Buněčná linie HT-29
HT-29 je buněčná linie lidského kolorektálního karcinomu, která má široké využití v onkologickém a toxikologickém výzkumu. Tyto buňky jsou například citlivé na standardní chemoterapeutickou léčbu kolorektálního karcinomu. Kromě toho je buněčná linie HT-29 dobře charakterizovaným in vitro modelem pro zkoumání reakce střevního epitelu na bakteriální infekci. Buňky HT-29 napodobují vlastnosti zralých střevních buněk, tj. enterocytů, a jsou tak vhodné pro studium vazby a mechanismu.
Tento článek se zabývá všemi aspekty buněčné linie HT-29, které je třeba znát před prací s ní. Zahrnuje především:
- HT-29 buňky: Původ a obecné informace
- Informace o buněčné kultuře buněčné linie HT-29
- Buňky HT-29: Výhody a omezení
- Buňky HT-29: Použití
- Výzkumné publikace o buňkách HT-29
- Zdroje o buňkách HT-29: Protokoly, videa a další zdroje
1. Buňky HT-29: Původ a obecné informace
Před použitím jakékoli buněčné linie byste měli znát její obecné vlastnosti a původ. Tato část vám pomůže získat tyto informace: Co jsou buňky HT-29? Patří HT-29 mezi buněčné linie kolorektálního karcinomu? Jaká je morfologie buněk HT-29?
Co je to buněčná linie HT-29? HT-29 je buněčná linie kolorektálního adenokarcinomu, kterou v roce 1964 založili Trempe a Fogh. Buňky byly původně odvozeny z primárního nádoru bělošské ženy (44 let) s kolorektálním adenokarcinomem [1]. Od svého založení se tato buněčná linie používá ke studiu biologie nádorových onemocnění.
Morfologie buněk HT-29: Buněčná linie HT-29 má obecně epiteliální morfologii. Diferencované buňky rostou v monovrstvách, vytvářejí těsné buněčné spoje a mají apikální kartáčovou hranici. Pokud jsou tyto buňky pěstovány v médiu s nedostatkem glukózy nebo jsou jim podávány induktory jako butyrát nebo kyselina, vykazují znaky podobné enterocytům.
Velikost buněk: Průměr buněčné linie HT-29 kolorektálního karcinomu je 11 μm.
Genom a ploidie: Modální počet chromozomů buněčné linie HT-29 je 71. Může se pohybovat v rozmezí 68-72. Kromě toho je streamovaný počet chromozomů u buněk HT-29 hypertriploidní, přičemž složka 2S se vyskytuje ve výši 2,4 %.
Co je HT29 MTX? HT29 MTX je buněčná linie rezistentní vůči methotrexátu, která byla izolována z původní buněčné linie HT-29 lidského karcinomu tlustého střeva adaptací na 10 µM methotrexátu. Tyto buňky vykazují vlastnosti zralých pohárkových buněk vylučujících hlen.
2. Informace o buněčné kultuře buněčné linie HT-29
Znalost základních požadavků na kultivaci buněčné linie vám může usnadnit práci s ní. Měli byste vědět: jaká je doba zdvojení buněčné linie HT-29? Jaká je hustota výsevu buněk HT-29? Jaká média jsou vhodná pro buňky HT-29?
|
Doba zdvojení |
Průměrná doba zdvojení buněčné linie HT-29 je 24 hodin. |
|
Adherence/suspenze |
HT-29 je adherentní buněčná linie. |
|
Hustota výsevu |
Doporučená hustota výsevu pro buňky HT-29 je 3 x104 buněk/cm2. Vypěstované buňky se promyjí 1 X PBS a po inkubaci s Accutase po dobu 8-10 minut se oddělí. Přidá se čerstvé médium a buňky se odstředí. Buněčná peleta se resuspenduje a buňky se rozdělí do nových baněk s doporučenou hustotou buněk. |
|
Růstové médium |
Pro optimální kultivaci buněk HT-29 se používá Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM) doplněné 2,5 mM L-glutaminem a 10 % FBS. Médium by se mělo vyměňovat 2 až 3krát týdně. |
|
Růstové podmínky |
Buňky HT-29 vyžadují pro svůj růst humifikovaný inkubátor s teplotou 37 °C a přívodem 5 %CO2. |
|
Skladování |
Tyto buňky se skladují v plynné fázi tekutého dusíku při teplotě nižší než -195 °C. |
|
Mrazicí médium a postup |
Mrazicí médium používané pro buněčnou linii HT-29 je CM-1 nebo CM-ACF. Buňky se zmrazují pomalým zmrazovacím procesem, který způsobuje pokles teploty o 1 °C a účinně chrání životaschopnost buněk. |
|
Proces rozmrazování |
Zmrazené buňky HT-29 se rozmrazují ve vodní lázni nastavené na teplotu 37 °C. Tyto buňky lze resuspendovat a přímo dávkovat do baňky s čerstvým růstovým médiem. Na rozdíl od toho lze rozmražené buňky odstředit, aby se odstranily prvky zmrazovacího média, resuspendovat v čerstvém médiu a kultivovat v baňkách. |
|
Úroveň biologické bezpečnosti |
Pro manipulaci s buněčnou linií HT-29 a její udržování se používá úroveň biologické bezpečnosti 1. |
3. HT-29: Výhody a omezení
Každá buněčná linie má jedinečné výhody a nevýhody, které ji odlišují od ostatních buněčných linií. Tento oddíl se zabývá hlavními výhodami a omezeními spojenými s buňkami HT-29.
