HROHep03 Celler

Cytions Freeze Medium CM-1 er et topmoderne kryopræserveringsmedium, der er designet til at sikre det højeste niveau af cellelevedygtighed og funktionalitet efter optøning. Dette alsidige medium er velegnet til et bredt spektrum af celletyper, herunder både humane og animalske celler, hvilket gør det til et vigtigt værktøj til forskellige forskningsapplikationer. Freeze Medium CM-1 er formuleret med en omhyggeligt afbalanceret kombination af kryobeskyttelsesmidler og essentielle næringsstoffer og minimerer dannelsen af iskrystaller og cellulær stress under fryseprocessen, så den cellulære integritet bevares.
De vigtigste funktioner i Freeze Medium CM-1 omfatter:

Bred kompatibilitet: Effektivt til en lang række celletyper, herunder primære celler, stamceller og etablerede cellelinjer.
Høj levedygtighed: Optimeret til at maksimere gendannelse og levedygtighed af celler efter optøning, hvilket sikrer pålidelige eksperimentelle resultater.
Klar til brug: Praktisk forberedt og steriliseret til øjeblikkelig anvendelse, hvilket reducerer forberedelsestiden og risikoen for kontaminering.
Forbedret stabilitet: Opretholder en ensartet ydeevne under standard kryopræserveringsforhold, hvilket sikrer reproducerbare resultater.
Lang holdbarhed: CM-1 er et serumholdigt kryopræserveringsmedium, der er klar til brug, og som kan opbevares i køleskabet i op til et år.


Brug af CM-1 til nedfrysning af celler

Følg disse trin for at bruge CM-1 til nedfrysning af både adhærente og suspenderede celler

For adhærente celler skal de vaskes og adskilles fra kultursubstratet. For suspensionsceller skal du fortsætte direkte til næste trin.
Tæl cellerne for at sikre, at de har den rette koncentration.
Centrifuger cellerne for at pelleter dem, og resuspender dem derefter i CM-1-frysemedium.
Overfør de resuspenderede celler til cryovials.
Brug en langsom nedfrysningsmetode, før du overfører cellerne til langtidsopbevaring





Metode
Beskrivelse
Skridt





❄️
Manuel nedfrysning

En trinvis metode, der involverer gradvis temperatursænkning for at sikre cellernes levedygtighed

1️⃣ Anbring cellerne i frysemediet i en fryser på 4 °C i 40 minutter.
2️⃣ Overfør til en fryser på -80 °C i 24 timer.
3️⃣ Opbevar cellerne i flydende nitrogen til langtidsopbevaring



❄️
Brug af Mr. Frosty

En praktisk anordning, der giver mulighed for kontrollerede frysehastigheder uden elektrisk strøm

1️⃣ Forbered celler i kryovialer med frysemedium.
2️⃣ Placer kryovials i Mr. Frosty-beholderen.
3️⃣ Opbevar ved -80 °C i 24 timer, før de overføres til flydende nitrogen



❄️
Fryser med kontrolleret hastighed

En højpræcisionsfryser fra Thermo Fisher eller andre producenter, der er designet til kontrolleret temperatursænkning

1️⃣ Programmer enheden til gradvist at sænke temperaturen.
2️⃣ Placer de forberedte celler i fryseren.
3️⃣ Efter frysecyklussen overføres cellerne til flydende nitrogen









Opbevar kryovialerne ved temperaturer under -130 °C eller i flydende kvælstof til langtidsopbevaring.


Ingredienser

Indeholder FBS, DMSO, glukose, salte
Bufferkapacitet: pH = 7,2 til 7,6


Cytions Freeze Medium CM-1 er en pålidelig løsning til kryopræservering, der sikrer høj cellelevedygtighed og funktionalitet efter optøning til en lang række forskningsformål.

DMEM:Ham's F12 er et bredt anerkendt og meget udbredt basismedium inden for cellekultur til biologisk forskning. Det fungerer som en grundlæggende næringskilde for væksten af forskellige pattedyrscellelinjer, især når det tilsættes føtal bovint serum (FBS).

Denne unikke formulering kombinerer Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM) og Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) i et præcist forhold på 1:1. Tilsætningen af L-glutamin forbedrer sammensætningen yderligere.

DMEM, der stammer fra Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), tilbyder en øget koncentration af aminosyrer og vitaminer sammenlignet med sin forgænger. I modsætning hertil er Ham's F-12 baseret på Ham's F-10-medium, hvilket giver et komplementært sæt af essentielle komponenter.

For at understøtte optimal cellevækst er det almindelig praksis at supplere DMEM:Ham's F12 med FBS i en typisk koncentration på 5-10 %. Denne tilsætning er nødvendig, da mediet mangler væksthormoner, lipider og proteiner, der er afgørende for celleudviklingen.

