A375-Zelllinie - Ein Leitfaden für die Melanomforschung

A375 ist eine humane Melanomzelllinie, die in der Toxikologie und in der immunonkologischen Forschung weit verbreitet ist. Forscher setzen diese Zelllinie ein, um die Krebsbiologie und Signalwege zu untersuchen, potenzielle Krebsmittel zu testen oder zu screenen und neue und wirksame Therapeutika zu entwickeln.

Herkunft und allgemeine Merkmale von A375-Zellen

Die Kenntnis der Herkunft und der allgemeinen Merkmale einer Zelllinie kann Ihnen helfen, ihre Verwendung in der Forschung zu planen. Dieser Abschnitt des Artikels befasst sich mit dem Ursprung und den Merkmalen der A375-Zelllinie. Was ist zum Beispiel die A375-Zelllinie? Was sind die Merkmale der A375-Zelllinie? Woher stammen die A375-Zellen? Wie sieht die Morphologie der A375-Melanomzellen aus? Wie groß ist die A375-Zelle?

Die Hautkrebszelllinie A375 stammt aus der Explantatkultur eines soliden Tumors einer 54-jährigen Frau mit malignem Melanom [1].
A375-Zellen haben eine epithelähnliche Morphologie.
Die Größe der A375-Zellen ist im Vergleich zu anderen Zelllinien relativ gering. Sie haben etwa einen Durchmesser von 12 µm.
Die A375-Melanomzellen sind hypotriploid. Die modale Chromosomenzahl für diese Zelllinie beträgt 62. Normalerweise hat jede Zelle neun Markerchromosomen und eine Kopie der normalen Chromosomen N2, N6 und N22.

Ein Arzt untersucht die Wucherungen auf der Haut eines Erwachsenen auf Hautkrebs.

A375-Zellen: Informationen zur Zellkultur

A375-Zellkulturen sind einfach zu pflegen. Sie stellen keine besonderen Anforderungen an die Zellkultur. In diesem Abschnitt finden Sie die notwendigen Informationen zur Zellkultur. Zum Beispiel: Was ist die A375 Verdopplungszeit? Was sind die Medien der A375-Zelllinie? Wie hoch ist die Aussaatdichte von A375? Sind A375-Melanomzellen adhärent?

Wichtige Punkte für die Kultivierung von A375-Zellen

Verdopplungszeit der Population:	Die Verdopplungszeit von A375 beträgt 20 Stunden.
Adhärent oder in Suspension:	A375 ist eine adhärente humane Melanomzelllinie.
Aussaat-Dichte:	eine^Zelldichtevon 1 x¹⁰⁴ Zellen/cm2 ist ideal für A375-Zellkulturen. Adhärente Zellen werden mit 1 x Phosphatpuffersalzlösung (PBS) gespült und mit Passagenlösung (Accutase) inkubiert. Anschließend wurden die Zellen mit Kulturmedien versetzt und zentrifugiert. Die geernteten Zellen wurden in einem Kulturmedium resuspendiert und zum Wachstum in neue Flaschen verteilt.
Wachstumsmedium:	DMEM wird als ideales A375-Medium empfohlen, wenn es mit 10 % fötalem Rinderserum (FBS), 4,5 g/L Glucose, 1,5 g/L NaHCO3, 4 mM L-Glutamin und 1,0 mM Natriumpyruvat ergänzt wird. Das A375-Medium sollte 2-3 Tage pro Woche erneuert werden.
Wachstumsbedingungen:	A375-Melanomzellen werden in einem befeuchteten Inkubator (37°C) mit einer 5%igen CO2-Zufuhr gezüchtet.
Lagerung:	Eingefrorene A375-Zellen sollten unter -150°C in der Dampfphase von Flüssigstickstoff oder in einem elektrischen Gefrierschrank aufbewahrt werden.
Einfrierverfahren und Medium:	Zum Einfrieren der A375-Zelllinie werden CM-1- oder CM-ACF-Medien verwendet. Um die Lebensfähigkeit der Zellen zu schützen, wurde ein langsamer Gefrierprozess gewählt, der eine allmähliche Temperatursenkung um 1 °C ermöglicht.
Auftauprozess:	Das Fläschchen mit den gefrorenen A375-Melanomzellen wird 40 bis 60 Sekunden lang im Wasserbad geschüttelt, bis nur noch ein kleiner Eisklumpen übrig ist. Die Zellen werden mit frischem Medium versetzt und zentrifugiert, um gefrierende Medienbestandteile zu entfernen. Das erhaltene Zellpellet wird erneut resuspendiert und in neue Flaschen gefüllt.
Biosicherheitsstufe:	A375-Kulturen werden in Labors der Biosicherheitsstufe 1 gehandhabt und gepflegt.

