Células BV2: la investigación sobre el sistema nervioso central explicada con las células microgliales BV2
BV2 es una línea celular de microglía derivada de ratón ampliamente utilizada en la investigación neurocientífica. Esta línea celular inmortalizada puede servir como modelo in vitro para estudiar enfermedades neurodegenerativas y las condiciones y procesos celulares asociados, como la neuroinflamación. Además, las células BV2 se consideran un sistema modelo alternativo para la microglía primaria.
- Medio de cultivo
- Para el cultivo de la línea celular BV2 se utiliza el medio RPMI 1640. El RPMI para BV2 se complementa con un 10 % de FBS, 2,0 mM de glutamina estable y 2,0 g/L de NaHCO3 para un crecimiento celular óptimo. El medio se renueva de 2 a 3 veces por semana.
- Tiempo de duplicación
- Las células microgliales BV2 crecen muy rápido, con un tiempo de duplicación medio de 34,5 horas.
- Tipo de crecimiento
- BV2 es una línea celular adherente.
- Nivel de bioseguridad
- BSL-1
- Disponible en
- Cytion — Pedir BV2
- Origen y características generales de las células BV2
- Línea celular BV2: Información sobre el cultivo
- Ventajas y limitaciones de las células BV2
- Aplicaciones de la línea celular BV2 en la investigación
- 5. Células BV2: Publicaciones de investigación
- Recursos para la línea celular BV2: protocolos, vídeos y más
- Preguntas frecuentes
Origen y características generales de las células BV2
En esta sección del artículo se explica el origen de la línea celular BV2 y las características generales que la distinguen de otras líneas celulares microgliales. Aquí aprenderás: ¿Qué son las células BV2? ¿De dónde proceden las células BV2? ¿Cuál es el tamaño de una célula BV2?
- La línea celular microglial BV2 se obtuvo a partir de la microglía de ratones C57/BL6 neonatos. La línea celular se inmortalizó infectando las células con el retrovirus J2 portador de los oncogenes v-raf/v-myc [1].
- Las células BV2 no estimuladas presentan una morfología hipertrofiada, similar a la de una ameba. Esta morfología indica un estado altamente activado e inflamatorio de las células BV2 en comparación con la microglía primaria [2].
- El diámetro descrito para la línea celular BV-2 oscila entre 10 y 15 μm.
Línea celular BV2 frente a ECO 2
Ambas son líneas celulares de microglía de ratón, pero se diferencian entre sí. La principal diferencia es que la BV2 fue inmortalizada mediante manipulación genética, mientras que la ECO 2 se inmortalizó espontáneamente. Además, la ECO 2 posee las mismas características generales que la BV2, pero requiere la adición de factor estimulante de colonias 1 (CSF-1) para su cultivo.
Línea celular BV2: Información sobre el cultivo
Antes de manipular y mantener un cultivo de línea celular, es fundamental disponer de información sobre el cultivo celular. Esta sección del artículo le ayudará a conocer todos los puntos clave para el cultivo de líneas celulares BV2. En concreto, hablaremos de lo siguiente: ¿Cuál es el tiempo de duplicación de las células BV2? ¿Qué medios se utilizan para cultivar células BV2? ¿La línea celular BV2 es adherente o en suspensión? ¿Cómo se descongelan las células BV2?
Puntos clave para el cultivo de células BV2
Tiempo de duplicación:
Las células microgliales BV2 crecen muy rápido, con un tiempo de duplicación medio de 34,5 horas.
Adherente o en suspensión:
BV2 es una línea celular adherente.
Proporción de división:
Esta línea celular microglial adherente se subcultiva con una proporción de división de 1:2 a 1:4. Las células se lavan con PBS y se incuban con Accutase (solución de disociación). Tras 10 minutos, se centrifugan y se recogen. A continuación, estas células se añaden a frascos con medio de crecimiento fresco según la proporción de división recomendada.
Medio de cultivo:
Para el cultivo de la línea celular BV2 se utiliza medio RPMI 1640. El medio RPMI para BV2 se suplementa con un 10 % de FBS, 2,0 mM de glutamina estable y 2,0 g/L de NaHCO3 para un crecimiento celular óptimo. El medio se renueva de 2 a 3 veces por semana.
