Línea celular Jurkat E6.1
Jurkat E6.1 es un clon de la línea celular Jurkat, una línea celular de linfocitos T humanos inmortalizados derivada de sangre periférica. Establecida por primera vez en 1977, se utiliza en investigaciones relacionadas con la señalización de receptores de células T, terapias adoptivas de células T y otros linfocitos contra el cáncer, investigación de protooncogenes relacionados con la sangre, supervivencia celular y diferenciación celular.
En este artículo, incluiremos toda la información y los requisitos previos que debe comprender antes de empezar a trabajar con líneas celulares clonadas Jurkat E6.1, entre los que se incluyen:
- Origen, historia e información general
- Características del cultivo celular
- Aplicaciones de las líneas celulares Jurkat E6.1
- Publicaciones de investigación
- Ventajas y limitaciones
- Recursos: Protocolos, Vídeos y Más
1 .Origen, Historia e Información General
Aquí encontrará toda la información necesaria relacionada con la historia, origen y características generales de la línea celular Jurkat E6.1 y su manejo en cultivo celular.
- Jurkat E6.1 es una línea celular de linfocitos T humanos inmortalizados. Esta línea celular clonada es un derivado de la línea celular Jurkat obtenida a partir de la sangre periférica de un niño de 14 años que padecía leucemia linfoblástica aguda en 1976. Tras su aislamiento de la sangre, esta línea celular recibió inicialmente el nombre de JM, ya que JM y Jurkat indican que estas líneas celulares están aisladas del mismo paciente. La línea celular Jurkat E6.1 se clonó a partir de derivados celulares conocidos como Jurkat-FHCRC.
- Las líneas celulares E6.1 derivan de la leucemia; estas líneas celulares se utilizan para aumentar la expresión de IL-2 mediante simulación con anticuerpos monoclonales o lectina. Expresan receptores de antígenos de células T; por lo tanto, estas líneas celulares pueden utilizarse en el estudio de trastornos del sistema inmunitario y en la investigación inmuno-oncológica.
- Morfología celular de las células Jurkat E6.1: Las células Jurkat E6.1 se aislaron de un paciente con leucemia y tienen una morfología alterada en comparación con los linfocitos T, lo que las convierte en líneas celulares inmortales. La célula linfoblástica se forma cuando los linfocitos ingenuos se activan por la presentación de antígenos por parte de células presentadoras de antígenos. Esto da lugar a un mayor crecimiento del núcleo, el citoplasma, el ARNm y las proteínas.
- Tamaño celular: Las líneas celulares Jurkat E6.1 son clonadas inmortalizadas con un diámetro que suele oscilar entre 10-16 μm (el diámetro puede variar según el tipo de suspensión). Estas líneas celulares tienen una forma celular muy esférica.
- Genoma y número cromosómico: Estas líneas celulares son líneas celulares pseudodiploides de linfocitos T humanos, con su cromosoma modelo cromosoma 46. Éstas también muestran que el cromosoma modelo está presente en alrededor del 74% y muestran una tasa de poliploidía de alrededor del 5,3%. Los estudios de cariotipo mostraron un cariotipo con 46, X, Y, -2, -18, del (2) (p21p23), del (18) (p11.2). Los cromosomas X e Y suelen tener una copia regular en la mayoría de las líneas celulares.
- Líneas celulares Jurkat frente a líneas celulares Jurkat E6.1: Las líneas celulares Jurkat son las líneas celulares parentales primarias aisladas por primera vez del paciente con leucemia linfoblástica aguda. Sin embargo, las líneas celulares Jurkat E6.1 son derivadas clonadas de las líneas celulares Jurkat-FHCRC.
