Buňky DLD-1: Využití a poznatky o buňkách DLD-1 ve výzkumu kolorektálního karcinomu
DLD-1 je lidská buněčná linie kolorektálního karcinomu běžně používaná ve výzkumu rakoviny. Jedná se o cenný nástroj pro zkoumání různých aspektů rakoviny tlustého střeva, včetně vývoje nádoru, progrese, základních molekulárních mechanismů a reakce na terapeutické látky. DLD-1 tak vyniká v porozumění nemoci a vývoji potenciálních léčebných strategií.
- Růstové médium
- K kultivaci buněk DLD-1 se používá RPMI 1640 s doplňky média, včetně 10 % fetálního bovinního séra (FBS), 2,1 mM stabilního glutaminu a 2,0 g/l NaHCO3. Médium by se mělo vyměňovat 2–3krát týdně.
- Doba zdvojnásobení
- Doba zdvojnásobení DLD-1 je přibližně 15 hodin.
- Typ růstu
- DLD-1 je adhezivní lidská buněčná linie rakoviny tlustého střeva. Buňky rostou do monovrstev.
- Úroveň biologické bezpečnosti
- BSL-1
- K dispozici u
- Cytion — Objednat DLD-1
Obecné charakteristiky a původ buněk DLD-1
Před zahájením práce s buněčnou linií je pro výzkumníka nejdůležitější znát její původ a obecné vlastnosti. Tato část článku představuje podrobný úvod do buněčné linie DLD-1. Zabývá se následujícími často kladenými otázkami: Co jsou buňky DLD-1? Co je to rakovinná buněčná linie DLD-1? Jaké jsou mutace buněčné linie DLD-1? Jaká je velikost buňky DLD-1? Jaká je morfologie buněk DLD-1?
- DLD-1, buněčná linie rakoviny tlustého střeva, pochází z tlustého střeva 67letého pacienta s kolorektálním adenokarcinomem. Byla izolována D.L. Dexterem a jeho kolegy v letech 1977–1979. Tato buněčná linie má stejný původ jako buněčné linie HCT-8, HCT-15 a HRT-18.
- Stejně jako kolorektální karcinomy vykazují i buňky DLD-1 fenotyp mikrosatelitní nestability [1].
- Mutace DLD-1 zahrnují KRAS, P53, BRAF, BRCA1 a BRCA2. Vzhledem ke statusu DLD-1 P53, mutaci DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 a DLD-1 KRAS jsou tyto buňky považovány za ideální pro studium rakoviny.
- Tyto buňky mají epiteliální morfologii.
- Velikost buněk buněčné linie DLD-1 je přibližně 15 µm.
- Lidská buněčná linie kolorektálního karcinomu DLD-1 má pseudodiploidní karyotyp. Přibližně 86 % buněk má modální počet chromozomů 46. U 17,1 % buněčné populace však může existovat i polyploidie.
Informace o kultivaci buněčné linie DLD-1
Před kultivací jakékoli buněčné linie musíte znát její základní požadavky na kultivaci. Tato část zdůrazní důležité body, které musíte znát před zahájením práce s buněčnou linií DLD-1. Patří mezi ně: Jaká je doba zdvojnásobení DLD-1? Co je kultivační médium DLD-1? Jaká je hustota výsevu buněk DLD-1? Jak se kultivují buňky DLD-1?
Klíčové body pro kultivaci buněk DLD-1
Doba zdvojnásobení:
Doba zdvojnásobení DLD-1 je přibližně 15 hodin.
Adherentní nebo v suspenzi:
DLD-1 je adhezivní lidská buněčná linie rakoviny tlustého střeva. Buňky rostou do monovrstev.
