Buňky Hep3B: Výzkum a objevy v oblasti hepatocelulárního karcinomu
HEP3B je imortalizovaná buněčná linie karcinomu hepatocytů lidského původu. Je široce využívána ve výzkumu hepatotoxicity a metabolismu léčiv. Účinnost transfekce HEP3B je značná; proto se tyto buňky běžně používají ke studiu vývoje, progrese a terapeutických zásahů u rakoviny jater. Tento článek obsahuje všechny potřebné informace o buněčné linii HEP3B, které vám pomohou při práci s ní. Obsahuje zejména:
- Růstové médium
- K kultivaci buněk HEP3B se používá médium EMEM obsahující 10 % FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-glutamin a Earleův vyvážený solný roztok (EBSS).
- Doba zdvojnásobení
- Doba zdvojnásobení buněk HEP3B je přibližně 36 hodin.
- Typ růstu
- Tato buněčná linie hepatomu je adhezivní.
- Úroveň biologické bezpečnosti
- BSL-1
- K dispozici u
- Cytion — Objednat HEP3B
- Obecné charakteristiky a původ buněk HEP3B
- Informace o kultivaci buněčné linie HEP3B
- Buněčná linie HEP3B: Výhody a omezení
- Využití buněk HEP3B ve výzkumu
- Publikace o buněčné linii HEP3B
- Zdroje pro buněčnou linii HEP3B: protokoly, videa a další
Obecné charakteristiky a původ buněk HEP3B
Základní informace, které o buněčné linii potřebujete, jsou její původ a obecné charakteristiky. Pomohou vám rozhodnout se o jejím použití ve vašem výzkumu a usnadní vám práci s ní. Tato část článku obsahuje všechny podstatné informace o původu a charakteristikách HEP3B. Zde se dozvíte: Co jsou buněčné linie Hep 3B? Jaký je původ buněk Hep3B? Jaká je morfologie buněk HEP3B?
- HEP3B, kontinuální lidská hepatomová buněčná linie, pochází z jaterní tkáně 8letého afrického chlapce s hepatocelulárním karcinomem (HCC). Byla založena Adenem a kolegy v roce 1979 v laboratoři Barbary B. Knowlesové ve Wistar Institute ve Filadelfii v USA [1].
- Buňky HEP3B mají ve svém chromozomu integrován genom viru hepatitidy B (HBV).
- Tyto buňky hepatocytového karcinomu vykazují epiteliální morfologii.
- Modální počet chromozomů buněk HEP3B je 60. Na rozdíl od buněk HepG2 nemají přeskupený chromozom 1.
Jaký je rozdíl mezi HepG2 a Hep3B?
HepG2 a HEP3B se liší v počtu chromozomů na buňku. HEP3B obsahuje 60 chromozomů, zatímco buňky HepG2 mají v průměru 55 chromozomů. Navíc je HepG2 netumorigenní a negativní na hepatitidu B, zatímco HEP3B je tumorigenní a HBV pozitivní.
Informace o kultivaci buněčné linie HEP3B
Znalost informací o kultivaci buněčné linie vám může usnadnit práci. Tato část pokrývá všechny klíčové body pro kultivaci buněčné linie HEP3B HBV, včetně: Jaká je doba zdvojnásobení buněk Hep3B? Jaké jsou podmínky kultivace HEP3B? Jak se kultivují buňky HEP3B HCC?
Klíčové body pro kultivaci buněk HEP3B
Doba zdvojnásobení:
Doba zdvojnásobení buněk HEP3B je přibližně 36 hodin.
Adherentní nebo v suspenzi:
Tato buněčná linie hepatomu je adhezivní.
Poměr dělení:
Buňky HEP3B se subkultivují v poměru 1:2 až 1:4. Adherentní buňky HEP3B se propláchnou 1x PBS a poté se inkubují s disociačním roztokem Accutase. Po 8 až 10 minutách se přidá čerstvé médium a buňky se odstředí. Získané buňky se poté opatrně resuspendují a nalijí do lahví obsahujících kultivační médium v doporučeném poměru dělení.
Růstové médium:
K kultivaci buněk HEP3B se používá médium EMEM obsahující 10 % FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-glutamin a Earleův vyvážený solný roztok (EBSS).