Výhody
Hlavní výhody buněk HT-29 jsou:
-
Snadná kultivace
S buněčnou linií HT-29 se snadno manipuluje a udržuje, nemá žádné složité požadavky na kultivaci. Je hojně kultivována ve výzkumných laboratořích.
-
In vitro model střevních buněk
Buňky HT-29 se mohou za specifických kultivačních podmínek diferencovat ve zralé střevní buňky (enterocyty a buňky produkující hlen). Používají se jako buněčný model pro studium trávení a biologické dostupnosti potravy.
-
Vysoká účinnost transfekce
Buňky HT-29 pro rakovinu tlustého střeva mají vysokou účinnost transfekce, takže jsou vhodné pro studie genové exprese a regulace. Pomocí různých metod lze provádět experimenty s přechodnou i stabilní transfekcí.
-
Citlivost na léčiva
Buňky HT-29 jsou citlivé na chemoterapeutika, jako jsou fluorouracil a oxaliplatina, která se běžně používají při léčbě rakoviny tlustého střeva. Používají se ke studiu lékové rezistence a ke screeningu potenciálních terapeutických léčiv pro kolorektální karcinom.
Omezení
-
Heterogenita
Buňky HT-29, stejně jako jiné nádorové buněčné linie, vykazují heterogenitu a nemusí tvořit jednotnou buněčnou populaci. To může ovlivnit reprodukovatelnost výsledků v určitých testech a vést k drobným odchylkám ve výsledcích experimentů.
-
Omezená diferenciace
Buňky HT-29 mají omezený diferenciační potenciál. Nediferencují se plně na buňky střeva nebo tlustého střeva, ale vykazují pouze několik charakteristických znaků. Toto omezení může omezovat jejich použití při studiu složitějších biologických procesů.
4. buňky HT-29: Aplikace
Buněčná linie HT-29 je hojně kultivována ve výzkumných laboratořích díky širokému spektru použití. Tento oddíl se bude zabývat pouze několika významnými aplikacemi buněk HT-29.
Výzkum rakoviny: HT-29 je buněčná linie kolorektálního adenokarcinomu, takže se používá ke studiu progrese rakoviny, jejího vývoje a základních molekulárních mechanismů. Studie provedená v roce 2018 použila buněčnou linii HT-29 ke zkoumání buněčných molekul zodpovědných za metastazování. V této studii bylo zjištěno, že geny vimentinu a CXCR4 regulují metastazování buněk. Zatímco transfekce mimikry mikroRNA-193a-5p může snížit hladiny mRNA těchto genů a úspěšně snížit metastazování nádorových buněk [2].
Toxikologický výzkum: Buněčná linie HT-29 se hojně využívá v toxikologickém výzkumu. Tyto buňky kolorektálního karcinomu se používají k hodnocení toxicity různých kandidátních léčiv pomocí různých testů. Například studie zkoumala potenciál toxicity etanolového extraktu rostliny Syzygium cumini na buněčné linii HT-29. Výsledky ukázaly významné potlačení růstu buněk HT-29, což naznačuje slibné protinádorové vlastnosti extraktu [3].
Mikrobiologie : HT-29 lze použít jako hostitelský buněčný systém pro zkoumání patogeneze potenciálních mikrobů, tj. bakterií a virů. Výzkumníci mohou infikovat buňky HT-29 mikroby a zkoumat jejich virulenci a reakci hostitele. Taková studie použila buňky HT-29 ke zkoumání probiotických vlastností bakterií mléčného kvašení [4]. Jiná studie použila buňky HT-29 k hodnocení účinnosti a bezpečnosti léčby bakteriofágy [5].
