Buňky B16 - základní průvodce buňkami melanomu B16 v onkologickém výzkumu

B16 je buněčná linie rakoviny kůže (melanomu) myšího původu. Tato buněčná linie je účinným in vitro modelem pro studium lidských kožních nádorů. Často se používá ke zkoumání tvorby solidních nádorů a metastazování nádorových buněk.

Tento článek vám pomůže pochopit základy buněčné linie melanomu B16. Konkrétně se bude zabývat následujícími tématy:

1.obecná charakteristika a původ buněčné linie B16

Tato část článku se bude zabývat charakteristickými rysy buněčné linie melanomu B16. Dozvíte se odpovědi na následující často kladené otázky. Jako například: Co je to buněčná linie B16 melanomu? Odkud se získávají buňky B16? Jaká je velikost buněk B16?

Buněčná linie B16 byla vytvořena v roce 1954. Tyto buňky byly odvozeny z myší C57BL/6J, kterým se v Jacksonových laboratořích v Maine spontánně objevil nádor v kůži.
Jedná se o epitelové buňky produkující melanin, které mají schopnost metastazovat ve slezině, játrech a plicích.
Buňky melanomu B16 rostou jako monovrstvy a vykazují epiteliální a vřetenovitou buněčnou morfologii.
Velikost buněčné linie B16 je přibližně 15,4 μm.
Existují různé subklony buněk B16, včetně B16GMCSF, B164A5, B16FLT3 a B16F10. Tyto sublinie se liší od mateřských buněk B16 a zachovávají si některé specifické vlastnosti. Liší se například morfologií, velikostí buněk a dalšími vlastnostmi. B16F10 má vysokou schopnost metastazovat do plic a B164A5 je nejagresivnější buněčnou linií rakoviny kůže ve srovnání s B16F10, B16-GMCSF a B16FLT3 [1].

3D animace detailního záběru rostoucí rakoviny kůže, například maligního melanomu, který způsobuje zánět okolní tkáně.

2.informace o kultivaci buněčné linie B16

Před udržováním nebo kultivací buněčné linie můžete vyhledat klíčové informace o době zdvojení, typu buněk, růstových médiích, podmínkách kultivace atd. Tato část obsahuje všechny potřebné informace pro kultivaci buněk B16.

Klíčové body pro kultivaci buněk B16

Doba zdvojení populace:	Průměrná doba zdvojení populace buněk B16 se odhaduje na 24 hodin.
Adherentní nebo v suspenzi:	Buňky B16 jsou adherentní a rostou v monovrstvách.
Hustota výsevu:	Buňky B16 se doporučuje vysévat při hustotě 1 až 2 x¹⁰⁴ ^buněk/cm2. Přichycené buňky B16 se opláchnou 1 x PBS a disociují se od povrchu pomocí roztoku Accutase. Buňky se odstředí a buněčná peleta se resuspenduje v růstovém médiu. Později se tyto buňky dávkují do nové růstové baňky.
Růstové médium:	Buňky B16 se kultivují v médiu EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) obsahujícím 10 % fetálního hovězího séra (FBS). Růstové médium by se mělo obnovovat 2-3krát týdně.
Růstové podmínky:	Pro pěstování buněčné linie B16 se používá zvlhčený inkubátor s přívodem 5 %_CO2 a teplotou 37 °C.
Skladování:	Tyto buňky se skladují při teplotě nižší než -150 °C nebo v plynné fázi kapalného dusíku, aby byla chráněna životaschopnost buněk.
Postup zmrazování a médium:	Pro zmrazení buněk B16 se používá zmrazovací médium CM-1 nebo CM-ACF s použitím pomalého zmrazovacího procesu.
Proces rozmrazování:	Zmrazené buňky B16 se rozmrazují při 37 °C ve vodní lázni obsahující antimikrobiální činidlo. Rozmražené buňky lze přímo kultivovat jejich dávkováním do baněk obsahujících růstové médium. Kromě toho lze tyto buňky odstředit, aby se odstranily složky zmrazovacího média, a poté kultivovat v novém médiu.
Úroveň biologické bezpečnosti:	S buněčnou linií B16 by se mělo manipulovat nebo by měla být udržována v laboratoři s úrovní biologické bezpečnosti 1.

