Buněčná linie HT22
HT22 je myší neuronální buněčná linie běžně používaná ve výzkumu neurověd. Je cenná pro studium neurodegenerativních poruch a testování potenciálních neuroprotektivních terapií nebo léčebných postupů. Kromě toho jsou buňky HT22 citlivé na glutamát, a proto se používají k výzkumu toxicity vyvolané glutamátem nebo poškození neuronů.
- Růstové médium
- K kultivaci buněk HT22 se používá médium DMEM. Pro optimální růst buněk je doplněno 10 % FBS, 4,5 g/l glukózy, 4 mM L-glutaminu, 1,5 g/l NaHCO3 a 1,0 mM pyruvátu sodného.
- Doba zdvojnásobení
- Doba zdvojnásobení buněk HT22 je přibližně 15 hodin.
- Typ růstu
- Buňky HT22 jsou adhezivní.
- Úroveň biologické bezpečnosti
- BSL-1
- K dispozici u
- Cytion — Objednat HT22
Tento článek zdůrazňuje klíčové aspekty buněk HT22, které vám mohou pomoci ve vaší výzkumné práci. Zaměří se především na:
- Obecné vlastnosti a původ buněk HT22
- Informace o kultivaci buněčné linie HT22
- Výhody a nevýhody buněčné linie HT22
- Výzkumné aplikace buněčné linie HT22
- Výzkumné publikace zabývající se buňkami HT22
- Zdroje pro buňky HT22: protokoly, videa a další
Obecné vlastnosti a původ buněk HT22
Tato část článku objasní původ a obecné charakteristiky buněk HT22. Znalost těchto informací o buněčné linii je nezbytná před zahájením práce s ní. Zde se dozvíte: Co jsou buňky HT22? Jaká je morfologie buněk HT22 z hipokampu? Jaká je velikost buněk HT22?
HT22 je kontinuální buněčná linie odvozená z oblasti hipokampu myšího mozku. Jedná se o subklon mateřské buněčné linie HT-4, který byl vyvinut imortalizací myších neuronálních tkání pomocí teplotně citlivého polyomaviru simian virus 40 (SV40) T antigenu.
Tyto buňky se liší od zralých buněk hipokampu, protože postrádají glutamátové a cholinergní receptory, jako mají zralé neurony hipokampálního původu. Proto nejsou vhodné pro výzkumné studie související s pamětí [1].
Buňky HT22 mají vzhled podobný epitelovým buňkám.
Informace o kultivaci buněčné linie HT22
Buňky HT22 se používají v laboratořích zabývajících se neurovědeckým výzkumem. Před kultivací těchto buněk hledají výzkumníci základní informace o kultivaci buněk, které jim usnadní a zefektivní práci. Tato část pokrývá všechny klíčové body pro kultivaci buněk HT22. Dozvíte se: Jaká je doba zdvojnásobení buněk HT22? Jak se kultivují buňky HT22? Jaký je protokol pro kultivaci buněk HT22? Jaké je médium pro buňky HT22?
Klíčové body pro kultivaci buněk HT22
Doba zdvojnásobení:
Doba zdvojnásobení buněk HT22 je přibližně 15 hodin.
Adherentní nebo v suspenzi:
Buňky HT22 jsou adhezivní.
Poměr subkultivace:
Poměr subkultivace pro hipokampální buňky HT22 je 1:3 až 1:6. Stručně řečeno, médium se odstraní a adhezivní buňky se propláchnou 1x PBS. Do baňky se přidá disociační roztok Accutase a buňky se inkubují po dobu 8 až 10 minut při pokojové teplotě. Poté se přidá čerstvé kultivační médium a buňky se odeberou do zkumavky pro odstředění. Získaný buněčný pelet se opatrně resuspenduje a buňky se rozdělí do kultivační baňky pro růst.
Růstové médium:
Pro kultivaci buněk HT22 se používá médium DMEM. Pro optimální růst buněk je doplněno 10 % FBS, 4,5 g/l glukózy, 4 mM L-glutaminu, 1,5 g/l NaHCO3 a 1,0 mM pyruvátu sodného.
Podmínky růstu:
Buněčné kultury HT22 se uchovávají ve zvlhčeném inkubátoru (při teplotě 37 °C) s přívodem 5 % CO2.
Skladování:
Zmrazené buňky HT22 lze dlouhodobě skladovat při teplotě pod -150 °C buď v plynné fázi kapalného dusíku, nebo v elektrickém mrazáku s ultra nízkou teplotou.
Proces zmrazování a médium:
Buňky HT22 lze zmrazit v médiích CM-1 nebo CM-ACF pomocí metody pomalého zmrazování. Tento proces umožňuje pokles teploty vzorku pouze o 1 °C za minutu, chrání buňky před šokem a pomáhá udržet jejich životaschopnost.
Proces rozmrazování:
Buňky se rozmrazují ve vodní lázni o teplotě 37 °C po dobu 40 až 60 sekund, dokud nezůstane malá hrudka ledu. Poté se do buněk přidá kultivační médium a buňky se odstředí, aby se odstranily složky mrazicího média. Buněčný pelet se resuspenduje a buňky se přelijí do nové baňky obsahující kultivační médium. Následně se buňky inkubují při teplotě 37 °C v inkubátoru po dobu nejméně 24 hodin.
Úroveň biologické bezpečnosti:
Pro kultivaci buněk HT22 je povinné laboratořní prostředí s úrovní biologické bezpečnosti 1.
Výhody a nevýhody buněčné linie HT22
Hipokampální buňky HT22 mají některé klady a zápory, které je odlišují od jiných neuronálních buněčných linií. Zde jsou uvedeny některé významné výhody a nevýhody této buněčné linie.
