Buňky B16-F10 - zkoumání buněčné linie melanomu B16-F10 ve výzkumu metastáz
BuňkyB16-F10 představují melanomovou buněčnou linii získanou z myší C57BL/6J. Jsou široce používány ve výzkumu rakoviny kůže. Výzkumníci tyto buňky používají ke studiu vývoje a progrese nádorů a terapeutických zásahů. Tento článek se zabývá základními aspekty melanomových buněk B16-F10. Zejména se bude zabývat těmito tématy:
- Původ a obecné charakteristiky buněčné linie B16-F10
- Informace o kultivaci buněk B16-F10
- Buňky B16-F10: Výhody a nevýhody
- Výzkumné aplikace buněk B16-F10
- Publikace obsahující buněčnou linii B16-F10
- Zdroje pro buněčnou linii B16-F10: Protokoly, videa a další zdroje
1. Původ a obecné vlastnosti buněčné linie B16-F10
Tato část vám poskytne informace o původu a charakteristických vlastnostech nádorových buněk melanomu B16F10. Pomůže vám tuto buněčnou linii efektivně využívat ve vaší výzkumné práci. Dozvíte se především: Co jsou buňky B16-F10? Z čeho je B16F10 odvozena? Jaká je morfologie buněčné linie B16F12? Jaká je velikost buněk B16F10?
- B16-F10 je subklon nádorové buněčné linie B16 odvozené z kožní tkáně myší C57BL/6J. V tomto případě byly melanomové buňky B16F10 vyvinuty po intravenózní injekci linie B16 imunokompromitovaným nebo syngenním myším. Tyto buňky byly vybrány pro svůj potenciál tvořit metastazující plicní kolonie in vivo a poté byly po deseti cyklech tvorby plicních kolonií zavedeny in vitro [1]. Vyvinul ji Fidler a jeho kolegové v roce 1976.
- Buněčné linie B16-F10 mají epiteliální a vřetenovitý vzhled.
- Přibližná velikost buněk B16-F10 je 15,4 ± 1,4 μm [2].
Buňky B16-F1 a B16-F10
Buňky B16-F1 a B16-F10 byly odvozeny z mateřské buněčné linie B16. Obě vznikly stejně a mají téměř podobné vlastnosti. Hlavním rozdílem je však jejich metastatická schopnost. Buňky B16-F10 mají vysoký, zatímco B16-F1 nízký metastatický potenciál [3].
2.informace o kultivaci buněk B16-F10
Před manipulací s buněčnou linií a její kultivací je třeba znát informace o době zdvojení, růstových médiích, podmínkách a protokolech kultivace buněk. V tomto oddíle se budeme zabývat: Jaká je doba zdvojení buněk b16-f10? Jak se kultivují buňky B16F10? Jaká jsou média pro buňky B16-F10? Jaké kultivační podmínky se doporučují pro buňky B16-F10?