Polokonfluentní vrstva buněk melanomu B16 při zvětšení 10x a 20x.

3. buněčné linie B16: Výhody a nevýhody

Stejně jako jiné buněčné linie má i linie B16 jedinečnou směs výhod a nevýhod. Některé významné výhody a nevýhody této melanomové buněčné linie jsou uvedeny v této části.

Výhody

B16 je prvním účinným myším nástrojem široce používaným ve výzkumu metastáz díky výhodám, které nabízí. Některé výhody této buněčné linie kožního karcinomu jsou následující:

Snadné pěstování	Buněčná linie B16 se snadno kultivuje ve výzkumných laboratořích. Je široce využívána ke studiu biologie nádorových buněk, signálních drah a dalších.
Rychlý růst	Buněčná linie melanomu B16 vykazuje vysokou míru proliferace, takže je vhodná pro studium buněčného dělení a růstových procesů.
Nádorová aktivita	B16 je tumorigenní buněčná linie s nádorovými vlastnostmi, jako je invaze, migrace a proliferace. Je cenná pro studium vzniku, progrese a metastazování nádorů.

Nevýhody

Nevýhody spojené s buněčnou linií B16 jsou následující:

Nedostatečná relevance pro člověka	Vzhledem k tomu, že B16 je buněčná linie myšího melanomu, nemusí přesně reprezentovat biologii rakoviny kůže u člověka, což omezuje přenositelnost výsledků výzkumu.
Heterogenita	Buňky B16 jsou heterogenní a vykazují různé genetické a fenotypové vlastnosti v rámci jedné kultury. To může ovlivnit spolehlivost a reprodukovatelnost výsledků.

4. aplikace buněk B16

Buněčná linie B16 se hojně používá ve výzkumných studiích. Několik slibných aplikací této buněčné linie je:

Biologie nádorů: Tato buněčná linie myšího karcinomu kůže je nádorová a široce se používá k pochopení biologie nádorů. Pomocí buněk B16 bylo provedeno několik studií zaměřených na zkoumání buněčných mechanismů, které stojí za růstem, proliferací a metastazováním nádorových buněk. Výzkumná studie provedená v roce 2020 využila buňky B16 ke zkoumání úlohy dlouhé nekódující RNA, LncRNA MEG3, při vzniku, růstu a metastazování melanomu. Tento výzkum zjistil, že tato nekódující RNA moduluje osu miRNA-21/E-Cadherin a stimuluje tak tyto buněčné děje [2]. Stejně tak byl proveden výzkum, který zkoumal potenciální roli signalizace Notch1 v imunosupresi vyvolané nádorem s využitím buněk B16 [3].
Objevování léčiv: Buňky B16 se používají k ověřování a testování potenciálních terapeutických účinků kandidátních léčiv. Studie hodnotila protinádorový účinek kyseliny neogambogové, přírodní sloučeniny, s použitím buněčné linie B16. Výsledky studie ukázaly, že tato sloučenina moduluje signální dráhu PI3K/Akt/mTOR a způsobuje smrt nádorových buněk [4]. Další studie zkoumala antimelanomový účinek saponinu Ginsenoside Rg3 s použitím buněčné linie B16. Výzkum navrhl, že tato přírodní sloučenina způsobuje protinádorovou aktivitu prostřednictvím downregulace drah ERK a Akt [5].

430,00 €*

Obsah: 1.5 milliliter

Ceny bez daní a nákladů na dopravu

cryovial

Číslo výrobku: 305154

5.výzkumné publikace s buňkami B16

Zde jsou uvedeny některé významné výzkumné publikace týkající se buněčné linie melanomu B16.

LncRNA MEG3 podporuje růst, metastazování a tvorbu melanomu prostřednictvím modulace osy miR-21/E-kadherin

Tato publikace v časopise Cancer Cell International (2020) navrhuje, že dlouhá nekódující RNA MEG3 zvyšuje tvorbu, růst a metastazování buněk melanomu B16 modulací osy miRNA-21/E-Cadherin.