2. características del cultivo celular
Puntos clave para el cultivo de células B16
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Tiempo de duplicación de la población |
El tiempo de duplicación de la población de las líneas celulares Jurkat es de aproximadamente 20,7 horas, lo que permite un desarrollo celular relativamente rápido. |
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Adherentes o no adherentes |
Las líneas celulares Jurkat E6.1 crecen en modo no adherente, existiendo en suspensión como crecimiento en una sola capa o como grupos que flotan libremente. |
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Densidad de siembra |
La densidad de siembra recomendada para las líneas celulares E6.1 Jurkat es de 1,0-2,0 x 105 células viables/mL para garantizar una fijación saludable y un crecimiento celular óptimo. |
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Medio de crecimiento |
El medio de crecimiento necesario para las líneas celulares E6.1 Jurkat es el medio RPMI-1640 formulado por ATCC (ATCC 30-2001). El medio completo se prepara añadiendo los componentes especificados, incluido el suero bovino fetal (ATCC 30-2002), hasta alcanzar una concentración final del 10%. |
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Condiciones de crecimiento |
Las líneas celulares E6.1 Jurkat pueden cultivarse en una incubadora adecuada con una disponibilidad de aire y CO2 del 5% utilizando medio RPMI-1640 y suero fetal bovino. |
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Condiciones de almacenamiento |
El almacenamiento a largo plazo de líneas celulares Jurkat en estado de cultivo congelado debe realizarse a -130 grados Celsius o en nitrógeno líquido en fase vapor. Almacenarlas a -70 grados Celsius puede provocar una pérdida de viabilidad celular. |
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Congelación |
Se almacena una alícuota de aproximadamente 0,5-1,0 ml de suspensión de la línea celular en tubos criogénicos para mantener las líneas celulares. Estos tubos se colocan en un recipiente de crioconservación a -70 grados Celsius. Los tubos se transfieren a un tanque de nitrógeno líquido y se almacenan en fase vapor al día siguiente. |
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Descongelación |
Para descongelar las líneas celulares Jurkat, los viales de suspensión celular deben colocarse en un baño de agua a 37 grados Celsius. La suspensión puede descongelarse durante 2 minutos con agitación suave. Es esencial mantener la tapa del vial fuera del baño de agua para evitar la contaminación de las líneas celulares. |
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Nivel de bioseguridad |
El crecimiento de líneas celulares Jurkat requiere un nivel de bioseguridad BSL-1 en el laboratorio, asegurando que se siguen las precauciones básicas de seguridad. |
3. aplicaciones de la línea celular Jurkat E6.1
La línea celular Jurkat E6.1 se utiliza sobre todo en la investigación y el estudio de trastornos relacionados con el sistema inmunitario y sus cánceres asociados. Además, ha resultado adecuada para el estudio de algunas complejidades relacionadas con la infección por VIH, ya que el receptor de células T CD4 es necesario para la entrada retroviral.
A continuación se analizan algunas áreas clave en las que se utilizan estas líneas celulares:
Sistema modelo para la señalización de células T y vías apoptóticas: Esta línea celular derivada de la leucemia de células T se utiliza ampliamente en investigaciones relacionadas con la cascada de señalización TCR. Jurkat E6.1 libera más IL-2 e IL-8 que posteriormente contribuyen a la activación de las células T y desencadenan las vías inflamatorias. Esta línea celular también es conocida por su hiperfosforilación de Pyk2 y su mayor producción de Vav1, que influye de forma crucial en la reorganización del citoesqueleto de actina en las células T. La segregación del TCR en la línea celular Jurkat E 6-1 también puede mejorarse mediante la expresión forzada de LFA-1 que, en consecuencia, mejora la señalización del TCR y la expresión de IL-2 . Los estudios de proliferación celular y ciclo celular también se llevan a cabo en las líneas celulares Jurkat E6.1. Se han preferido para estudiar las vías apoptóticas y la inducción de daños en el ADN por compuestos derivados de fuentes marinas y vegetales. Un estudio realizado en 2013 evaluó el impacto de los medios condicionados epigonales de tiburón en células humanasutilizando estas líneas celulares. Del mismo modo, el impacto represivo de la hirsutina derivada de plantas sobre la proliferación celular se estudió en líneas celulares Jurkat E6.1. A menudo, los estudios anticancerígenos también utilizan Jurkat E6.1 para evaluar sus dianas seleccionadas. También se ha estudiado en estas líneas celulares la influencia de neurotoxinas marinas como las Brevetoxinas (PbTx).
Estudios sobre el VIH: Una de las aplicaciones más significativas de las líneas celulares Jurkat E6.1 es su capacidad para servir de modelo adecuado para estudios sobre el VIH debido a su propiedad de elegir diferentes eventos de señalización que inducen la TCA. Las líneas celulares Jurkat E6.1 no sólo se han utilizado para comprender la activación del VIH, sino también para diseccionar los mecanismos que subyacen a la latencia del VIH. La replicación y la infección del VIH se han estudiado ampliamente en estas líneas celulares, en las que pueden someterse a edición genética y knockout de genes, como se hizo en un estudio realizado en 2021. El impacto de la administración de fármacos en la infección por VIH, como las nanopartículas híbridas polímero-lípido (PLN) de acción prolongada de efavirenz (Efa)-enfuvirtida (Enf) sobre la entrada vírica utilizadas en líneas celulares Jurkat E6.1. Las células Jurkat E6.1 modificadas con CRISPR/Cas9 se han utilizado en múltiples ocasiones para estudiar los mecanismos implicados en la entrada, replicación e infección del VIH.
4. publicaciones de investigación
He aquí algunos ejemplos notables de la gran colección de investigaciones, incluidas las líneas celulares Jurkat E6.1.
Utilizando Jurkat E6.1, incubadas en diferentes compuestos de selenio para estudiar la expresión de ligandos y la expresión en superficie de MICA/B.
Comprensión de la citotoxicidad inducida por el ácido caracasina en líneas de células T humanas como Jurkat E6.1 y HL-60.
Se utilizó Jurkat E6.1 incubado a largo plazo con el fármaco AZT para estudiar la resistencia a la Azidotimidina (AZT) en pacientes infectados por VIH-1.