Hustota výsevu:
Buňky DLD-1 se vysévají v hustotě 1 až 2 x 104 buněk/cm2. Adherentní buňky se promyjí 1x fosfátovým pufrem (PBS) a inkubují se s pasážovacím roztokem (Accutase) při pokojové teplotě. Po inkubaci po dobu 8 až 10 minut se odloučené buňky přidají do kultivačního média a odstředí se. Buněčný pelet se poté opatrně resuspenduje a buňky se přelijí do nových kultivačních nádob obsahujících růstové médium.
Růstové médium:
K kultivaci buněk DLD-1 se používá RPMI 1640 s doplňky média, včetně 10 % fetálního bovinního séra (FBS), 2,1 mM stabilního glutaminu a 2,0 g/l NaHCO3. Médium by se mělo vyměňovat 2–3krát týdně.
Podmínky růstu:
Kultury DLD-1 se udržují ve zvlhčeném inkubátoru při teplotě 37 °C s přívodem 5 % CO2.
Skladování:
Buňky DLD-1 se skladují v plynné fázi kapalného dusíku nebo v elektrickém mrazáku s extrémně nízkou teplotou (při teplotě pod -150 °C).
Proces zmrazování a médium:
K zmrazení buněk DLD-1 lze použít zmrazovací média CM-1 nebo CM-ACF. Vždy se doporučuje pomalý proces zmrazování, který umožňuje postupný pokles teploty o 1 °C, čímž se zabrání šoku buněk a ochrání se jejich životaschopnost.
Proces rozmrazování:
Zmrazené buňky se rozmrazují ve vodní lázni nastavené na teplotu 37 °C po dobu 40 až 60 sekund, dokud nezůstane pouze malá hrudka ledu. Poté se buňky přidají do čerstvého média a odstředí se. Tento krok je nezbytný k odstranění složek mrazicího média z buněk. Získané buňky se resuspendují v růstovém médiu a nanesou do baňky pro růst.
Úroveň biologické bezpečnosti:
Buněčná linie DLD-1 je udržována v laboratořích s úrovní biologické bezpečnosti 1.
Buněčná linie DLD-1: Výhody a omezení
V této části článku se podíváme na výhody a omezení buněčné linie DLD-1 pro rakovinu tlustého střeva.
Výhody
Hlavní výhody buněčné linie DLD-1 jsou:
Model kolorektálního karcinomu
Buňky DLD-1 vykazují mutace, které se běžně vyskytují u pacientů s kolorektálním karcinomem, jako jsou mutace DLD-1 KRAS, DLD-1 BRCA a DLD-1 BRCA2. Díky této relevanci představují klinicky vhodný buněčný model pro studium tohoto onemocnění.
Tumorigenní buněčná linie
Buňky DLD-1 jsou tumorigenní. Po injekčním podání nahým myším mohou vyvolat vznik nádorů. Vědci proto tyto buňky využívají k vývoji xenotransplantátových nádorových modelů, které pomáhají zkoumat vznik, vývoj a progresi nádorů in vivo.
Omezení
Omezení spojená s buňkami DLD-1 jsou:
Heterogenita
Populace buněk rakoviny tlustého střeva DLD-1 vykazují genetickou a fenotypovou heterogenitu. To může ovlivnit zobecnitelnost výsledků výzkumu.
Výzkumné aplikace buněčné linie DLD-1
Buněčná linie DLD-1 nabízí řadu aplikací ve výzkumu rakoviny. V této části jsou popsány některé významné aplikace.
- Studium rakoviny: Buňky DLD-1 slouží jako cenný in vitro model pro pochopení molekulárních mechanismů, které jsou základem růstu, vývoje a progrese kolorektálního karcinomu. Kromě toho se používají ke studiu genové exprese, signálních drah a vlivu specifických genetických mutací na chování rakovinných buněk. Výzkum provedený v roce 2022 zjistil, že signální kaskáda PI3K/Akt/YAP reguluje migraci a invazi buněčné linie DLD-1 kolorektálního karcinomu [2].