DMEM:Ham's F12 indeholder et pH-buffersystem og tilsættes ofte fenolrødt, en pH-indikator. Dyrkede celler i DMEM:Ham's F12 eller ethvert medium, der anvender bicarbonatbuffersystemet, kræver et kontrolleret CO2-miljø på 5-10 % for at opretholde passende pH-niveauer. 


Kvalitetskontrol

Sterilfiltreret


Opbevaring og holdbarhed

Opbevares ved +2 °C til +8 °C, beskyttet mod lys.
Når produktet er åbnet, skal det opbevares ved 4 °C og bruges inden for 6–8 uger.


Forsendelsesbetingelser

Omgivelsestemperatur


Opbevaring

Opbevares i køleskab ved +2 °C til +8 °C i mørke. Undgå frysning og hyppig opvarmning til +37 °C, da dette nedsætter produktets kvalitet.
Mediet må ikke opvarmes til over 37 °C, og der må ikke anvendes ukontrollerede varmekilder, såsom mikrobølgeovne.
Hvis kun en del af mediet skal bruges, skal den nødvendige mængde tages ud og opvarmes til stuetemperatur før brug.


Sammensætning



Kategori
Bestanddele
Koncentration (mg/L)


Aminosyrer
Glycin
18,75


L-alanin
4,45


L-arginin-HCl
147,50


L-asparagin H₂O
7,50


L-asparaginsyre
6,65


L-cystein HCl H₂O
17,56


L-cystin 2 HCl
31,29


L-glutaminsyre
7,35


L-glutamin
365,00


L-histidin-HCl-H₂O
31,48


L-isoleucin
54,47


L-leucin
59,05


L-lysin-HCl
91,25


L-methionin
17,24


L-phenylalanin
35,48


L-prolin
17,25


L-serin
26,25


L-threonin
53,45


L-tryptofan
9,02


L-tyrosin 2 Na 2 H2O
55,79


L-valin
52,85


Vitaminer
D-biotin
0,0035


Cholinchlorid
8,98


D-calciumpantothenat
2,24


Folinsyre
2,66


myo-inositol
12,60


Nikotinamid
2,02


Pyridoxin-HCl
0,031


Pyridoxal-HCl
2,00


Riboflavin
0,219


Thiamin-HCl
2,17


Vitamin B12
0,68



Uorganiske salte
CaCl2 2 H2O
154,50


CuSO4 5 H2O
0,0013


Fe(NO3)3 9 H2O
0,05


FeSO4 7 H2O
0,417


KCl
311,80


MgCl2 6 H2O
61,20


MgSO4 7 H2O
100,00


NaCl
6996,00


NaHCO3
1200,00


Na2HPO4
71,02


NaH2PO4 2 H2O
70,87


ZnSO4 7 H2O
0,432



Andre komponenter
D-glukose
3151,00


Hypoxanthin
2,40


HEPES
3574,50


Linolsyre
0,042


Lipoinsyre
0,105


Fenolrødt natriumsalt
8,63


Putrescin-2-HCl
0,081


Natrium-pyruvat
55,00


Thymidin
0,365

Accutase-cellefrigørelsesvæske med EDTA og fenolrød – 100 ml

Accutase er en brugsklar, sterilt filtreret celleafløsningsopløsning, der er udviklet som et skånsomt alternativ til trypsin/EDTA til at adskille vedhæftede pattedyrceller fra standard plastudstyr til vævskultur og overflader med vedhæftningsbelægning. Den kombinerer proteolytisk og kollagenolytisk enzymaktivitet i en afbalanceret saltopløsning for at sikre en effektiv, men kontrolleret adskillelse, der bevarer proteinerne på celleoverfladen og understøtter høj levedygtighed efter passage samt hurtig genvedhæftning.

Accutase-formuleringen er baseret på Dulbeccos phosphatbufferede saltvand (DPBS) med EDTA og fenolrødt som visuel pH-indikator. Enzymerne er af ikke-pattedyr
- og ikke-bakteriel oprindelse, hvilket gør Accutase særligt velegnet til stamcelleforskning, vaccinearbejdsgange og enhver anvendelse, hvor forurening fra dyr eller mikroorganismer skal minimeres. Opløsningen hæmmer sig selv ved 37 °C, så der kræves ingen neutraliserende reagens eller serumholdigt medium efter løsningen – cellerne kan overføres direkte til frisk medium.