Esta investigación utilizó un sistema de análisis de fluorescencia polarizada para comprender el impacto de los bio-indoles, incluyendo serotonina, triptófano y melatonina, sobre la fluidez de la membrana celular en líneas celulares Jurkat E6.1.
El extracto de alcaloidesderivados de Tribulus terristris indujo la apoptosis en células Jurkat E6.1 para comprender el mecanismo de acción subyacente.
La señalización de receptores de células T en células Jurkat E6.1 se mejoró aumentando enérgicamente la expresión de LFA-1.
5. ventajas y limitaciones
Al igual que otras líneas celulares, Jurkat E6.1 tiene sus ventajas y limitaciones.
Ventajas
Hay muchas razones por las que se prefiere en estas aplicaciones:
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Modo de crecimiento
Jurkat E6.1 es una línea celular en suspensión y no adherente, lo que significa que crece en suspensión y no se adhiere a la superficie de cultivo.
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Expresión de genes
La línea celular Jurkat E6.1 expresa genes que codifican la interleucina-2 (IL-2) y CD3. Tras la estimulación con anticuerpos monoclonales, lectinas o ésteres de forbol contra el complejo antigénico T3, se ha demostrado que estas células producen IL-2 amplificada.
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Expresión de antígenos
La línea celular Jurkat E6.1 expresa el antígeno CD3, asociado a la activación y señalización de las células T.
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Marcadores de expresión
La línea celular expresa los marcadores del receptor de antígeno de células T (TCR), que son cruciales en el reconocimiento de células T y la respuesta inmunitaria.
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Aplicabilidad para la transfección
La línea celular Jurkat clon E6.1 es adecuada para experimentos de transfección del huésped, permitiendo la introducción de material genético exógeno en las células para diversos fines de investigación.
Limitaciones
Tras las ventajas, veamos las limitaciones asociadas al uso de la línea celular Jurkat E6.1:
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Transfección celular con vectores virales
La transfección de células Jurkat E6.1 es un reto debido a su origen de células T. Normalmente, para la modificación genética se necesitan vectores virales caros y que requieren mucho tiempo. Los vectores no virales han mostrado una baja eficacia de transfección y una toxicidad significativa en las células Jurkat.
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Contaminación bacteriana
Los cultivos de células Jurkat E6.1 deben vigilarse para detectar una posible contaminación bacteriana que garantice la integridad de los resultados experimentales.
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Contaminación vírica
Las líneas celulares Jurkat E6.1 expresan varios receptores de quimioquinas y bajos niveles de CD4, lo que facilita la entrada de virus. Esto las hace susceptibles a los virus que infectan las células T, como el HTLV y el VIH.
6.recursos: Protocolos, vídeos y más
Esta sección cubrirá los métodos y protocolos para el cultivo celular y la transfección, así como vídeos educativos relacionados con esta línea celular:
Protocolos de cultivo celular
Estos son algunos procedimientos básicos de cultivo que deben seguirse para esta línea celular:
- SOP de Cultivo Celular, Propagación de Jurkat: La Universidad de California también proporcionó un método en su USCS Genome browser para cultivar Jurkat clon E6-1.
- Cultivo y manipulación de Jurkat, clon E6-1: Elabscience incluye un protocolo de cultivo y manipulación en la descripción del producto.
Protocolos de transfección
Aquí está la lista de los diferentes protocolos de transfección disponibles:
- Protocolo de transfección de células Jurkat Reactivo Lipofectamine LTX: Un protocolo de transfección de células Jurkat utilizando el reactivo Lipofectamine LTX, de ThermoFisher.
- Amaxa™ 4D-Nucleofector™ Protocol for Jurkat clone E6.1 [ATCC®]: Lonza Group AG proporcionó el protocolo de transfección para Jurkat clon E6.1 de ATCC utilizando 4D-Nucleofector® X Unit.
Vídeos sobre Jurkat E6.1
Hay varios vídeos excelentes que cubren conceptos de cultivo celular, procedimientos, proliferación, chapado y otros temas.
- Pasaje de células:Conceptos básicos de cultivo celular: Este es un gran video para la guía básica de pasaje de líneas celulares humanas por ThermoFisher.
- Descongelación de células: Fundamentos del cultivo celular: Este video proporciona instrucciones básicas sobre el cultivo celular y descongelación por ThermoFisher.
- Protocolo de Transfección de ADN Plasmídico: Este vídeo se centra en el protocolo de transfección de ADN plasmídico con Lipofectamine® LTX y Plus™ Reagent, de ThermoFisher.
- Medición de la apoptosis utilizando células Jurkat en suspensión tratadas con estaurosporina 3 micromolar: Este vídeo muestra cómo realizar un ensayo de apoptosis en el citómetro de imagen Celigo utilizando reactivos Hoechst y caspasa 3/7 de Nexcelom Bioscience.