Klíčové body pro kultivaci buněk B16-F10
|
Doba zdvojení: |
Doba zdvojení buněk B16-F10 je přibližně 20,1 hodiny. V závislosti na kultivačních podmínkách se může pohybovat v rozmezí 17 až 21 hodin. |
|
Adherentní nebo v suspenzi: |
B16-F10 je adherentní buněčná linie. Buňky rostou rychle a vytvářejí monovrstvy. |
|
Poměr dělení: |
B16-F10 se subkultivuje v poměru 1:2 až 1:4. Buňky se promyjí fyziologickým roztokem fosfátového pufru (1x) a poté se inkubují s pasážovacím roztokem Accutase po dobu 8 až 10 minut při pokojové teplotě. Buňky se doplní čerstvým médiem a odstředí se. Sklizený buněčný pellet se opět resuspenduje a buňky se rozdělí do nové baňky obsahující čerstvé kultivační médium podle poměru rozdělení. |
|
Růstové médium: |
Buňky B16-F10 se kultivují v médiu DMEM. Médium je doplněno 10 % FBS, 4 mM L-Glutaminem, 1,5 g/L NaHCO3, 4,5 g/L Glukózy a 1,0 mM pyruvátu sodného pro ideální růst buněk. Médium by se mělo vyměňovat 2 až 3krát týdně. |
|
Podmínky růstu: |
Buňky B16-F10 se pěstují ve zvlhčeném inkubátoru při teplotě 37 °C s 5% přívodem CO2. |
|
Skladování: |
Pro zachování životaschopnosti buněk se zmrazené buňky skladují při teplotě nižší než -150 °C v elektrické mrazničce s velmi nízkou teplotou nebo v plynné fázi tekutého dusíku. |
|
Postup zmrazování a médium: |
Buňky B16-F10 se zmrazují v médiu CM-1 nebo CM-ACF pro skladování. Pro tento účel se doporučuje pomalý proces zmrazování, který umožňuje pokles teploty pouze o 1 °C za minutu, aby se zabránilo jakémukoli šoku buněk. |
|
Postup rozmrazování: |
Zmrazené buňky B16-F10 se rozmrazují v předem nastavené vodní lázni o teplotě 37 °C po dobu 40 až 60 sekund. Poté se buňky přidají do čerstvého média a odstředí se, aby se odstranily složky zmrazovacího média. Odebrané buňky se resuspendují v růstovém médiu a přelijí se do baněk pro kultivaci. |
|
Úroveň biologické bezpečnosti: |
Pro manipulaci s buněčnou linií B16-F10 a její údržbu je nutná laboratoř s úrovní biologické bezpečnosti 1. |
3.buňky B16-F10: Výhody a nevýhody
Stejně jako jiné buněčné linie vykazuje i B16-F10 některé výhody a nevýhody. V této části jsou popsány některé významné výhody a nevýhody této buněčné linie kožního melanomu.
Výhody
Buněčná linie B16-F10 se široce používá ve výzkumu rakoviny. Mezi výhody buněk B16-F10 patří:
|
Metastatický potenciál |
Buňky kožního melanomu B16F10 vykazují vysoký metastatický potenciál, což je činí cennými pro studium metastáz rakoviny a základních mechanismů. |
|
Model nádoru in vitro |
Buňky B16-F10 slouží jako in vitro model pro studium progrese a růstu rakoviny a pomáhají vědcům pochopit buněčné a molekulární mechanismy, které jsou příčinou vzniku rakoviny. |
Nevýhody
Nevýhody spojené s buněčnou linií B16-F10 jsou následující:
|
Buněčná linie odvozená od myši |
B16-F10 je buněčná linie odvozená od myši, což omezuje její použitelnost pro studie specifické pro člověka. Výsledky výzkumu z těchto buněk se nemusí vždy skutečně promítnout do biologie člověka. |
4.výzkumné aplikace buněk B16-F10
Buněčná linie B16-F10 se hojně používá ve výzkumu rakoviny. Zde je uvedeno několik slibných aplikací této buněčné linie.
- Výzkum rakoviny: Buněčná linie B16-F10 je cenným modelem pro studium procesů nádorových buněk, včetně proliferace, invaze, migrace a buněčné smrti nebo apoptózy. Kromě toho pomáhá výzkumníkům získat poznatky o molekulárních mechanismech a drahách, které tyto buněčné procesy řídí. Studie provedená v roce 2018 zkoumala roli CCR5 (C-C chemokinový receptor typu pět) v přechodu epiteliálních buněk melanomu na mezenchymální a v metastazování. Výsledky ukázaly, že nedostatek CCR5 omezuje růst a metastazování nádoru, zatímco vysoká exprese vede ke zvýšenému růstu a metastazování buněk B16-F10. Další výzkumy uvádějí, že CCR5 reguluje expresi TGFβ1, který reguluje signalizaci PI3K/AKT/GSK3β a podporuje tak přechod z epitelu do mezenchymu a migraci buněk [4].