Condiciones de cultivo:
Los cultivos de BV2 se mantienen en una incubadora humidificada a 37 °C con un suministro continuo de 5 % de CO₂.
Almacenamiento:
Los viales de células BV2 congeladas se mantienen a una temperatura inferior a -150 °C, ya sea en la fase de vapor de nitrógeno líquido o en un congelador eléctrico.
Proceso de congelación y medio:
Se recomiendan los medios de congelación CM-1 o CM-ACF para las líneas celulares BV2. Las células se congelan mediante un proceso de congelación lenta que permite solo un descenso de temperatura de 1 °C por minuto para mantener la viabilidad celular.
Proceso de descongelación:
El vial de células BV2 congeladas se agita rápidamente en un baño de agua (37 °C) durante 40 a 60 segundos hasta que quede un pequeño trozo de hielo. A las células descongeladas se les añade medio de crecimiento fresco y se centrifugan para eliminar los componentes del medio de congelación. Las células recogidas se resuspenden de nuevo y se vierten en un frasco de cultivo para su crecimiento.
Nivel de bioseguridad:
Se recomienda el nivel de bioseguridad 1 para el cultivo de la línea celular BV2.
Ventajas y limitaciones de las células BV2
Al igual que otras líneas celulares, las células BV2 también presentan algunas ventajas y limitaciones. A continuación se mencionan algunas de ellas.
Ventajas
Las ventajas de la línea celular BV2 incluyen:
Características similares a las de la microglía primaria
Las células BV2 poseen algunas características similares a las de la microglía primaria y se utilizan como modelo alternativo para estudiar las funciones y respuestas de la microglía. Expresan F4/80, CD11b e Iba1, que son biomarcadores esenciales de la microglía primaria.
Inmortalización
Las células BV2 están inmortalizadas, lo que les permite crecer de forma continua. Esta característica las hace ideales para experimentos de cultivo celular a largo plazo.
Limitaciones
Las limitaciones asociadas a las células BV2 son:
Línea celular de origen murino
La línea celular BV2 se deriva de la microglía de ratón. Los resultados de las investigaciones que utilizan células BV2 pueden tener una aplicabilidad limitada a las enfermedades y la investigación específicas del ser humano.
Modelo in vitro
Las células BV2 sirven como modelo in vitro para estudiar las funciones de la microglía. Sin embargo, es importante señalar que es posible que no reproduzcan plenamente las características y la complejidad de las células de la microglía en el cerebro in vivo.
Aplicaciones de la línea celular BV2 en la investigación
La línea celular BV2 ofrece varias aplicaciones en la investigación neurocientífica. En esta sección se mencionan algunos usos comunes de las células BV2 en la investigación.
Investigación de enfermedades neurodegenerativas: La línea celular microglial murina BV2 es una valiosa herramienta de investigación para estudiar enfermedades neurodegenerativas como la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Alzheimer y la esclerosis múltiple. Los investigadores han estudiado la neurotoxicidad y la patología de la enfermedad y han evaluado agentes terapéuticos utilizando líneas celulares BV2. Por ejemplo, un estudio realizado en 2020 evaluó el efecto antiinflamatorio y neuroprotector de un hidroxistilbeno natural, la raponticina, presente en la planta Rheum rhaponticum, utilizando células BV2 activadas con lipopolisacáridos como modelo de la enfermedad de Parkinson. El compuesto atenúa la activación de las células BV2 mediada por el lipopolisacárido (LPS) al inhibir la óxido nítrico sintasa y reducir las especies reactivas de oxígeno y los mediadores proinflamatorios. En resumen, la raponticina ejerce efectos antiinflamatorios y neuroprotectores en el modelo microglial inducido por LPS (BV2) [3]. De manera similar, un estudio investigó la participación de las vías de señalización en la neuroinflamación. Los investigadores desarrollaron un modelo de inflamación mediante la activación de BV2 mediada por lipopolisacáridos. Descubrieron que el eje de señalización AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κB está implicado en la neuroinflamación. Además, también evaluaron la beta-naftoflavona (BNF), un flavonoide natural, en cuanto a sus efectos antiinflamatorios y neuroprotectores utilizando este modelo. El compuesto ejerció estos efectos terapéuticos al inhibir la activación de BV2 [4]. Del mismo modo, la investigación utilizó células BV2 y estudió el efecto mejorador del fármaco zonisamida sobre la disfunción mitocondrial en las células microgliales. Los hallazgos de este estudio respaldan el uso clínico de la zonisamida para el tratamiento de la enfermedad de Parkinson [5].
