Células ARPE-19 - Mirada especializada en la investigación de las células epiteliales pigmentarias de la retina con ARPE-19
LasARPE-19 son células epiteliales pigmentarias de la retina derivadas espontáneamente de seres humanos. Se utilizan para estudiar diversos aspectos de la biología de la retina, condiciones patológicas e intervenciones terapéuticas (farmacología). El objetivo de este artículo es proporcionar una visión completa de las células inmortalizadas ARPE-19. Principalmente, se discutirán las características generales, las condiciones de cultivo y las diversas aplicaciones de investigación de la línea celular. Por lo tanto, al leerlo, obtendrá un conocimiento profundo de:
- Células ARPE-19: Origen y atributos generales
- Línea celular ARPE-19: Información sobre el cultivo
- Ventajas y limitaciones de las células ARPE-19
- Aplicaciones de la línea celular ARPE-19 en investigación
- Células ARPE-19: Publicaciones de investigación
- Recursos para la línea celular ARPE-19: Protocolos, vídeos y más
1. Células ARPE-19: Origen y atributos generales
Conocer el origen y los atributos generales de una línea celular es imprescindible para su uso eficaz en investigación. Esta sección del artículo cubrirá toda la información sobre la línea celular ARPE. Por ejemplo, ¿Qué es la línea celular ARPE-19? ¿Por qué utilizar células ARPE-19? ¿Qué es la línea celular ARPE-19/HPV-16? ¿Son inmortales las células ARPE-19? ¿Cuál es la morfología y el tamaño de las células ARPE-19?
- La línea de células epiteliales pigmentarias de la retina inmortalizadas, ARPE-19, se derivó de los ojos de un hombre de 19 años que murió a causa de un traumatismo craneoencefálico en un accidente. Fue creada por Amy Aotaki-Keen en 1986.
- Estas células expresan marcadores de células epiteliales del pigmento retiniano, es decir, CRALBP y RPE-65, lo que sugiere que pueden formar monocapas estables caracterizadas por una polaridad morfológica y funcional.
- Las células ARPE-19 poseen una morfología similar a la de las células epiteliales.
- Las células ARPE-19 presentan en su mayoría un cariotipo normal, excepto por una deleción y una adición en el brazo largo de los cromosomas 9 y 19, respectivamente. Además, también se observan algunas aneuploidías [1].
2.línea celular ARPE-19: Información sobre el cultivo
La información básica sobre el cultivo celular es crucial para manipular y mantener correctamente una línea celular. Esta sección le ayudará a conocer los puntos clave para el cultivo de la línea celular ARPE-19. Sabrá: ¿Qué es el tiempo de duplicación de ARPE-19? ¿Cuál es la densidad de siembra de ARPE-19? ¿Cuál es la densidad celular de ARPE-19? ¿Qué es el medio de congelación ARPE-19? ¿Cómo se cultiva la línea celular ARPE-19?