- Vývoj léků: Vědci využívají buněčnou linii DLD-1 k testování účinnosti protinádorových léků a k hodnocení jejich potenciálu pro léčbu rakoviny tlustého střeva. To pomáhá při vývoji léků a účinném boji proti nemoci. Studie provedená v roce 2022 použila rakovinnou buněčnou linii DLD-1 a zkoumala protinádorovou aktivitu silikonových ftalocyaninů, chemicky syntetizovaných sloučenin. Výsledky studie naznačily, že tyto sloučeniny jsou účinnými protinádorovými látkami [3]. Zajímavé je, že další výzkum pomocí buněk DLD-1 odhalil protinádorový potenciál proteinu P8 odvozeného z probiotik [4].
5. Vědecké publikace o buňkách DLD-1
V této části se zaměříme na několik zajímavých a často citovaných publikací zabývajících se buněčnou linií karcinomu tlustého střeva DLD-1.
Tato publikace vyšla v časopise Journal of Biologically Active Products from Nature (2022). Studie zjistila, že flavonoid diosmin indukoval buněčnou smrt v buňkách DLD-1 a také způsobil zastavení buněčného cyklu; může se tedy jednat o potenciální protinádorové činidlo.
Bromelain účinně potlačuje kolorektální karcinom s mutací Kras stimulací ferroptózy
Tato studie v časopise Animal Cells and Systems (2018) navrhla, že bromelain, enzym, potlačuje mutaci DLD-1 KRAS a vykazuje silné cytotoxické účinky.
Tento výzkumný článek byl publikován v roce 2019 v časopise „Environmental Toxicology“. Studie zkoumala protinádorové účinky přírodní sloučeniny bergaptenu s využitím kolorektální buněčné linie DLD-1.
Tato studie v časopise „Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials“ (2023) zjistila, že nanokompozity kurkuminu a oxidu železa jsou vysoce účinné proti kolorektálním rakovinným buňkám DLD-1.
Tento výzkumný článek byl publikován v roce 2020 v časopise Turkish Journal of Biology. Studie navrhla, že přírodní produkt, epibrassinolid zprostředkovaná aktivace AKT v buňkách DLD-1, stimuluje autofagii související s polyaminy.
Zdroje pro buněčnou linii DLD-1: protokoly, videa a další
Níže uvádíme několik zdrojů týkajících se buněk DLD-1:
- Transfekce DLD-1: Tento videonávod je komplexním průvodcem protokolem in vitro transfekce DLD-1.
- Buňky DLD-1: Tato výzkumná práce stručně popisuje požadavky na kultivaci buněk DLD-1, včetně médií a kultivačních podmínek. Kromě toho vám může pomoci seznámit se s protokolem transfekce používaným pro buňky DLD-1.
Následující odkazy obsahují protokol pro kultivaci DLD-1, buněk rakoviny tlustého střeva lidského původu.
- Buněčná linie DLD-1: Tato webová stránka poskytuje základní informace o buněčné linii DLD-1. Pomůže vám seznámit se s různými protokoly pro kultivaci buněk DLD-1, včetně subkultivace a manipulace s kryokonzervovanými a proliferujícími kulturami.
Reference
- Gavrilas, L.I., et al., Proapoptotické geny jako nové cíle pro samostatnou a kombinovanou léčbu resveratrolem a kurkuminem u kolorektálního karcinomu. Food & function, 2019. 10(6): s. 3717–3726.
- Takeda, T., et al., Signální dráha PI3K/Akt/YAP podporuje migraci a invazi buněk kolorektálního karcinomu DLD-1. Oncology Letters, 2022. 23(4): s. 1–9.
- Farajzadeh, N., et al., Protinádorová aktivita nových křemíkových ftalocyaninů proti buněčné linii kolorektálního adenokarcinomu (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): s. 19863–19873.
- An, B.C., et al., Protinádorové účinky proteinu P8 získaného z probiotik na buněčnou linii kolorektálního karcinomu DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): s. 9857.