Konfluente Schicht adhärenter A375-Zellen bei 20facher Vergrößerung.

Vorteile und Beschränkungen der A375-Zelllinie

Wie andere Zelllinien weist auch die A375-Melanomzelllinie eine einzigartige Kombination von Vorteilen und Einschränkungen auf, die sie zu einem wertvollen Instrument für die Melanomforschung machen. In diesem Abschnitt werden nur einige wichtige Vor- und Nachteile der A375-Zelllinie aufgeführt.

Vorteile

Die wichtigsten Vorteile der A375-Zellen sind im Folgenden aufgeführt:

Melanom-Tumormodell: Die A375-Zelllinie wurde aus einem malignen Melanomtumor gewonnen und dient daher als wertvolles Tumormodell für die Untersuchung der Melanombiologie und therapeutischer Maßnahmen. Diese Zellen weisen melanomähnliche Eigenschaften auf, wie eine hohe Proliferationsrate und Invasivität.
Tumorigenität: A375-Zellen sind hochgradig tumorigen, d. h. sie können Tumore bilden. Es wird berichtet, dass A375-Zellen in NIH-Swiss-Mäusen, die mit Anti-Thymozyten-Serum (einem immunsuppressiven Mittel) behandelt wurden, aggressive amelanotische Melanome erzeugen.
Gut charakterisiert: A375 ist eine genetisch gut charakterisierte Zelllinie. Sie besitzt spezifische genetische Mutationen wie das Melanom. Zu den A375-Mutationen gehört die A375-BRAF-Genveränderung, die sie empfindlich gegenüber BRAF-spezifischen Inhibitoren macht. Dieses genetische Profil macht A375-Zellen zu einem hervorragenden Krebsforschungsinstrument für die Untersuchung der zugrunde liegenden molekularen Signalwege und gezielten Therapien.

Beschränkungen

Die mit A375-Zellen verbundenen Einschränkungen sind:

In-vitro-Beschränkungen: A375 ist ein In-vitro-Tumormodell. Obwohl es die Merkmale des Melanoms nachahmt, kann es die Komplexität von Melanomtumoren nicht vollständig darstellen. Daher ist bei der Verallgemeinerung von In-vitro-Ergebnissen auf klinische Studien Vorsicht geboten.

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Forschungsanwendungen der A375-Zelllinie

Die A375-Zelllinie wird in der Krebsforschung umfassend eingesetzt. Nachfolgend sind einige der Bereiche aufgeführt, in denen A375-Zellen häufig verwendet werden.

Krebsforschung: A375-Zellen werden häufig in der Melanomforschung eingesetzt. Forscher verwenden diese Zellen, um die Biologie des Hautkrebses, die Prozesse und die zugrundeliegenden Zellsignalmechanismen zu untersuchen, einschließlich Zellproliferation, Migration und Invasion. Dies kann den Forschern auch helfen, neue molekulare therapeutische Ziele zu identifizieren. In einer Studie von Lin Zhu und Kollegen aus dem Jahr 2019 wurden hochaggressive Melanomzellen A375 verwendet und die Rolle der microRNA-3662 auf das Wachstum und die Invasion von A375-Melanomzellen untersucht. Die Studienergebnisse besagen, dass microRNA-3662 auf das ZEB1-Gen abzielt und das Melanomzellwachstum in vitro und in vivo im A375-Tumormodell reguliert [2]. In ähnlicher Weise ergab eine 2018 durchgeführte Untersuchung, dass PI3K/AKT- und MAPK/ERK-Signalwege an der Proliferation und Metastasierung der A375-Zelllinie beteiligt sind [3].
Entdeckung und Prüfung von Medikamenten: Die A375-Zelllinie ist ein nützliches In-vitro-Tumormodell zum Testen und Screenen potenzieller Krebsmedikamente. Forscher bewerten die Toxizität und Wirksamkeit neuartiger chemotherapeutischer Wirkstoffe, Verbindungen und anderer Therapien anhand dieser A375-Melanomzellen. In einer Studie wurden beispielsweise die krebshemmenden Eigenschaften von aus Grapefruit gewonnenen Mikro- und Nanovesikeln auf menschliche A375-Melanomzellen untersucht. Die Ergebnisse zeigten, dass die Mikro- und Nanopartikel einen Zellzyklusstillstand und Apoptose auslösen und die Genexpression bei der Zellproliferation, Migration und Invasion hemmen [4].

