Buněčná linie RAW 264.7 ve výzkumu makrofágů a imunologie

Buněčná linie RAW 264.7 slouží jako robustní in vitro model pro myší makrofágy, který má zásadní význam pro imunologický výzkum. Tyto buňky pocházejí z myších samců BALB/c a byly transformovány virem Abelsonovy myší leukémie, čímž vznikla buněčná linie podobná makrofágům. Díky své funkční stabilitě a vrozené schopnosti provádět fagocytózu i pinocytózu jsou buňky RAW 264.7 nezbytné pro studium interakcí mezi hostitelem a patogenem, což z nich činí základní kámen imunologického výzkumu [1,2].

Morfologické charakteristiky a růstové chování

Po vyšetření vykazují buňky RAW 264.7 semiadherentní růst se sklonem k tvorbě jak vřetenovitých adherentních buněk, tak sférických plovoucích životaschopných buněk s buněčným průměrem v rozmezí 10 až 20 µm. Tato polymorfní povaha a přizpůsobivost kultivačních podmínek činí z buněk RAW 264.7 univerzální nástroj pro experimentální manipulaci a pozorování.

Imunologická funkce a prezentace antigenů

Jako antigen prezentující buňky hrají buňky RAW 264.7 zásadní roli v imunitním systému. Jejich funkce přesahuje pouhé rozpoznávání patogenů a zahrnuje zpracování a prezentaci antigenů T-lymfocytům, čímž organizují komplexní imunitní odpověď. Tato dynamika usnadňuje hlubší pochopení toho, jak imunitní systém identifikuje a neutralizuje cizorodé entity.

Polarizace makrofágů: M0, M1 a M2

Buňky RAW 264.7 v základním stavu jako makrofágy M0 mají pozoruhodnou schopnost polarizovat se buď do prozánětlivého fenotypu M1, nebo do protizánětlivého fenotypu M2. Tato schopnost polarizace poskytuje vědcům model pro studium vlivů a účinků různých cytokinů a faktorů prostředí na funkci makrofágů a imunitní odpovědi [3,4].

Osteoklastogeneze a remodelace kosti

Ačkoli RAW 264.7 buňky samy o sobě nejsou osteoklasty, jsou užitečné při studiu osteoklastogeneze - procesu tvorby osteoklastů. Tyto buňky usnadňují zkoumání exprese osteoklastických genů a jejich reaktivity na aktivaci receptorů. Tento výzkum má hluboké důsledky pro pochopení patofyziologie stavů, jako je osteoporóza, pro kterou je charakteristická dysregulovaná přestavba kosti.

Výhody a nevýhody buněk RAW 264.7

Výhody

• Snadná kultivace: Buněčná linie RAW 264.7 se snadno pěstuje a udržuje v laboratoři bez jakýchkoli složitých požadavků.
• Dobře charakterizovaná: RAW 264.7 je dobře charakterizovaná buněčná linie, což znamená, že má stabilní fenotypové a funkční vlastnosti.
• Model makrofágů in vitro: Protože buňky RAW 264.7 jsou makrofágy, vykazují základní funkce podobné makrofágům, jako je fagocytóza a pinocytóza. Proto se často používají jako in vitro model makrofágů.
• Diferenciace na osteoklasty: RAW 264.7 buňky lze diferencovat na osteoklasty pomocí specifických molekulárních faktorů. Tyto diferencované buňky jsou schopny provádět kostní remodelaci podobně jako osteoklasty.

Nevýhody

• Špatné zastoupení primárních makrofágů: Jako transformovaná buněčná linie nemusí RAW 264.7 přesně reprezentovat vlastnosti primárních makrofágů a může mít určité rozdíly v genové expresi, fenotypu a funkci.
• Omezení při screeningu léčiv: Buňky RAW 264.7 nemusí být vhodné pro všechny typy testů pro screening léčiv a jejich reakce na některá léčiva se mohou lišit od reakcí primárních makrofágů.
• Silná buněčná adheze: RAW 264.7 buňky silně přilnou k povrchu kultivační baňky a někdy může být obtížné je oddělit.