Puntos clave para el cultivo de células ARPE-19
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Tiempo de duplicación de la población: |
El tiempo de duplicación de ARPE-19 es de aproximadamente 55- 65 horas. Pueden llegar a duplicarse hasta 48 veces. |
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Adherentes o en suspensión: |
ARPE-19 es una línea celular adherente. |
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Proporción de subcultivo: |
La proporción de subcultivo de ARPE-19 es de 1:3 a 1:5. Las células adherentes se enjuagan con 1x PBS y se incuban con solución de disociación, accutasa, durante 8 a 10 min. Las células desprendidas se añaden con medio fresco y se centrifugan. El sedimento celular se resuspende de nuevo y se vierte en un matraz de cultivo con medio fresco. |
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Medio de crecimiento: |
Para cultivar la línea celular ARPE-19 se utiliza DMEM o medio F12 de Ham. El medio ARPE-19 se complementa con un 5% de FBS, 3,1 g/L de glucosa, 15 mM de HEPES, 1,6 mM de L-glutamina, 1,0 mM de piruvato sódico y 1,2 g/L de NaHCO3. El medio se sustituye de 2 a 3 veces por semana. |
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Condiciones de crecimiento: |
Las células ARPE-19 se mantienen en una incubadora humidificada a 37°C de temperatura con un aporte de CO2 del 5%. |
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Almacenamiento: |
La línea celular puede almacenarse en la fase de vapor de nitrógeno líquido o a una temperatura inferior a -150°C para proteger la viabilidad de las células a largo plazo. |
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Proceso y medio de congelación: |
Como medio de congelación de ARPE-19 se utilizan CM-1 o CM-ACF. Brevemente, las células se congelan mediante un método de congelación lenta que sólo permite una disminución de la temperatura de 1 °C por minuto y protege a las células del choque. |
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Proceso de descongelación: |
Las células se descongelan en un baño de agua preajustado a 37 °C. Una vez que queda un pequeño grumo de hielo, las células se añaden a medio de cultivo fresco y se centrifugan. Esto elimina los elementos del medio de congelación. A continuación, se resuspende el sedimento celular y se dispensan las células en un matraz para su cultivo. |
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Nivel de bioseguridad: |
Las células ARPE-19 se manipulan en laboratorios de bioseguridad 1. |
3.ventajas y limitaciones de las células ARPE-19
Las células ARPE-19 se utilizan ampliamente en los estudios de biología celular de la retina. Al igual que otras células, también presentan algunas ventajas y limitaciones. En esta sección se enumeran algunas de ellas:
Ventajas
Las principales ventajas de la línea celular ARPE-19 incluyen:
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Modelo celular de retina |
Las células ARPE-19 se asemejan mucho a las células epiteliales pigmentarias de la retina humana, lo que las hace ideales para el estudio de enfermedades de la retina y el ensayo de fármacos. |
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Tasa de crecimiento estable |
Estas células presentan un crecimiento estable y pueden mantenerse durante periodos prolongados, lo que facilita los experimentos a largo plazo. |
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Facilidad de transfección |
La línea celular ARPE-19 es un excelente huésped de transfección, ampliamente utilizado tanto en estudios de expresión transitoria como estable. |
Limitaciones
A continuación se exponen algunas limitaciones asociadas a la línea celular ARPE-19:
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Diferenciación limitada |
La diferenciación de ARPE-19 es limitada en comparación con las células retinianas primarias. Esto puede afectar potencialmente a determinados estudios relacionados con la diferenciación. |
4.aplicaciones de la línea celular ARPE-19 en investigación
La línea celular ARPE-19 tiene numerosas aplicaciones en la investigación de la retina. Aquí hemos hablado de algunos usos específicos y significativos de esta línea celular epitelial pigmentaria de la retina en investigación.
- Investigación de enfermedades de la retina: Las células ARPE-19 ofrecen valiosos conocimientos sobre la patogénesis de la retina. Los investigadores utilizan las células para investigar los mecanismos de las enfermedades y los posibles tratamientos. Un estudio realizado en 2020 descubrió que el ARN circular hsa_circ_0041795 interactúa con miARN-646 y VEGFC para facilitar la lesión inducida por glucosa elevada en células epiteliales pigmentarias de retina humanas ARPE-19. Por tanto, el estudio propone este ARN circular como diana terapéutica y diagnóstica eficaz para combatir la retinopatía diabética [2]. Del mismo modo, Jing Yang y sus colegas utilizaron células ARPE-19 y proporcionaron información sobre la patogénesis de la retinopatía diabética. Estudiaron que la inhibición del lncRNA SNHG1 (Small Nucleolar RNA Host Gene 1) puede suprimir la respuesta inflamatoria y la transición epitelial a mesenquimal de las células ARPE-19 tratadas con glucosa alta [3].
- Análisis de fármacos: Las células ARPE-19 se utilizan para evaluar la eficacia y seguridad de fármacos y compuestos, ayudando a desarrollar tratamientos o terapias para enfermedades de la retina. Por ejemplo, un estudio realizado en 2019 descubrió los efectos protectores de los bioactivos de Syzygium malaccense contra el estrés inducido por peróxido de hidrógeno en células epiteliales pigmentarias de la retina humana, ARPE-19 [4]. A continuación, un estudio descubrió el papel terapéutico del extracto de Prunella vulgaris var. L contra la lesión inducida por la luz azul en células ARPE-19 y en un modelo de ratón [5].
