Vydáno: 2023 | Poslední revize: květen 2026

Porozumění pojmu „počet pasáží“

Pojem „číslo pasáže“ je v buněčné kultuře klíčový a označuje počet subkultivací buněčné linie nebo počet přenosů do nového růstového média po jejím počátečním oživení z kryokonzervace nebo po obdržení z referenční buněčné banky. Tento ukazatel je zásadní pro sledování linie a historie buněčné kultury.

Přehled procesu

V běžné praxi buněčné kultury se buňky, jakmile dosáhnou určité hustoty, přenesou do nového média, aby se udržel jejich růst a zabránilo se jejich nadměrnému shlukování. Každý takový přenos se zaznamenává jako pasáž.
Tradičně, když jsme například obdrželi buněčnou linii v 60. pasáži od poskytovatele, pokračovali jsme od tohoto čísla pasáže a zvyšovali jej s každou subkultivací. Tato praxe sice zachovávala historickou souvislost, ale často vedla k vysokým číslům pasáží již od samého počátku. Vzhledem k rozsáhlému a často desetiletí trvajícímu používání určitých buněčných linií, jako je například linie HeLa založená v roce 1951, není možné určit celkový počet pasáží od založení buněčné linie.
Abychom zvýšili přehlednost a kvalitu našich procesů buněčných kultur, revidovali jsme tento přístup na začátku roku 2023. Nyní, když zahajujeme kultivaci z nové lahvičky, bez ohledu na počet pasáží od poskytovatele, resetujeme a začínáme počítat znovu od první pasáže pro každou vyrobenou šarži.

Odůvodnění

Pasážování je zásadní postup pro zajištění zdraví a užitečnosti buněčných kultur pro výzkum. Když se buňky přemnoží, dochází u nich ke kontaktní inhibici, která snižuje jejich rychlost proliferace, což může nepříznivě ovlivnit výsledky experimentů. Abychom tyto problémy zmírnili, zavádí společnost Cytion přísné kontroly hustoty buněk, při které dochází k subkultivaci, čímž udržuje nízký počet pasáží během výroby svých buněčných linií. Toto opatření pomáhá předcházet nepříznivým účinkům nadměrného pasážování, jako jsou morfologické anomálie, změny rychlosti růstu a genetický drift, které mohou způsobit, že se buňky výrazně liší od svého původního stavu. Dlouhodobé subkultivace mohou také zvýšit riziko mikrobiální kontaminace.

Náš slib

Zajišťujeme, aby buňky dodávané výzkumníkům byly co nejblíže původní genetické výbavě a fenotypovým charakteristikám, čímž zvyšujeme spolehlivost experimentálních dat. Kromě toho společnost Cytion pečlivým zaznamenáváním každého pasážování přispívá ke sledovatelnosti a reprodukovatelnosti výzkumu, což je závazek odrážející vysoké standardy praxe v oblasti buněčných kultur. Výzkumníkům doporučujeme vést přesné záznamy o počtech pasáží, a to jak na kultivačních nádobách, tak v laboratorních zápisnících, jako referenci pro zdraví a historii jejich buněčných kultur.

Tipy a časté chyby

Dodržování správného protokolu je zásadní, ale stejně důležité může být i pochopení běžných úskalí. Postupy při kultivaci buněk jsou citlivé na malé odchylky v technice, načasování a kvalitě reagencií. Následující tipy odrážejí osvědčené postupy doporučené vědeckým týmem společnosti Cytion na základě rozsáhlých zkušeností s kultivací buněk.

Reagencie před použitím vždy předehřejte na 37 °C, abyste minimalizovali teplotní šok pro buňky.
Pracujte rychle, ale opatrně – minimalizujte dobu, po kterou jsou buňky mimo inkubátor.
Používejte certifikovaná činidla testovaná na mykoplazmy, abyste předešli kontaminaci, která by mohla ohrozit výsledky experimentu.
Zaznamenejte každý krok, včetně čísla pasáže, data a pozorování morfologie buněk.
Ověřte svůj protokol malým pilotním experimentem před rozšířením, abyste zabránili plýtvání drahými reagenciemi.

Doporučené reagencie Cytion

Společnost Cytion nabízí řadu ověřených reagencií pro buněčné kultury, které jsou speciálně navrženy pro podporu tohoto protokolu. Všechny reagencie jsou testovány na výkonnost s běžně používanými buněčnými liniemi a jsou k dispozici s kompletní dokumentací. Navštivte stránku cytion.com/Media-Reagents a prohlédněte si kompletní portfolio.