5. Células BV2: Publicaciones de investigación
A continuación se presentan algunos estudios de investigación interesantes y muy citados sobre las células BV2.
Esta investigación se publicó en la revista Journal of Alzheimer's Disease (2015). El estudio propuso que la molécula de ADN mitocondrial DAMP (patrón molecular asociado al daño) derivada del daño mitocondrial puede causar cambios inflamatorios en las células microgliales (BV2). Por lo tanto, también pueden contribuir a la neuroinflamación de la enfermedad de Alzheimer.
Este artículo, publicado en FARMACIA (2021), utilizó células BV2 y determinó el efecto terapéutico de la decocción de Huanglian Jiedu (HLJDD) sobre la enfermedad de Alzheimer. El estudio descubrió que la HLJDD promueve la fagocitosis de beta-amiloide en las BV2 al aumentar la expresión de la proteína Trm2, tal y como se validó mediante el análisis Western blot de las BV2.
La alfa-sinucleína activa las microglías BV2 en función de su estado de agregación
Este artículo de investigación publicado en Biochemical and Biophysical Research Communications (2016) propuso que la alfa-sinucleína, una proteína soluble en el sistema nervioso central adulto, puede activar las células BV2 dependiendo de su estado de agregación.
Esta investigación se publicó en Neuroscience Letters en 2013. Este estudio afirma que los exosomas secretados por las células microgliales BV2 activadas por la alfa-sinucleína pueden ser mediadores esenciales de la neurodegeneración en la enfermedad de Parkinson.
Este estudio se publicó en Frontiers Cellular Neuroscience (2019). En él se propone que la idebenona, un antioxidante, modula la polarización microglial y reduce la inflamación en células BV2 activadas por lipopolisacáridos y en un modelo murino de la enfermedad de Parkinson inducida por 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP).
Recursos para la línea celular BV2: protocolos, vídeos y más
Los recursos en línea disponibles sobre BV2 son limitados. A continuación se enumeran algunos de ellos.
- Subcultivo de la línea celular BV2: este enlace web contiene un breve protocolo para el subcultivo de líneas celulares BV2.
- Descongelación de células congeladas: este vídeo le ayuda a aprender el protocolo básico para descongelar y cultivar células congeladas.
Aquí se menciona el protocolo de cultivo celular para las células BV2.
- Cultivo de células BV2: este enlace a un sitio web contiene el protocolo de cultivo de células BV2. Además, también proporciona las composiciones de los medios de cultivo celular y de congelación para la línea celular BV2.
Referencias
- Wang, Y., Y. Peng y H. Yan, Comentario: Modelos de cultivo celular in vitro neuroinflamatorios y sus posibles aplicaciones para los trastornos neurológicos. Front Pharmacol, 2021. 12: p. 792614.
- Sarkar, S., et al., Caracterización y análisis comparativo de un nuevo modelo de células microgliales de ratón para el estudio de los mecanismos neuroinflamatorios durante agresiones neurotóxicas. Neurotoxicology, 2018. 67: p. 129-140.
- Zhao, F., et al., Efecto neuroprotector de la raponticina contra la enfermedad de Parkinson: conclusiones del modelo BV-2 in vitro y del modelo in vivo en ratones inducido por MPTP. Journal of Biochemical and Molecular Toxicology, 2021. 35(1): p. e22631.
- Gao, X., et al., La beta-naftoflavona inhibe la inflamación inducida por LPS en células BV-2 a través del eje de señalización AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κB. Immunobiology, 2020. 225(4): p. 151965.
- Tada, S., et al., La zonisamida mejora la mitocondriopatía microglial en modelos de la enfermedad de Parkinson. Brain Sciences, 2022. 12(2): p. 268.