Použití buněk RAW 264.7 v makrofágové mimikry a imunologických studiích

Modelování buněčných imunologických reakcí

Buněčná linie RAW 264.7, která odráží funkční vlastnosti autentických makrofágů, je klíčovým modelem pro zkoumání buněčných odpovědí na patogeny a imunologické podněty. Studie zdůrazňující tento aspekt hodnotila imunomodulační a antioxidační účinky tepelně usmrcených bakterií mléčného kvašení na tyto buňky a poskytla významné poznatky v oblasti regulace imunitního systému[5]

Doplňující výzkum provedený v roce 2019 objasnil imunologický dopad vystavení RAW 264.7 polysacharidům z rostliny Polygonatum sibiricum. Studie dospěla k závěru, že tyto sloučeniny spouštějí imunitní odpověď aktivací signálních drah NF-κB/MAPK, což nabízí hluboké molekulární porozumění[6]

Zkoumání osteoklastogeneze

Buňky RAW 264.7, které fungují jako náhražka pro studie diferenciace osteoklastů, přispívají k objasnění chování osteoklastů a jejich diferenciačních drah. Takový výzkum rozšiřuje naše znalosti o mechanismech kostní resorpce a patogenezi osteoporózy. Ke sledování vnitrobuněčných změn a analýze metabolismu hemu v těchto buňkách se často využívají pokročilé zobrazovací techniky

Získávání molekulárních poznatků o osteoklastogenezi

Navzdory své primární roli makrofágů se buňky RAW 264.7 používají také pro výzkum osteoklastogeneze in vitro. Navozením vlastností podobných osteoklastům u těchto buněk získávají výzkumníci vhled do procesu diferenciace a chování předosteoklastů, ačkoli je při těchto studiích zásadní zohlednit přirozené vlastnosti a původ buněčné linie

Screening bioaktivity přírodních produktů

Screening bioaktivity přírodních produktů je další aplikací, ve které buňky RAW 264.7 vynikají. Například jejich použití v korejské studii zkoumající imunostimulační vlastnosti bylinné směsi ukázalo účinnost buněčné linie při identifikaci bioaktivních látek v přírodních látkách[7]

Pionýrský výzkum s našimi buňkami RAW 264.7

Výzkumné publikace využívající buňky RAW 264.7

K dispozici je mnoho výzkumných publikací o buněčné linii myších makrofágů RAW 264.7:

• 7 prostřednictvímdráhyNF-κB/MAPK.,které jsou uvedeny v publikaci: Polysacharidy z Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute indukují imunitní odpověď v buněčné linii RAW264. 7: V této studii bylo navrženo, že polysacharidy získané z rostliny Polygonatum sibiricum mohou vyvolat imunitní odpověď v buněčné linii myších makrofágů RAW 264.7 prostřednictvím regulace signální kaskády NF-κB/MAPK.
• Imunomodulační účinky extraktu z Tinospora crispa a jeho hlavních sloučenin na imunitní funkce makrofágů RAW 264.7: Tento článek publikovaný v časopise International Immunopharmacology popisuje, že extrakt z rostliny Tinosporacrispa a jeho hlavní složky mají imunomodulační a imunostimulační účinek na buněčnou linii makrofágů RAW 264.7.
• Teplem usmrcené bakterie mléčného kvašení inhibují produkci oxidu dusnatého prostřednictvím inducibilní syntázy oxidu dusnatého a cyklooxygenázy-2 v buňkách RAW 264.7: Tato studie navrhla, že tepelně usmrcené bakterie mléčného kvašení mohou být potenciálně použity při syntéze probiotických produktů, protože mají imunomodulační a antioxidační vlastnosti. Výzkumníci použili ke studiu těchto biologických aktivit buňky RAW 264.7.
• Vliv bylinného přípravku na zvýšení imunitní odpovědi u makrofágů RAW 264.7: Tato studie použila buňky RAW 264.7 ke studiu imunostimulačního účinku bylinného přípravku s názvem KM1608. Studie naznačila, že KM1608 je potenciálním prostředkem pro posílení imunitní odpovědi.
• Screening rostlin používaných v kolumbijské tradiční medicíně odhalil protizánětlivý potenciál kalichů Physalis angulata: Tato práce publikovaná v časopise Saudi Journal of Biological Sciences zkoumala protizánětlivý potenciál 10 běžně používaných tradičních kolumbijských rostlin s využitím LPS stimulovaných RAW 264.7 buněk.

