Buňky Hep3B: Výzkum a objevování hepatocelulárního karcinomu

HEP3B je imortalizovaná buněčná linie hepatocytárního karcinomu odvozená od člověka. Je široce používána ve výzkumu hepatotoxicity a metabolismu léčiv. Účinnost transfekce HEP3B je značná, a proto se tyto buňky běžně používají ke studiu vývoje, progrese a terapeutických zásahů u rakoviny jater. Tento článek obsahuje všechny potřebné informace o buněčné linii HEP3B, které vám pomohou při práci s ní. Zahrnuje především:

Obecnou charakteristiku a původ buněk HEP3B
Informace o kultivaci buněčné linie HEP3B
Buněčnou linii HEP3B: Výhody a omezení
Aplikace buněk HEP3B ve výzkumu
Publikace o buněčné linii HEP3B
Zdroje pro buněčnou linii HEP3B: Protokoly, videa a další zdroje

1.obecná charakteristika a původ buněk HEP3B

Základní informace, které potřebujete o buněčné linii, jsou její původ a obecné charakteristiky. Mohou vám pomoci při rozhodování o jejím použití ve vašem výzkumu a pomohou vám při práci s ní. Tato část článku obsahuje všechny podstatné informace o původu a charakteristice HEP3B. Dozvíte se zde: Co je to buněčná linie Hep 3B? Jaký je původ buněk Hep3B? Jaká je morfologie buněk HEP3B?

HEP3B, kontinuální lidská hepatomová buněčná linie, pochází z jaterní tkáně osmiletého afrického chlapce s hepatocelulárním karcinomem (HCC). Byla založena Adenem a jeho spolupracovníky v roce 1979 v laboratoři Barbary B. Knowlesové ve Wistar Institute ve Filadelfii, USA [1].
Buňky HEP3B mají ve svém chromozomu integrovaný genom viru hepatitidy B (HBV).
Tyto buňky hepatocytárního karcinomu vykazují epiteliální morfologii.
Buňky HEP3B mají modální počet chromozomů 60. Na rozdíl od HepG2 nemají přestavěný chromozom 1.

Jaký je rozdíl mezi HepG2 a Hep3B?

HepG2 a HEP3B se liší počtem chromozomů na buňku. HEP3B obsahuje 60 chromozomů, zatímco buňky HepG2 mají v průměru 55 chromozomů. Kromě toho je HepG2 nenádorový a hepatitida B negativní, zatímco HEP3B je nádorový a HBV pozitivní.

Karcinom jater při velkém zvětšení pod mikroskopem.

2.informace o kultivaci buněčné linie HEP3B

Znalost informací o kultivaci buněčné linie vám může usnadnit její používání. Tato část se zabývá všemi klíčovými body kultivace buněčné linie HEP3B HBV, včetně: Jaká je doba zdvojení buněk Hep3B? Jaké jsou podmínky kultivace HEP3B? Jak se kultivují buňky HEP3B HCC?

Klíčové body pro kultivaci buněk HEP3B

Doba zdvojení:	Doba zdvojení buněk HEP3B je přibližně 36 hodin.
Adherentní nebo v suspenzi:	Tato linie hepatomových buněk je adherentní.
Poměr rozdělení:	HEP3B buňky se dělí v poměru 1:2 až 1:4. Adherentní HEP3B buňky se opláchnou 1 x PBS a poté se inkubují s disociačním roztokem Accutase. Po 8 až 10 minutách se přidá čerstvé médium a buňky se odstředí. Sklizené buňky se poté opatrně resuspendují a přelijí do baněk obsahujících kultivační médium v doporučeném poměru rozdělení.
Kultivační médium:	Ke kultivaci buněk HEP3B se používá médium EMEM obsahující 10 % FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-Glutamin a Earleův vyvážený solný roztok (EBSS).
Růstové podmínky:	HEP3B buňky se kultivují ve zvlhčeném inkubátoru o teplotě 37 °C s nepřetržitým přívodem 5 % CO2.
Skladování:	Zmrazené buňky HEP3B se skladují při teplotě nižší než -150 °C v elektrickém mrazáku nebo v plynné fázi tekutého dusíku.
Postup zmrazování a médium:	Mrazicí médium doporučené pro HEP3B buňky je CM-1 nebo CM-ACF. Buňky se zmrazují pomalým zmrazovacím procesem, který umožňuje pokles teploty pouze o 1 °C za minutu, aby byla chráněna životaschopnost buněk.
Postup rozmrazování:	Zmrazené buňky se rozmrazují ve vodní lázni nastavené na 37 °C po dobu 40 až 60 sekund. Později se tyto buňky přidají do čerstvého růstového média a odstředí se, aby se odstranily prvky zmrazovacího média. Shromážděné buňky se resuspendují a rozdělí do nových baněk pro růst.
Úroveň biologické bezpečnosti:	Pro kultivaci buněk HEP3B je nutná laboratoř s úrovní biologické bezpečnosti 1.