Podmínky růstu:
Buňky HEP3B se kultivují ve zvlhčeném inkubátoru při teplotě 37 °C s nepřetržitým přívodem 5 % CO2.
Skladování:
Zmrazené buňky HEP3B se skladují při teplotě pod -150 °C v elektrickém mrazáku nebo v plynné fázi kapalného dusíku.
Proces zmrazování a médium:
Pro zmrazení buněk HEP3B se doporučuje médium CM-1 nebo CM-ACF. Buňky se zmrazují pomalým procesem, při kterém se teplota snižuje pouze o 1 °C za minutu, aby se zachovala životaschopnost buněk.
Proces rozmrazování:
Zmrazené buňky se rozmrazují ve vodní lázni předem nastavené na 37 °C po dobu 40 až 60 sekund. Poté se tyto buňky přidají do čerstvého růstového média a odstředí se, aby se odstranily prvky zmrazovacího média. Shromážděné buňky se resuspendují a rozdělí do nových lahví pro růst.
Úroveň biologické bezpečnosti:
Pro kultivaci buněk HEP3B je vyžadována laboratoř s úrovní biologické bezpečnosti 1.
Buněčná linie HEP3B: Výhody a omezení
HEP3B je široce používaná buněčná linie hepatocelulárního karcinomu. Tato část se zaměří na některé klíčové výhody a omezení těchto hepatomových buněk.
Výhody
Hlavní výhody buněk HEP3B jsou:
Snadná kultivace
Buňky HEP3B nemají náročné požadavky na kultivaci, což usnadňuje jejich manipulaci a udržování ve výzkumném laboratoři. To zjednodušuje experimentální postupy.
Vysoká účinnost transfekce
Buňky HEP3B vykazují pozoruhodnou účinnost transfekce, díky čemuž jsou široce využívány v genetické manipulaci a studiích souvisejících s genovou expresí.
Tumorigenita
HEP3B je tumorigenní buněčná linie hepatocelulárního karcinomu, která je schopná tvořit nádory po injekčním podání imunokompromitované myši. To pomáhá při studiu progrese a vývoje rakoviny pomocí xenotransplantačních modelů HEP3B.
Stav P53 u HEP3B
Buňky HEP3B mají mutaci genu P53 podobnou hepatocelulárnímu karcinomu (HCC) a jiným typům rakoviny, což je činí relevantními pro studium účinků mutace P53 na růst, vývoj a progresi rakoviny.
Omezení
Omezení spojená s buněčnou linií HEP3B jsou:
In vitro buněčný model
Buněčná linie HEP3B slouží jako in vitro model buněk hepatocelulárního karcinomu (HCC). Nemusí však plně reprezentovat komplexnost HCC, jak se vyskytuje v živých organismech. V důsledku toho se mohou experimentální výsledky in vitro lišit od těch, které jsou pozorovány in vivo.
Využití buněk HEP3B ve výzkumu
Buněčná linie HEP3B nabízí několik možností využití v biomedicínském výzkumu. Mezi klíčové oblasti využití buněk HEP3B patří:
- Biologie rakoviny: HEP3B je buněčná linie lidského hepatocelulárního karcinomu. Jedná se o neocenitelný buněčný model pro zkoumání buněčných a molekulárních mechanismů, které jsou základem vývoje a progrese HCC. Vědci tyto buňky používají ke studiu genetických mutací, buněčných procesů a buněčných signálních drah spojených s rakovinou jater. Například jedna studie využila buňky HEP3B a zjistila, že mikroRNA-223-3p reguluje složky inflamasomu NLRP3, inhibuje proliferaci a zvyšuje apoptózu buněk hepatokarcinomu HEP3B [2].
- Screening a vývoj léčiv: Buněčná linie HEP3B se také používá k testování, screeningu a vývoji nových léčiv proti karcinomu jater. Kromě toho se používá k hodnocení toxicity a účinnosti různých protinádorových léků a léčebných postupů. Vědci také použili tyto hepatomové buňky ke studiu metabolismu léčiv. Vědci použili buňky HEP3B a vyhodnotili cytotoxický potenciál rostlinného extraktu Cotinus coggygria na buňkách hepatocarcinomu HEP3B [3].