RAW 264.7 buňky: Zdroje, protokoly, videa a další informace

Buňky RAW 264.7 se často používají při transfekčních studiích. Následující zdroje vysvětlují různé metody transfekce používané pro buněčnou linii RAW 264.7.

• Transfekce buněk RAW 264.7: Na této webové stránce naleznete protokol pro transfekci makrofágů RAW 264.7 pomocí lipofektaminového činidla.
• Protokol o transfekci: Tento publikovaný článek popisuje podrobný protokol pro transfekci buněk RAW 264.7.
• Účinná metoda transfekce buněk RAW 264.7: Tento dokument popisuje další praktickou metodu transfekce s použitím buněk RAW 264.7.

Videa týkající se buněčné linie RAW 264.7

• Kultivace buněk RAW 264.7: Toto video vysvětluje protokol pasážování buněk RAW 264.7.
• Metoda transfekce: Toto video popisuje transfekci buněk RAW 264.7 reportérovým genem.

Nejčastější dotazy týkající se buněčné linie RAW 264.7: Pohled na výzkum makrofágové mimikry a osteoklastogeneze

Odkazy

1. Taciak, B., et al., Hodnocení fenotypové a funkční stability buněčné linie RAW 264.7 v sériových pasážích. PloS one, 2018. 13(6): p. e0198943.
2. Wang, S., et al., Inflammatory macrophages interrupt osteocyte maturation and mineralization via regulating the Notch signaling pathway [Zánětlivé makrofágy přerušují zrání a mineralizaci osteocytů prostřednictvím regulace signální dráhy Notch]. Molekulární medicína, 2022. 28(1): p. 102.
3. Orekhov, A.N., et al., Monocyte differentiation and macrophage polarization (Diferenciace monocytů a polarizace makrofágů). Vessel Plus, 2019. 3: p. 10.
4. Khabipov, A., et al., RAW 264.7 macrophage polarization by pancreatic cancer cells-a model for studying tumour-promoting macrophages [Polarizace makrofágů RAW 264.7 buňkami rakoviny slinivky břišní - model pro studium nádorových makrofágů]. Anticancer Research, 2019. 39(6): p. 2871-2882.
5. Kang, C.-H., et al., Heat-killed lactic acid bacteria inhibit nitric oxide production via nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 in RAW 264.7 cells (Tepelně usmrcené bakterie mléčného kvašení inhibují produkci oxidu dusnatého prostřednictvím inducibilní syntázy oxidu dusnatého a cyklooxygenázy-2 v buňkách RAW 264.7). Probiotika a antimikrobiální proteiny, 2021. 13(6): p. 1530-1538.
6. Zhang, J., a další, Polysacharidy z Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute indukují imunitní odpověď v buněčné linii RAW264. 7 prostřednictvím dráhy NF-κB/MAPK. RSC advances, 2019. 9(31): p. 17988-17994.
7. Trinh, T.A., et al. účinek bylinného přípravku na posílení imunitní odpovědi u makrofágů RAW 264.7. Biomolecules, 2020: Biomolecules, 2020. 10(3): p. 424.