Células Vero: Vías pioneras en estudios víricos e innovación en vacunas
La línea celular Vero, un modelo celular inmortalizado de mamífero derivado de las células epiteliales renales del mono verde africano, se sitúa en la vanguardia de la investigación en virología, microbiología y biología celular y molecular. Su amplia aplicación abarca el desarrollo de vacunas, el cribado farmacéutico y la exploración de la biología de virus y parásitos, la inmunología tumoral y las estrategias inmunoterapéuticas.
Origen y características principales de las células Vero
Profundizar en una línea celular como la Vero suscita varias preguntas: ¿Qué son exactamente las células Vero? ¿Cómo se creó la línea celular Vero? ¿Qué historia hay detrás del nombre "Vero"? Este segmento pretende dilucidar la génesis y los principales atributos de las células Vero.
El origen de la línea celular Vero se remonta a 1962, a partir de las células epiteliales del riñón del mono verde africano. Esta línea fue cultivada por Y. Kawakita y Yasumura en la Universidad de Chiba (Japón). El término "Vero" deriva de "Verda reno" en esperanto, que se traduce como "riñón verde", aunque "Vero" también resuena con la noción de "verdad"
Las células Vero suelen formar monocapas, pero pueden adaptarse a cultivos en suspensión, mostrando una estructura de tipo epitelial. Estas células se caracterizan por su forma redondeada a alargada y un diámetro medio de unas 17 µm. En particular, las células Vero presentan un recuento cromosómico hipodiploide, con un número cromosómico modal de 58 en aproximadamente el 66% de la población celular, aunque existen variaciones con ploidías más altas en una pequeña fracción (1,7%) de células.
Clones de células Vero y sus propiedades únicas
Los distintos clones derivados del linaje de células Vero presentan características únicas que los distinguen de la línea original. Entre ellos, dos clones celulares Vero notables son:
Línea celular Vero E6: También conocido como Vero C1008, este clon procede de las células Vero 76 y fue aislado en 1979 por P.J. Price mediante una técnica de dilución en placas de microtitulación. Las células Vero E6 son especialmente adecuadas para cultivar virus que se replican lentamente.
Células Vero 76: Procedentes del riñón de un mono verde africano en 1968, estas células mantienen la morfología epitelial característica de las células Vero.
Estas variantes de las células Vero, junto con la línea madre, siguen siendo fundamentales para el avance de la investigación virológica y el desarrollo de intervenciones médicas, lo que marca su importancia en la comunidad científica.
Información sobre el cultivo
El cultivo de células Vero, una línea celular de mono, requiere familiarizarse con parámetros específicos como el tiempo de duplicación, la densidad de siembra y el medio de crecimiento adecuado.
Tiempo de duplicación dela población: El tiempo de duplicación de las células Vero es de unas 24 horas.
Adherencia: Las células Vero se adhieren a las superficies y suelen formar monocapas cuando se cultivan.
Densidad de siembra: Es aconsejable comenzar con una densidad de siembra de 1 x 10^4 células/cm^2. Para cultivar células Vero adherentes, lávelas con PBS y trátelas con Accutase para desprenderlas. Una vez desprendidas, centrifugar las células, resuspenderlas en medio fresco y transferirlas a nuevos frascos de cultivo.
Medio de cultivo: Tanto el F12 de Ham como el DMEM son medios adecuados para el cultivo de células Vero. Deben complementarse con 2,5 mM de L-glutamina y un 5% de suero fetal bovino (FBS) para favorecer un crecimiento óptimo. El medio debe renovarse dos o tres veces por semana.
Condiciones de crecimiento: Las células Vero crecen a una temperatura de 37°C en una atmósfera humidificada con un 5% de CO2.
Almacenamiento: Para el almacenamiento a largo plazo, las células Vero deben mantenerse a temperaturas inferiores a -150°C, ya sea en un congelador de temperatura ultrabaja o en la fase de vapor de nitrógeno líquido.
Proceso y medio de congelación: Para la criopreservación, utilice CM-1 o CM-ACF, o el medio de crecimiento con FBS y DMSO, como medio de congelación. Emplear una técnica de congelación lenta, disminuyendo la temperatura gradualmente 1°C por minuto.
Proceso de descongelación: Descongelar las células Vero sumergiendo el recipiente en un baño de agua a 37°C y agitándolo suavemente durante 40-60 segundos. A continuación, diluir las células en medio fresco, centrifugar para eliminar el crioprotector, resuspender en medio de crecimiento fresco y colocarlas en un nuevo matraz para que se recuperen y crezcan.
Nivel de bioseguridad: Las células Vero deben manipularse en un laboratorio que cumpla los requisitos del nivel 1 de bioseguridad.
Aplicaciones de la línea celular Vero en investigación
La línea celular Vero tiene numerosas aplicaciones de investigación en los campos de la biología celular y la virología. A continuación se describen algunas de ellas.
Células Vero en investigación vírica y producción de vacunas
Las células Vero, derivadas de células de riñón de mono verde africano, se han convertido en un elemento básico en el desarrollo de bioprocesos de vacunas para diversos virus, como el poliovirus y el virus de la encefalitis japonesa. Su adaptabilidad tanto en cultivos adherentes como en suspensión y su amplia capacidad de soporte de virus, incluso para patógenos como el virus de los pequeños rumiantes, ponen de relieve su importancia en el aislamiento de virus y el desarrollo de vacunas.