Nøglefunktioner

Klar til brug 1x sterilt filtreret væske – ingen fortynding eller rekonstituering kræves
Kombineret proteolytisk og kollagenolytisk enzymaktivitet for skånsom dissociation
Hvert parti er standardiseret til en defineret dissociationsaktivitet for konsistens fra parti til parti
Enzymer af ikke-pattedyr og ikke-bakteriel oprindelse
Selvhæmmer ved 37 °C – ingen neutraliserende opløsning nødvendig
Formuleret i Dulbeccos PBS med EDTA
Fenolrødt inkluderet som visuel pH-indikator
pH 6,8 – 7,8


Typiske anvendelser
Accutase adskiller skånsomt en lang række adhærente og følsomme celletyper, herunder humane embryonale stamceller (hESCs), humane inducerede pluripotente stamceller (iPSCs), neurale stamceller, primære neuroner og rutinemæssigt dyrkede adhærente cellelinjer såsom HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 og A549. Typiske anvendelsestilfælde omfatter:

Rutinemæssig subkultur og passering af adhærente pattedyrceller
Skånsom enkeltcelle-dissociation af hESC'er, iPSC'er og andre følsomme linjer
Prøveforberedelse til flowcytometri og FACS-analyse
Analyse af celleoverflademarkører, hvor epitopintegritet er afgørende
Assays af cellemigration, proliferation og apoptose
Hviletilstandsassays ved serumudtømning og onkogen-transfektionsstudier
Assays af tumorcelle
- og neuralkamcellemigration
Opskalering af produktionen i bioreaktor-arbejdsgange

Til rutinearbejde påføres ca. 10 ml Accutase pr. 75 cm2 kulturoverflade og inkuberes i 5–10 minutter ved stuetemperatur. Den optimale inkuberingstid bør bestemmes for hver cellelinje og bør ikke overstige en time. Før tilsætning skylles cellelaget med en Ca2+/Mg2+-fri saltopløsning, såsom DPBS uden calcium og magnesium, for at fjerne resterende serum og toværdige kationer.

Håndtering og opbevaring
Opbevar den uåbnede flaske frosset ved -15 °C eller derunder. Optø enten ved stuetemperatur eller natten over ved +2 °C til +8 °C. Optø ikke Accutase i et 37 °C vandbad, da forhøjede temperaturer reducerer enzymaktiviteten. Efter optøning kan opløsningen opbevares i op til 2 måneder ved +2 °C til +8 °C; opbevar ikke ved stuetemperatur. Reagenset må ikke forvarmes til 37 °C før anvendelse – tilsæt det direkte til vaskede celler ved stuetemperatur. For at opnå lang holdbarhed anbefales det at opdele reagenset i engangsportioner for at undgå gentagne optøningscyklusser. Arbejd altid under aseptiske forhold.

Kvalitet
Fremstillet under strenge kvalitetsstandarder. Hvert parti Accutase er sterilt filtreret og testet for sterilitet, pH, udseende og dissociationsaktivitet for at sikre ensartet, reproducerbar ydeevne fra parti til parti.

Produktspecifikationer



Specifikation
Detaljer



ProdukttypeReagens til celleafløsning/dissociation
FormatSterilfiltreret væske, klar til brug
Volumen100 ml
Arbejdskoncentration1x (klar til brug)
EnzymaktivitetKombineret proteolytisk og kollagenolytisk
Enzymets oprindelseIkke-pattedyr og ikke-bakterielt
BuffersystemDulbeccos PBS med EDTA
pH-indikatorFenolrød
pH-interval6,8 – 7,8
UdseendeKlar, lyserød til orange opløsning
Opbevaringstemperatur-15 °C eller derunder
Stabilitet efter optøningOp til 2 måneder ved +2 °C til +8 °C
Anbefalet anvendelsesvolumen~10 ml pr. 75 cm2 dyrkningsflade
Typisk inkubationstid5 – 10 minutter ved stuetemperatur
ForsendelsesbetingelserFrosset på tøris
Tilsigtet anvendelseUdelukkende til forskningsbrug og videreforarbejdning



Formulering (sammensætning pr. liter)



Komponent
Koncentration (mg/L)




Uorganiske salte

Natriumchlorid (NaCl)8000,00
Dinatriumhydrogenphosphat (Na2HPO4)1150,00
Kaliumchlorid (KCl)200,00
Kaliumdihydrogenphosphat (KH2PO4)200,00

Andre komponenter

EDTA · 4Na (tetranatrium-EDTA)220,00
Phenolrød3,00
Proprietær enzymblanding (proteolytisk og kollagenolytisk aktivitet)1x



Accutase er et registreret varemærke tilhørende Innovative Cell Technologies, Inc.