5.células ARPE-19: Publicaciones de investigación
Las siguientes son algunas publicaciones de investigación interesantes sobre las células epiteliales pigmentarias de la retina ARPE-19.
Evaluación de las respuestas de microRNA en células ARPE-19 frente al estrés oxidativo
Este artículo de investigación se publicó en 2018 en la revista Cutaneous and Ocular Toxicology. Este estudio evaluó la expresión de miRNA en respuesta al estrés oxidativo inducido en células epiteliales pigmentarias de la retina humana ARPE-19 mediante el tratamiento con peróxido de hidrógeno.
Esta publicación en el World Journal of Stem Cells (2021) propuso que el medio condicionado de las células ARPE-19 contiene factores de crecimiento que favorecen la diferenciación neural de las células madre mesenquimales derivadas de tejidos adiposos.
Este estudio se publicó en la revista International Journal of Molecular Sciences (2019). Afirma que la quercetina protege la liberación estimulada por IL-1β de quimiocinas en células ARPE-19 al prevenir la activación de las cascadas MAPK y NF-κB para mejorar la respuesta inflamatoria.
Este artículo de investigación fue publicado en el International Journal of Molecular Sciences (2018). Este estudio evaluó los posibles efectos del estrés oxidativo y la inflamación en las funciones de SIRT1 (Sirtuina 1) y DNMTs (ADN metiltransferasas), así como en la metilación de LINE-1 (elemento nuclear intercalado largo-1) en células ARPE-19.
Este artículo en Antioxidants (2022) descubrió que los extractos florales de Chrysanthemum boreale ejercen efectos protectores contra el daño retiniano inducido por N-retinilideno-N-retiniletanolamina (A2E) en células ARPE-19.
6.recursos para la línea celular ARPE-19: Protocolos, vídeos y más
ARPE-19 es una línea celular epitelial retiniana ampliamente utilizada. Aquí se enumeran los recursos disponibles que cubren los protocolos de cultivo y transfección de células ARPE-19:
- Transfección de ARPE-19: Este vídeo es una guía paso a paso para aprender el protocolo de transfección de la línea celular ARPE-19.
Aquí encontrará algunos recursos que describen el protocolo de cultivo de células ARPE-19:
- Protocolo de cultivo de células ARPE-19: Este enlace contiene información sobre el cultivo y mantenimiento de células ARPE-19. Incluye información sobre el medio ARPE-19, las condiciones de cultivo, los protocolos de subcultivo y la manipulación de cultivos proliferativos y crioconservados.
Referencias
- Schnichels, S., et al., Retina in a dish: Cultivos celulares, explantes de retina y modelos animales para enfermedades comunes de la retina. Progress in retinal and eye research, 2021. 81: p. 100880.
- Sun, H. and X. Kang, hsa_circ_0041795 contributes to human retinal pigment epithelial cells (ARPE 19) injury induced by high glucose via sponging miR-646 and activating VEGFC. Gene, 2020. 747: p. 144654.
- Yang, J., et al., Silenced SNHG1 Inhibited Epithelial-Mesenchymal Transition and Inflammatory Response of ARPE-19 Cells Induced by High Glucose. J Inflamm Res, 2021. 14: p. 1563-1573.
- Arumugam, B., et al., Efecto protector de los derivados de miricetina de Syzygium malaccense contra el estrés inducido por peróxido de hidrógeno en células ARPE-19. Visión molecular, 2019. 25: p. 47.
- Kim, J., K. Cho, y S.-Y. Choung, Efecto protector del extracto de Prunella vulgaris var. L contra los daños inducidos por la luz azul en células ARPE-19 y retina de ratón. Biología y Medicina de Radicales Libres, 2020. 152: p. 622-631.