico basado en células. En presencia de micoplasma, una línea celular reportera induce una cascada de señalización que desencadena un cambio de color en el medio de rojo a azul. El ensayo se realiza en placas multipocillo de 96 pocillos. Las señales se detectan en un espectrofotómetro de microplacas a 620-655 nm. Se detectan todas las especies de micoplasma y acholeplasma, pero también otros contaminantes del cultivo celular, como las bacterias.
Amplificación isotérmica
La amplificación isotérmica es una prueba rápida y fiable basada en la amplificación isotérmica de ADN específico de micoplasma combinada con la detección en tiempo real mediante un colorante intercalante de ADN. El ensayo es capaz de detectar seis de las especies más comunes que representan >95% de las contaminaciones: M.orale, M.hyorhinis, M.arginini, M.fermentans, M.hominis y A.laidlawii. Debido a la homología de secuencia, también se detectarán otras especies de micoplasma (M.pneumoniae, M.gallisepticum y M.synoviae). Para identificar si la muestra es micoplasma positiva o negativa, se estudia la temperatura de fusión (Tm).
Conclusiones: El papel fundamental del cultivo de células de mamífero en la investigación moderna
El cultivo de células de mamífero ha revolucionado la investigación biológica y médica, proporcionando a los científicos potentes herramientas para estudiar procesos celulares complejos, mecanismos de enfermedades y posibles intervenciones terapéuticas. Desde el aislamiento de células primarias hasta el desarrollo de líneas celulares inmortalizadas, esta técnica se ha convertido en una parte indispensable del instrumental científico moderno
El viaje del cultivo de células de mamífero comienza con unas cuidadosas técnicas de aislamiento, progresa a través del meticuloso mantenimiento de las células en medios especializados y culmina en una amplia gama de aplicaciones en diversos campos de estudio. Ya se trate de la investigación del cáncer, el descubrimiento de fármacos o la biología celular básica, la capacidad de cultivar y manipular células de mamífero in vitro ha abierto vías sin precedentes para la exploración científica
La clave del éxito del cultivo de células de mamífero son las condiciones cuidadosamente controladas en las que se mantienen las células. Desde la composición de los medios de cultivo hasta los parámetros ambientales precisos de las incubadoras, todos los aspectos se optimizan para imitar al máximo las condiciones naturales de las células. Esta atención al detalle garantiza la fiabilidad y reproducibilidad de los experimentos, piedra angular de la buena práctica científica
El desarrollo de líneas celulares inmortalizadas, como las ampliamente utilizadas células HeLa, ha ampliado aún más las posibilidades del cultivo celular. Estas líneas celulares proporcionan modelos celulares consistentes y fácilmente disponibles que han acelerado la investigación en numerosas disciplinas
De cara al futuro, el cultivo de células de mamífero sigue evolucionando. Los avances en las técnicas de cultivo en 3D, el desarrollo de organoides y el uso de medios químicamente definidos están ampliando las posibilidades del cultivo celular. Estos avances prometen acercar aún más los modelos in vitro a la complejidad de los sistemas in vivo, revolucionando potencialmente el descubrimiento de fármacos, la medicina personalizada y nuestra comprensión de la biología humana
En conclusión, el cultivo de células de mamífero sigue siendo una técnica dinámica y esencial en la investigación de las ciencias de la vida. Su perfeccionamiento y aplicación continuados desempeñarán sin duda un papel crucial a la hora de abordar algunas de las cuestiones más acuciantes de la biología y la medicina, impulsando el progreso científico en los años venideros