- Testování a vývoj léčiv: Nádorové buňky melanomu B16F10 jsou vysoce agresivní, a proto jsou vhodné pro testování potenciálních protinádorových léčiv a léčebných postupů. Výzkumníci tyto buňky využívají a hodnotí vliv různých sloučenin na růst, proliferaci a metastazování buněk, což napomáhá vývoji léčiv. Studie, kterou v roce 2018 provedla Valentina Nanni a její kolegové, zkoumala léčebné účinky hydroalkoholového extraktu z květů Spartium junceum . Studie navrhla, že extrakt z květů je účinný při navození senescence u buněk B16-F10, což vede k potlačení buněčného růstu a melanogeneze, a může tak vyvíjet potenciální protinádorové aktivity [5].
5.publikace obsahující buněčnou linii B16-F10
Zde jsou uvedeny některé významné výzkumné publikace, které se týkají buněčné linie melanomu B16-F10:
Tato studie byla publikována v časopise Nutrients (2020). Navrhla, že etanolový extrakt z čiroku dvoubarevného má antimelanogenní účinek u buněk kožního melanomu B16F10.
Kalcitriol inhibuje proliferaci a potenciálně indukuje apoptózu u buněk B16-F10
Výzkum publikovaný v časopise Medical Science Monitor Basic Research (2022) navrhl, že lék kalcitriol působí protinádorově na buňky melanomu B16-F10 tím, že inhibuje proliferaci a indukuje apoptózu.
Tento článek byl publikován v časopise Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). Výsledky odhalily, že kardoly, resorcinolové lipidy, působí intenzivně cytotoxicky na buněčnou linii B16-F10.
Studie publikovaná v časopise Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018) zkoumala antimetastatický potenciál extraktu z exokarpu Ginkgo biloba s využitím buněk B16-F10.
Tento výzkum v časopise World Neurosurgery (2018) navrhl, že thymochinon může být účinnou terapií proti intracerebrálním metastatickým lézím, protože potlačuje růst buněk B16-F10 a indukuje apoptózu.
6.zdroje pro buněčnou linii B16-F10: Další zdroje: protokoly, videa a další
Endoteliální buňky B16F10 jsou široce používány ve výzkumu rakoviny kůže. Zde je několik online zdrojů vysvětlujících její kultivaci a transfekční protokoly:
- B16F10 melanomové buňky transfekce: Tento videonávod vám pomůže naučit se protokol transfekce buněk B16-F10.
- Transfekce buněk B16-F10: Tento dokument vysvětlí protokol transfekce DNA in vitro pro buňky kožního melanomu B16F10.
Následující odkaz obsahuje protokol buněčné kultivace pro buňky B16-F10:
- B16-F10: subkultivace buněk B16-F10: Tato webová stránka obsahuje užitečné informace o nádorových buňkách melanomu B16F10. Zahrnuje růstová média, dobu zdvojení, kultivační podmínky a protokol pro subkultivaci buněk a zacházení s kryokonzervovanými a proliferačními kulturami.
Odkazy
- Poste, G., et al., Comparison of the metastatic properties of B16 melanoma clones isolated from cultured cell lines, subcutaneous tumors, and individual lung metastases (Srovnání metastatických vlastností klonů melanomu B16 izolovaných z kultivovaných buněčných linií, subkutánních nádorů a jednotlivých plicních metastáz ). Cancer Research, 1982. 42(7): p. 2770-2778.
- Nakamura, M., D. Ono a S. Sugita, Mechanophenotyping of B16 Melanoma Cell Variants for the Assessment of the Efficacy of (-)-Epigallocatechin Gallate Treatment Using a Tapered Microfluidic Device (Mechanické fenotypování buněčných variant melanomu B16 pro hodnocení účinnosti léčby (-)-epigalokatechin galátem pomocí zúženého mikrofluidního zařízení). Micromachines, 2019. 10(3): p. 207.
- Danciu, C., a další, Chování čtyř různých buněčných podlinek myšího melanomu B16: C57BL/6J skin. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): p. 73-80.
- Liu, J., et al., High expression of CCR5 in melanoma enhances epithelial-mesenchymal transition and metastasis via TGFβ1. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): p. 481-493.
- Nanni, V., et al., Hydroalcoholic extract of Spartium junceum L. flowers inhibits growth and melanogenesis in B16-F10 cells by inducing senescence. Phytomedicine, 2018. 46: p. 1-10.