Numerosos estudios han utilizado células Vero para la producción de vacunas humanas. Por ejemplo, un notable estudio publicado en 2019 demostró el uso de células Vero en el desarrollo de una vacuna inactivada contra el virus de la fiebre amarilla [2].
Las células Vero se utilizan comúnmente en estudios de infección viral, como un estudio realizado en 2020 que infectó células Vero con diferentes aislados del virus SARS-CoV-2 para estudiar las propiedades de crecimiento del virus [4]. Del mismo modo, otro estudio investigó las respuestas celulares a la infección por SARS-CoV-2 utilizando cultivos de células Vero [5].
El papel de las células Vero en la ingeniería de tejidos y el desarrollo de bioprocesos previos
Más allá de la producción de vacunas, las células Vero contribuyen a la ingeniería de tejidos y al campo más amplio del desarrollo de bioprocesos, lo que subraya la necesidad de seguir investigando sus propiedades y aplicaciones. La selección de sublíneas celulares Vero adecuadas es clave para maximizar su potencial en las industrias biotecnológica y farmacéutica.
Aplicación de las células Vero en pruebas de eficacia y seguridad de fármacos
Las células Vero se emplean con frecuencia en ensayos farmacológicos para evaluar la eficacia y seguridad de compuestos farmacéuticos. Estas células suelen considerarse un modelo estándar para las células renales normales en estudios que investigan los efectos citotóxicos de diversos fármacos y agentes terapéuticos. Por ejemplo, en una investigación en la que se comparó el impacto de los extractos de la raíz de la planta Terminalia avicennioides tanto en las células HepG2, una línea celular de cáncer de hígado, como en las células Vero, derivadas del epitelio de riñón de mono, se descubrió que los extractos eran más perjudiciales para las células cancerosas que para las células normales.
Limitaciones de las células Vero
Aunque las células Vero se utilizan ampliamente, tienen sus limitaciones, como la producción de toxinas Vero y las alteraciones genómicas que pueden afectar a determinadas aplicaciones. Comprender las sublíneas específicas y las características genómicas de las células Vero, incluido el linaje Vero F6, es esencial para optimizar su uso en diversos bioprocesos.
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Publicaciones de investigación
Las siguientes son algunas de las publicaciones de investigación recientes y más citadas en las que aparecen células Vero.
Este estudio publicado en Vaccine Journal (2019) adaptó las células Vero al crecimiento en cultivos en suspensión para producir virus de la rabia a títulos elevados utilizando diversos medios libres de suero.
Susceptibilidad de Toxoplasma gondii al extracto etanólico de Tinospora crispa en células Vero
Este trabajo se publicó en la revista Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine en 2019. El estudio propuso que el extracto etanólico de la planta Tinospora cr ispa ejerce un efecto perjudicial sobre el parásito Toxoplasma gondii. Sin embargo, es seguro para las células huésped (la línea celular Vero).
Este artículo fue publicado por el Journal of the Balkan Union of Oncology en 2021. En este trabajo, Ozlem Dagdeviren Ozsoylemez y Gul Ozcan exploraron el efecto citotóxico del extracto de hoja de Colchicum baytopiorum en las líneas celulares C-4I y Vero.
Este estudio publicado en Phytotherapy Research (2021) utilizó células Vero infectadas con SARS-CoV-2 para investigar el efecto terapéutico del resveratrol sobre la replicación del virus.
Las estatinas lipofílicas inhiben la producción del virus Zika en células Vero
Este artículo en Nature Scientific Reports (2019) propone que las estatinas lipofílicas, es decir, cerivastatina, lovastatina, fuvastatina, simvastatina y mevastatina, pueden impedir la producción del virus Zika en células Vero.
Recursos para las células Vero: Protocolos, vídeos y más
- Transfección de células Vero: Este enlace le guiará a través de un protocolo de transfección para células Vero.
- Transfección de la línea celular Vero: Este vídeo explica un protocolo de transfección para la línea celular Vero.
- Subcultivo de células Vero: Este vídeo describe las recomendaciones generales de subcultivo para líneas celulares adherentes.
Protocolos de cultivo celular
- Cultivo de células Vero: Este sitio web contiene un protocolo bien explicado para el cultivo de células Vero.
- Cultivo de células Vero: Este documento puede ayudarle a aprender el protocolo para propagar, mantener y congelar células Vero.
Preguntas frecuentes sobre las células de Vero
Referencias
- Ammerman, N.C., M. Beier-Sexton, y A.F. Azad, Growth and maintenance of Vero cell lines. Protocolos actuales en microbiología, 2008. 11(1): p. A. 4E. 1-A. 4E. 7.
- Pato, T.P., et al., Purificación del virus de la fiebre amarilla producido en células Vero para la fabricación de vacunas inactivadas. Vaccine, 2019. 37(24): p. 3214-3220.
- Aliyu-Amoo, H., et al., Efecto antiproliferativo de extractos y fracciones de la raíz de Terminalia avicennioides (Combretaceae) Guill y Perr. en líneas celulares HepG2 y Vero. Clinical Phytoscience, 2021, 7(1): p. 1-7.
- Yao, P., et al., Isolation and growth characteristics of SARS-CoV-2 in Vero cells. Virologica Sinica, 2020. 35(3): p. 348-350.
- Park, B.K., et al., Differential signaling and virus production in Calu-3 cells and Vero cells upon SARS-CoV-2 infection. Biomolecules & Therapeutics, 2021. 29(3): p. 273.