A375-Zellen: Veröffentlichungen

Hier werden einige wichtige Forschungspublikationen erwähnt, die sich mit A375-Zellen befassen.

Vitamin D und seine kalzemischen Analoga modulieren die krebshemmenden Eigenschaften von Cisplatin und Dacarbazin in der menschlichen Melanom-Zelllinie A375

Diese Studie wurde 2019 im Journal of Oncology veröffentlicht. Die Studie schlug vor, dass die Ko-Behandlung mit Vitamin D und Analoga die krebshemmende Wirkung von Cisplatin und Dacarbazin in A375-Melanomzellen verbessert.

In-vitro-Bewertung der Anti-Melanom-Wirkung (A375-Zelllinie) von Gel- und Ganzblattextrakten ausgewählter Aloe-Arten

Diese Forschungsarbeit wurde 2022 im Journal of Herbal Medicine veröffentlicht. Diese Studie untersuchte die Anti-Melanom-Wirkung von Aloe-Vera-Gel in A375-Melanomzellen.

Das Mitglied der Fermitin-Familie 2 fördert die Melanomprogression, indem es die Bindung von p-α-Pix an Rac1 zur Aktivierung des MAPK-Signalwegs verstärkt

In dieser Studie in Oncogene (2021) wird vorgeschlagen, dass das Fermitin-Familienmitglied 2 (FERMT2 oder kindlin-2) das Fortschreiten des Melanoms durch die Aktivierung von MAPK über die Bindung an p-α-Pix und Rac1 fördert.

FARP1 fördert die Zellproliferation durch Modulation des MAPK-Signalwegs beim kutanen Melanom

Diese Studie, die im American Journal of Dermatopathology (2019) veröffentlicht wurde, legt nahe, dass FARP1 die Entwicklung und das Fortschreiten des kutanen Melanoms fördern kann. Daher kann es ein nützliches therapeutisches Ziel sein.

Zytotoxisches und apoptotisches Potenzial von Extrakten aus Phyllodium elegans auf menschliche Krebszelllinien

Dieser Forschungsartikel wurde in Bioengineered (2019) veröffentlicht. Diese Studie untersuchte die zytotoxische und apoptotische Aktivität eines pflanzlichen Phyllodium elegans-Extrakts auf menschliche Karzinomzelllinien, einschließlich A375.

Ressourcen für die A375-Zelllinie: Protokolle, Videos und mehr

Im Folgenden finden Sie einige Online-Ressourcen, die sich mit A375-Zellen befassen.

Transfektion von A375-Zellen: Dieses Video-Tutorial hilft Ihnen, die Transfektion von A375-Zellen Schritt für Schritt zu erlernen.
Zellkultivierung: Dieses Video enthält sehr nützliche Informationen zur Kultivierung von Zelllinien.

Die Zellkulturprotokolle für A375-Zellen sind hier aufgeführt.

A375-Zelllinie: Dieser Link enthält nützliche Informationen über die Kultivierung und Pflege der A375-Zelllinie, einschließlich der A375-Medien und der Handhabung von gefrorenen und proliferierenden A375-Kulturen.

Häufig gestellte Fragen (FAQ) für A375-Zellen

Referenzen

Avram, S., et al., Standardization of A375 human melanoma models on chicken embryo chorioallantoic membrane and Balb/c nude mice. Oncol Rep, 2017. 38(1): p. 89-99.
Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 zielt auf ZEB1 und dämpft die Invasion der hochaggressiven Melanomzelllinie A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: p. 5845-5856.
Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C inhibiert die Proliferation und Metastasierung von A375-Melanomzellen durch Unterdrückung der PI3K/Akt- und MAPK/ERK-Signalwege. Life Sciences, 2018. 206: p. 35-44.
Stanly, C., et al., Grapefruit-derived micro and nanovesicles show distinct metabolome profiles and anticancer activities in the A375 human melanoma cell line. Cells, 2020. 9(12): p. 2722.