Nový derivát psoralenu - MPFC zvyšuje melanogenezi prostřednictvím aktivace signálních drah p38 MAPK a PKA v buňkách B16

Tento článek byl publikován v časopise International Journal of Molecular Medicine v roce 2018. Tato studie zkoumala melanogenní účinek a mechanismy derivátu psoralenu - 4-methyl-6-fenyl-2H-furo[3,2-g] chromen-2-onu (MPFC) v buňkách B16. Studie navrhla, že tento derivát podporuje melanogenezi stimulací buněčné signalizace PKA a p38 MAPK.

Signalizace Notch1 v melanomových buňkách podporuje imunosupresi vyvolanou nádorem prostřednictvím upregulace TGF-β1

Tento výzkum byl publikován v roce 2018 v časopise Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. Výsledky studie naznačují, že aktivace signalizace Notch1 v buňkách B16 může bránit protinádorové imunitě zvýšením exprese genu TGF-β1.

Kyselina neogambogová indukuje apoptózu buněk melanomu B16 prostřednictvím signální dráhy PI3K/Akt/mTOR

Tuto studii provedl Chunlan Wu se svými kolegy v roce 2020 a publikoval ji v časopise Acta Biochimica Polonica. Tento výzkum uvádí, že přírodní sloučenina kyselina neogambogová může způsobit smrt buněk melanomu B16 prostřednictvím modulace signalizační kaskády PI3K/Akt/mTOR.

Komplex iridia (III) jako účinná protinádorová látka indukuje apoptózu a autofagii v buňkách B16 prostřednictvím inhibice dráhy AKT/mTOR

Tato výzkumná práce byla publikována v časopise European Journal of Medicinal Chemistry v roce 2018. V této studii vědci zkoumali protinádorovou aktivitu sloučeniny, komplexu iridia (III), za použití buněk melanomu B16.

Ailanton indukuje zástavu buněčného cyklu a apoptózu u melanomových buněk B16 a A375

Tato studie navrhla, že rostlinná bioaktivní látka, ailanton, má protinádorový potenciál, protože může vyvolat apoptózu a zástavu buněčného cyklu u melanomových buněk B16 a A375. Tato práce byla publikována v časopise Biomolecules v roce 2019.

6. zdroje pro buněčnou linii B16: B16: protokoly, videa a další zdroje

K dispozici jsou omezené zdroje o buněčné linii B16 vysvětlující její kultivaci a transfekční protokoly.

Kultivace melanomových buněk: Toto video poskytuje cenné tipy pro kultivaci melanomových buněčných linií.
Subkultivace buněčné linie: Toto video vysvětluje obecný protokol subkultivace buněčné linie.
Transfekce buněčné linie B16F10: Toto video vysvětluje protokol transfekce pro sublinie melanomových buněk B16. Může vám pomoci optimalizovat transfekční protokol pro buňky B16.

Následují některé protokoly buněčných kultur pro buňky B16.

Kultivace buněk B16: Tato webová stránka obsahuje všechny potřebné informace pro kultivaci buněk B16, včetně růstových médií, subkultivace, rozmrazování a zmrazování buněk.

Odkazy

Danciu, C., et al., Behaviour of four different B 16 murine melanoma cell sublines (Chování čtyř různých buněčných podlinek myšího melanomu B 16): C57 BL/6J skin. International journal of experimental pathology, 2015. 96(2): p. 73-80.
Wu, L., et al., LncRNA MEG3 podporuje růst, tvorbu metastáz a melanomu prostřednictvím modulace osy miR-21/E-cadherin. Cancer cell international, 2020. 20: p. 1-14.
Yang, Z., et al., Notch1 signalizace v melanomových buňkách podporuje imunosupresi vyvolanou nádorem prostřednictvím upregulace TGF-β1. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2018. 37(1): p. 1-13.
Wu, C., et al., Neogambogová kyselina indukuje apoptózu melanomových buněk B16 prostřednictvím signální dráhy PI3K/Akt/mTOR. Acta Biochimica Polonica, 2020. 67(2): p. 197-202.
Meng, L., et al. antitumorózní aktivita ginsenosidu Rg3 u melanomu prostřednictvím downregulace drah ERK a Akt. International Journal of Oncology, 2019. 54(6): p. 2069-2079.