Adherentní semikonfluentní vrstva buněk Hep3B při zvětšení 10× a 20×.

3.buněčná linie HEP3B: Výhody a omezení

HEP3B je široce používaná buněčná linie hepatocelulárního karcinomu. Tento oddíl se zaměří na některé klíčové výhody a omezení těchto hepatomových buněk.

Výhody

Hlavní výhody buněk HEP3B jsou:

Snadná kultivace	Buňky HEP3B nemají žádné náročné požadavky na kultivaci buněk, takže se s nimi ve výzkumné laboratoři snadno manipuluje a udržují se. To zjednodušuje experimentální postupy.
Vysoká účinnost transfekce	Buňky HEP3B vykazují pozoruhodnou účinnost transfekce, díky čemuž jsou široce využívány při genetických manipulacích a studiích souvisejících s genovou expresí.
Nádorová aktivita	HEP3B je tumorigenní buněčná linie hepatocelulárního karcinomu, která je schopna vytvářet nádory po injekci do imunokompromitované myši. To pomáhá při studiu progrese a vývoje rakoviny pomocí xenograftových modelů HEP3B.
Stav HEP3B P53	Buňky HEP3B mají mutaci genu P53 podobně jako hepatocelulární karcinom (HCC) a jiné druhy rakoviny, což je činí vhodnými pro studium vlivu mutace P53 na růst, vývoj a progresi rakoviny.

Omezení

Omezení spojená s buněčnou linií HEP3B jsou následující:

Buněčný model in vitro

Buněčná linie HEP3B slouží jako in vitro model buněk hepatocelulárního karcinomu (HCC). Nemusí však plně reprezentovat složitost HCC, jaká se vyskytuje v živých organismech. V důsledku toho se výsledky experimentů in vitro mohou lišit od výsledků pozorovaných in vivo.

4.použití buněk HEP3B ve výzkumu

Buněčná linie HEP3B nabízí několik výzkumných aplikací v biomedicínském výzkumu. Některé z klíčových výzkumných aplikací buněk HEP3B zahrnují:

Biologie rakoviny : HEP3B je buněčná linie lidského hepatocelulárního karcinomu. Je to neocenitelný buněčný model pro zkoumání buněčných a molekulárních mechanismů, které jsou základem vývoje a progrese HCC. Vědci tyto buňky používají ke studiu genetických mutací, buněčných procesů a buněčných signálních drah spojených s rakovinou jater. Například studie využila HEP3B buňky a zjistila, že mikroRNA-223-3p reguluje složky NLRP3 inflammasomu, inhibuje proliferaci a zvyšuje apoptózu HEP3B buněk hepatokarcinomu [2].
Screening a vývoj léčiv: Buněčná linie HEP3B se také používá k testování, screeningu a vývoji nových terapeutik proti karcinomu jater. Kromě toho se používá k hodnocení toxicity a účinnosti různých protinádorových léčiv a léčby. Vědci tyto hepatomové buňky používají také ke studiu metabolismu léčiv. Výzkumníci použili buňky HEP3B a hodnotili cytotoxický potenciál rostlinného extraktu Cotinus coggygria na buňkách HEP3B hepatocytárního karcinomu [3].
Virové infekce: HEP3B je buněčná linie pozitivní na virus hepatitidy B, proto se používá ke studiu virových infekcí, které mohou vést ke vzniku rakoviny jater, tj. virů HBV a HCV. To může pomoci lépe porozumět virovým infekcím a vyvinout potenciální protivirovou léčbu. Studie například použila hepatocytární nádorové buňky HEP3B a zkoumala význam ubikvitinace pro šíření viru hepatitidy c. V rámci této studie se zkoumalo, zda je virus hepatitidy c důležitý pro šíření viru. Výsledky naznačují, že ubikvitin-specifická proteáza 15 (USP15) se podílí na šíření HCV prostřednictvím regulace funkcí specifických pro hepatocyt, včetně tvorby lipidových kapének a translace HCV RNA [4].