5. Výzkumné publikace o buňkách HT-29
Tato část vám osvětlí některé významné publikace o buňkách HT-29, které vám pomohou při přípravě vaší výzkumné studie.
Tato studie navrhla etanolový extrakt Syzygium cumini jako potenciální protinádorovou látku proti buněčné linii kolorektálního karcinomu HT-29. Extrakt významně potlačil růst nádorových buněk.
Tato publikace v časopise Bioscience Reports testovala protinádorovou aktivitu sloučeniny tetradrin na buňkách HT-29. Výsledky odhalily, že tetrandrin inhibuje proliferaci a růst nádorových buněk prostřednictvím regulace buněčných signálních drah.
Tato studie navrhla, že miRNA-193a-5p může potenciálně regulovat metastazování buněk HT-29 prostřednictvím regulace genů souvisejících s metastazováním.
Tento článek byl publikován v časopise Nature Scientific Reports v roce 2018. V této studii byla použita nádorová buněčná linie HT-29 jako střevní buněčný model pro vyhodnocení účinnosti navrhované léčby bakteriofágy.
V této studii vědci použili buňky HT-29 ke zkoumání probiotických aktivit bakterií mléčného kvašení. Zajímavé je, že studie ukázala, že bakterie laktobacilů zabraňují adhezi patogenních bakterií k buňkám tlustého střeva.
6. Zdroje buněk HT-29: Protokoly, videa a další zdroje
Tato část se zabývá některými dostupnými online zdroji o buňkách HT-29, které vám pomohou naučit se protokoly pro jejich udržování, kultivaci a transfekci.
Protokoly kultivace buněk
Následující zdroje vám poskytnou informace o subkultivaci buněk HT-29.
- Kultivace buněk HT-29: Tento odkaz poskytne základní informace o kultivačním médiu, rozmrazování a subkultivaci buněk HT-29.
- Udržování kultur HT-29: Tento článek obsahuje všechny užitečné informace o kultivaci a údržbě buněk HT-29.
Protokoly transfekce
Buněčná linie HT-29 má velkou transfekční účinnost a často se používá při studiích genové exprese. Následující zdroje popisují možné transfekční protokoly pro tyto buňky.
- Transfekce HT-29: Tento odkaz na webové stránky obsahuje podrobný protokol pro transfekci buněk HT-29.
- Transfekce buněčné linie HT-29: Tento dokument popisuje protokol transfekce buněčné linie HT-29 plazmidovou DNA.
Videa týkající se buněčné linie HT-29
Zde je několik videí o kultivaci a údržbě této nádorové buněčné linie.
- Pasážování buněk: Toto video ukazuje protokol pasážování buněk pro adherentní buněčné linie.
- Transfekce buněk HT-29: Toto video vás provede metodou transfekce používanou pro buňky HT-29.
Očekáváme, že informace v tomto článku jsou pro vás cenné a dostatečné pro zvládnutí manipulace s buněčnou linií HT-29 a její údržbu. Pokud plánujete použít buňky HT-29 ve své studii, objednejte si je u nás.
Odkazy
- Martínez-Maqueda, D., B. Miralles a I. Recio, buněčná linie HT29. The Impact of Food Bioactives on Health: in vitro and ex vivo models, 2015: s. 113-124.
- Shirafkan, N., a další, microRNA-193a-5p inhibuje migraci lidských buněk karcinomu tlustého střeva HT-29 prostřednictvím potlačení dráhy metastazování. Journal of cellular biochemistry, 2019. 120(5): p. 8775-8783.
- Khodavirdipour, A., R. Zarean a R. Safaralizadeh, Evaluation of the anti-cancer effect of Syzygium cumini ethanolic extract on HT-29 colorectal cell line. Journal of gastrointestinal cancer, 2021. 52: p. 575-581.
- Fonseca, H.C., et al., Probiotické vlastnosti laktobacilů a jejich schopnost inhibovat adhezi enteropatogenních bakterií na buňky Caco-2 a HT-29. Probiotika a antimikrobiální proteiny, 2021. 13: p. 102-112.
- Shan, J., et al., Bakteriofágy jsou virulentnější k bakteriím s lidskými buňkami než v bakteriální kultuře; poznatky z buněk HT-29. Vědecké zprávy, 2018. 8(1): p. 5091.