Výhody
Výhody myší neuronální buněčné linie HT22 jsou:
-
Rychlá rychlost růstu
Buňky HT22 mají dobu zdvojnásobení 15 hodin, což umožňuje rychlé a efektivní experimentování a přispívá k včasnému získání výsledků výzkumu.
-
Imortalizace
HT22 je imortalizovaná buněčná linie, která zajišťuje nepřetržitý růst po dlouhou dobu. To zajišťuje stálou dostupnost buněk, snižuje časovou a finanční náročnost a usnadňuje dlouhodobé experimenty s konzistentními výsledky.
Nevýhody
Nevýhody buněk HT22 jsou:
-
Myší původ
Buněčná linie HT22 byla odvozena z tkáně hipokampu myšího mozku, což nemusí plně odrážet složitost fyziologie a chování lidských neuronů, což omezuje její translační relevanci.
4. Výzkumné aplikace buněčné linie HT22
Buňky HT22 se hojně používají ve výzkumu neurobiologie. V této části článku se zabýváme několika slibnými aplikacemi této buněčné linie:
- Neurovědecký výzkum: Buňky HT22 jsou široce využívány ve výzkumu neurodegenerativních onemocnění, tj. Alzheimerovy a Parkinsonovy choroby. Jsou považovány za cenný výzkumný nástroj pro studium mechanismů neurotoxicity a oxidačního stresu souvisejících s těmito onemocněními. Výzkum provedený v roce 2020 zjistil, že signální dráha PI3K/AKT/CREB se podílí na hyperglykémií indukované neurální toxicitě v buňkách HT22 [2]. Podobně nedávná studie navrhla, že signální dráha Nrf2/HO-1 a signální osa NF-κB hrají významnou roli v toxicitě amyloidního beta v buňkách HT22 [3].
- Screening léčiv: Buňky HT22 se široce používají pro testování a screening léčiv. Pomáhají výzkumníkům identifikovat potenciální terapeutické látky vykazující neuroprotektivní účinky pro boj s neurodegenerativními onemocněními. Studie provedená v roce 2019 zkoumala neuroprotektivní potenciál sloučeniny tetrahydrokurkuminu v hipokampálních buňkách HT22 ošetřených glutamátem. V tomto případě glutamát indukuje oxidační stres v buňkách HT22 a způsobuje buněčnou smrt aktivací mitogenem aktivovaných proteinových kináz [4].
5. Vědecké publikace zabývající se buněčnou linií HT22
Zde je několik zajímavých výzkumných prací zabývajících se buněčnou linií HT22:
Tato studie v časopise International Journal of Molecular Medicine (2019) navrhla neuroprotektivní potenciál krocinu, sloučeniny izolované z Crocus sativus L., v buňkách HT22 poškozených L-glutamátem.
Tato publikace v časopise Neuropharmacology (2018) uvádí, že deriváty oxindolu chrání před smrtí buněk HT22 vyvolanou oxidačním stresem.
Tento výzkumný článek byl publikován v časopise Journal of Ginseng Research v roce 2019. Tato studie zkoumala neuroprotektivní účinky přírodního produktu, ginsenosidu Rb2, s využitím buněčné linie HT22. Studie zjistila, že ginsenosid Rb2 účinně snižoval glutamátem indukovaný oxidační stres a buněčnou smrt v myších hipokampálních buňkách HT22.
Tato studie v časopise Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) hodnotila cytotoxický potenciál nanočástic stříbra v buněčné linii HT22.
Ferrostatin-1 chrání buňky HT-22 před oxidační toxicitou
Tento výzkumný článek byl publikován v roce 2020 v časopise Neural regeneration research. Navrhuje, že ferrostatin-1, inhibitor ferroptózy, zabraňuje oxidační toxicitě v hipokampálních buňkách HT22.
Zdroje pro buňky HT22: protokoly, videa a další
Některé online zdroje o buňkách HT22 vysvětlují jejich transfekci, diferenciaci a protokoly buněčné kultury:
- Transfekce HT22: Tento dokument obsahuje optimalizovaný protokol pro transfekci HT22 v 24 a 96jamkových destičkách pro buněčné kultury.
- Diferenciace buněk HT22: Tento článek vás komplexně provede protokolem diferenciace buněk HT22.
Následující odkaz obsahuje protokol pro kultivaci buněk HT22:
- Subkultivace buněk HT22: Tento odkaz vám pomůže seznámit se s protokolem subkultivace buněčné linie HT22. Navíc vám pomůže seznámit se s protokolem pro indukci neurotoxicity v buňkách.
- Hipokampální buňky HT22: Tato webová stránka obsahuje mnoho užitečných informací o době zdvojnásobení buněk HT22, médiích a protokolech buněčné kultury.
Reference
- He, M., et al., Diferenciace způsobuje náchylnost k excitotoxicitě v neuronech HT22. Neural Regen Res, 2013. 8(14): s. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetin zabraňuje neurotoxicitě buněk HT22 vyvolané vysokou hladinou glukózy prostřednictvím signální dráhy PI3K/Akt/CREB. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: s. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Ochranné účinky berberinu proti neurotoxicitě vyvolané β-amyloidem v buňkách HT22 prostřednictvím dráhy Nrf2/HO‐1. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: s. 106–210.
- Park, C.-H., et al., Neuroprotektivní účinky tetrahydrokurkuminu proti oxidačnímu stresu vyvolanému glutamátem v hipokampálních buňkách HT22. Molecules, 2019. 25(1): s. 144.