Produktoversigt
Volumen: 100 ml Opbevaring: ≤-15°C Sterilitet: Sterilt filtreret
Antibiotic/Antimycotic Solution (100x) er et sterilt, brugsklart koncentrat, der er designet til at reducere risikoen for mikrobiel kontaminering i cellekulturer og relaterede laboratorieapplikationer. Denne 100x opløsning indeholder en veletableret kombination af penicillin, streptomycin og amfotericin B, der giver bredspektret antimikrobiel aktivitet mod grampositive og gramnegative bakterier, gær og filamentøse svampe. Formuleringen er velegnet til brug i eukaryote cellekulturer, bakteriemedier og andre forureningsfølsomme systemer, hvilket understøtter rene og ensartede laboratorieoperationer.
Anvendelse og fordele Denne løsning er optimeret til rutinemæssige forskningsprotokoller og bruges i vid udstrækning til at opretholde aseptiske forhold i arbejdsgange med cellekulturer. Den giver pålidelig ydeevne i kontamineringsfølsomme miljøer og hjælper forskere med at reducere risikoen for mikrobiel overvækst uden at gå på kompromis med cellernes sundhed eller forsøgets reproducerbarhed. Den sterilt filtrerede formulering eliminerer behovet for yderligere solubiliseringstrin, hvilket understøtter strømlinet medieforberedelse og reducerer variabiliteten i de daglige laboratorieprocedurer.
Anvendelse og kompatibilitet For at opnå standard arbejdskoncentrationer skal opløsningen fortyndes 1:100 i dit komplette kulturmedie. Produktet er kompatibelt med en bred vifte af pattedyrcellelinjer og basalmedier. Med konsekvent lagertilgængelighed drager forskere fordel af pålidelig forsyningskontinuitet og forenklet logistikplanlægning. Opløsningen skal opbevares ved ≤ -15 °C og beskyttes mod gentagne fryse-tø-cyklusser for at bevare stabiliteten. Kun til forskningsbrug. Ikke til brug i diagnostiske eller terapeutiske procedurer. Må ikke anvendes til mennesker eller dyr.

Fosfatbufferet saltopløsning (PBS)
Fosfatbufferet saltvand (PBS) er en meget anvendt bufferopløsning inden for biologisk og kemisk forskning. Den spiller en afgørende rolle i opretholdelsen af pH-balancen og osmolariteten under forskellige eksperimentelle procedurer, herunder vævsbehandling og cellekultur. Vores PBS-opløsning er omhyggeligt formuleret med ingredienser af høj renhed for at sikre stabilitet og pålidelighed i hvert eksperiment. Osmolariteten og ionkoncentrationerne i vores PBS efterligner nøje dem i menneskekroppen, hvilket gør den isotonisk og ugiftig for de fleste celler.

Sammensætning af vores PBS-opløsning
Vores PBS-opløsning er en pH-justeret blanding af ultrarene fosfatbuffere og saltopløsninger. Ved en 1X arbejdskoncentration indeholder den:

8000 mg/L natriumklorid (NaCl)
200 mg/L kaliumklorid (KCl)
1150 mg/L Natriumfosfat dibasisk vandfri (Na2HPO4)
200 mg/L Vandfri monobasisk kaliumfosfat (KH2PO4)

Denne sammensætning sikrer en optimal pH
- og ionbalance, der er velegnet til en lang række biologiske anvendelser.

Anvendelser af vores PBS-opløsning
Vores PBS-opløsning er ideel til forskellige anvendelser inden for biologisk forskning. Dens isotoniske og ikke-toksiske egenskaber gør den velegnet til fortynding af stoffer og skylning af cellebeholdere. PBS-opløsninger, der indeholder EDTA, er effektive til at løsne fastgjorte og sammenklumpede celler. Der bør dog ikke tilsættes divalente metaller som f.eks. zink til PBS, da det kan forårsage udfældning. I sådanne tilfælde anbefales Good's buffere. Derudover er vores PBS-opløsning et acceptabelt alternativ til viralt transportmedium til transport og opbevaring af RNA-vira, herunder SARS-CoV-2.

Kvalitetskontrol

Sterilt filtreret


Opbevaring og holdbarhed

Opbevares ved +2°C til +25°C, beskyttet mod lys.
Når den er åbnet, skal den opbevares ved 2 °C til 25 °C og bruges inden for 24 måneder.


Betingelser for forsendelse

Omgivelsestemperatur


Vedligeholdelse

Opbevares på køl ved +2 °C til +8 °C i mørke. Undgå frysning og hyppig opvarmning til +37 °C, da det forringer produktkvaliteten.
Opvarm ikke mediet til mere end 37 °C, og brug ikke ukontrollerede varmekilder som f.eks. mikrobølgeovne.
Hvis kun en del af mediet skal bruges, skal du fjerne den nødvendige mængde og varme den op til stuetemperatur før brug.

Sammensætning



Kategori
Komponenter
Koncentration (mg/L)


Salte
Kaliumklorid
200



Vandfrit monobasisk kaliumfosfat
200



Natriumklorid
8000



Natriumfosfat dibasisk vandfri
1150