- Virové infekce: HEP3B je buněčná linie pozitivní na virus hepatitidy B; proto se používá ke studiu virových infekcí, které mohou vést k rozvoji rakoviny jater, tj. HBV a HCV. To může pomoci lépe porozumět virovým infekcím a vyvinout potenciální antivirové léčby. Například jedna studie použila rakovinné buňky hepatocytů HEP3B a zkoumala význam ubikvitinace pro šíření viru hepatitidy C. Výsledky naznačily, že proteáza 15 specifická pro ubikvitin (USP15) se podílí na šíření HCV prostřednictvím regulace funkcí specifických pro hepatocyty, včetně tvorby lipidových kapének a translace HCV RNA [4].
5. Publikace o buněčné linii HEP3B
Tato část článku se bude zabývat několika zajímavými výzkumnými publikacemi o buňkách HEP3B.
Regulace apoptózy a autofagie luteolinem v buňkách lidského hepatocelulárního karcinomu Hep3B
Tato publikace v časopise Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) navrhuje, že stres endoplazmatického retikula vyvolaný sloučeninou luteolinu může vykazovat protinádorové účinky v buňkách HEP3B bez P53 způsobem nezávislým na P53.
Potenciální cílení na buňky rakoviny jater Hep3B pomocí lupeolu izolovaného z Avicennia marina
Tato studie v časopise Archiv der Pharmazie (2021) navrhla pentacyklický triterpenoid, lupeol, jako potenciální protinádorové činidlo proti buňkám HEP3B.
Tento článek byl publikován v časopise Molecular Medicine Reports (2017). Výsledky studie uvádějí, že etanolový extrakt z Cnidium monnieri (L.) Cusson indukuje buněčnou smrt (apoptózu) a zastavení buněčného cyklu v buňkách hepatokarcinomu HepG2 a HEP3B prostřednictvím regulace signální dráhy p53 a Akt/GSK-3β.
Tento výzkum publikovaný v časopise Biomolecules and Therapeutics (2020) navrhl, že auranofin vykazuje synergickou aktivitu a podporuje sulforafanem zprostředkovanou apoptózu buněk HEP3B prostřednictvím aktivace signální dráhy PI3K/AKT.
Tento výzkumný článek v časopise BioFactors (2023) navrhuje, že cirkulární RNA-0072309 vykazuje protinádorové účinky v buňkách hepatocelulárního karcinomu HEP3B prostřednictvím cílení na miRNA-665.
Zdroje pro buněčnou linii HEP3B: protokoly, videa a další
Níže uvádíme několik zdrojů týkajících se buněk HEP3B:
- Transfekce HEP3B: Toto video vysvětluje protokol transfekce pro buňky HEP3B.
- Účinnost transfekce HEP3B: Tento odkaz vám pomůže seznámit se se složením média HEP3B DMEM, pasážováním buněk a protokolem transfekce pro buňky HEP3B. Kromě toho poskytuje informace pro optimalizaci činidla HEP3B lipofectamine 3000 ve vašem transfekčním protokolu.
Následující odkaz obsahuje protokol pro kultivaci buněk HEP3B:
- Podmínky kultivace HEP3B: Tento odkaz vám pomůže seznámit se s protokolem pro manipulaci a udržování kultur Huh7 a HEP3B.
- Buňky HEP3B: Tato webová stránka obsahuje mnoho informací o buňkách HEP3B, včetně médií HEP3B, protokolu pro dělení buněk, rozmrazování a manipulaci s proliferativními a kryokonzervovanými kulturami.
Reference
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Původ a vlastnosti buněčných linií hepatocelulárního karcinomu. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): s. 1040.
- Wan, L., et al., miRNA-223-3p reguluje NLRP3, čímž podporuje apoptózu a inhibuje proliferaci buněk Hep3B. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): s. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. a S. Selen-Isbilir, Cytotoxický účinek extraktu Cotinus coggygria na rakovinnou buněčnou linii Hep3B. Natural Product Research, 2022: s. 1-4.
- Kusakabe, S., et al., USP15 se podílí na šíření viru hepatitidy C prostřednictvím regulace translace virové RNA a tvorby lipidových kapének. Journal of Virology, 2019. 93(6): s. 10.1128/jvi. 01708-18.