430,00 €*

Obsah: 1.5 milliliter

Ceny bez daní a nákladů na dopravu

cryovial

Číslo výrobku: 305141

5.publikace o buněčné linii HEP3B

Tato část článku se bude zabývat několika zajímavými výzkumnými publikacemi o buňkách HEP3B.

Regulace apoptózy a autofagie luteolinem u buněk lidského hepatocelulárního karcinomu Hep3B

Tato publikace v časopise Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) navrhuje, že endoplazmatický retikulární stres vyvolaný sloučeninou luteolinu může mít protinádorové účinky u P53-nulových HEP3B buněk způsobem nezávislým na P53.

Potenciální cílení lupeolu izolovaného z Avicennia marina na buňky rakoviny jater Hep3B

Tato studie v časopise Archiv der Pharmazie (2021) navrhla pentacyklický triterpenoid, lupeol, jako potenciální protinádorovou látku proti buňkám HEP3B.

Etanolový extrakt z Cnidium monnieri (L.) Cusson indukuje zástavu buněčného cyklu a apoptózu prostřednictvím regulace dráhy nezávislé na p53 v buňkách hepatocelulárního karcinomu HepG2 a Hep3B

Tento článek byl publikován v časopise Molecular Medicine Reports (2017). Výsledky studie uvádějí, že ethanolový extrakt z Cnidium monnieri (L.) Cusson indukuje buněčnou smrt (apoptózu) a zástavu buněčného cyklu u buněk hepatokarcinomu HepG2 a HEP3B prostřednictvím regulace signální dráhy p53 a Akt/GSK-3β.

Auranofin zvyšuje apoptózu zprostředkovanou sulforafanem u buněk hepatocelulárního karcinomu Hep3B prostřednictvím inaktivace signální dráhy PI3K/Akt

Tento výzkum publikovaný v časopise Biomolecules and Therapeutics (2020) navrhl, že auranofin vykazuje synergickou aktivitu a podporuje sulforafanem zprostředkovanou apoptózu buněk HEP3B prostřednictvím aktivace dráhy PI3K/AKT.

Cirkulární RNA-0072309 má protinádorové vlivy na buněčnou linii Hep3B prostřednictvím cílení na mikroRNA-665

Tento výzkumný článek v časopise BioFactors (2023) navrhuje, že cirkulární RNA-0072309 má protinádorové účinky na buňky hepatocelulárního karcinomu HEP3B prostřednictvím cílení na miRNA-665.

6.zdroje pro buněčnou linii HEP3B: Další zdroje informací: protokoly, videa a další

Níže je uvedeno několik dostupných zdrojů o buňkách HEP3B:

HEP3B transfekce: Toto video vysvětluje protokol transfekce buněk HEP3B.
Účinnost transfekce HEP3B: Tento odkaz vám pomůže zjistit složení média HEP3B DMEM, pasážování buněk a transfekční protokol pro buňky HEP3B. Kromě toho poskytuje informace pro optimalizaci činidla HEP3B lipofectamine 3000 ve vašem transfekčním protokolu.

Následující odkaz obsahuje protokol kultivace buněk HEP3B:

HEP3B kultivační podmínky: Tento odkaz vám pomůže seznámit se s protokolem pro manipulaci a udržování kultur Huh7 a HEP3B.
Buňky HEP3B: V tomto dokumentu jsou uvedeny všechny informace o buňkách HEP3B: Tato webová stránka obsahuje mnoho informací o HEP3B buňkách, včetně médií HEP3B, protokolu pro dělení buněk, rozmrazování a zacházení s proliferačními a kryokonzervovanými kulturami.

Odkazy

Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Origin and prop-erties of hepatocellular carcinoma cell lines. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): p. 1040.
Wan, L., et al., miRNA-223-3p reguluje NLRP3 za účelem podpory apoptózy a inhibice proliferace buněk hep3B. Experimentální a terapeutická medicína, 2018. 15(3): p. 2429-2435.
Danjolli-Hashani, D. and S. Selen-Isbilir, Cytotoxic effect of Cotinus coggygria extract on Hep3B cancer cell line [Cytotoxický účinek extraktu z Cotinus coggygria na nádorovou buněčnou linii Hep3B ]. Natural Product Research, 2022: s. 1-4.
Kusakabe, S., a další, USP15 se podílí na šíření viru hepatitidy C prostřednictvím regulace translace virové RNA a tvorby lipidových kapének. Journal of Virology, 2019. 93(6): s. 10.1128/jvi. 01708-18.