Buňky B16-F10 – zkoumání melanomové buněčné linie B16-F10 ve výzkumu metastáz
Buňky B16-F10 představují buněčnou linii melanomu odvozenou od myši C57BL/6J. Jsou široce využívány ve výzkumu rakoviny kůže. Vědci tyto buňky využívají ke studiu vývoje a progrese nádorů a terapeutických zásahů. Tento článek se bude zabývat základními aspekty melanomových buněk B16-F10. Zejména bude zahrnovat:
- Růstové médium
- Buňky B16-F10 se kultivují v médiu DMEM. Pro ideální růst buněk je médium doplněno 10 % FBS, 4 mM L-glutaminem, 1,5 g/l NaHCO3, 4,5 g/l glukózou a 1,0 mM pyruvátem sodným. Média by se měla vyměňovat 2 až 3krát týdně.
- Doba zdvojnásobení
- Doba zdvojnásobení buněk B16-F10 je přibližně 20,1 hodiny. Může se pohybovat v rozmezí 17 až 21 hodin, v závislosti na kultivačních podmínkách.
- Typ růstu
- B16-F10 je adhezivní buněčná linie. Buňky rostou rychle a tvoří monovrstvy.
- Úroveň biologické bezpečnosti
- BSL-1
- K dispozici u
- Cytion — Objednat B16-F10
- Původ a obecné charakteristiky buněčné linie B16-F10
- Informace o kultivaci buněk B16-F10
- Buňky B16-F10: Výhody a nevýhody
- Výzkumné aplikace buněk B16-F10
- Publikace zabývající se buněčnou linií B16-F10
- Zdroje pro buněčnou linii B16-F10: protokoly, videa a další
Původ a obecné charakteristiky buněčné linie B16-F10
Tato sekce vám poskytne informace o původu a charakteristických vlastnostech nádorových buněk melanomu B16F10. Pomůže vám efektivně využívat tuto buněčnou linii ve vaší výzkumné práci. Dozvíte se zejména: Co jsou buňky B16-F10? Odkud pochází B16F10? Jaká je morfologie buněčné linie B16F12? Jaká je velikost buňky B16F10?
- B16-F10 je subklon nádorové buněčné linie B16 odvozené z kožní tkáně myší C57BL/6J. Melanomové buňky B16F10 byly vyvinuty po intravenózním vstříknutí linie B16 do imunokompromitovaných nebo syngenních myší. Tyto buňky byly vybrány pro jejich schopnost tvořit metastatické plicní kolonie in vivo a poté byly etablovány po deseti cyklech tvorby plicních kolonií in vitro [1]. Byly vyvinuty Fidlerem a kolegy v roce 1976.
- Buněčné linie B16-F10 mají epiteliální vzhled a vřetenovitý tvar.
- Přibližná velikost buněk B16-F10 je 15,4 ± 1,4 μm [2].
Buňky B16-F1 a B16-F10
Buňky B16-F1 a B16-F10 byly odvozeny z mateřské buněčné linie B16. Obě pocházejí ze stejného zdroje a mají téměř stejné vlastnosti. Hlavním rozdílem je však jejich metastatická schopnost. Buňky B16-F10 mají vysoký, zatímco buňky B16-F1 mají nízký metastatický potenciál [3].
Informace o kultivaci buněk B16-F10
Před manipulací a kultivací buněčné linie je nutné znát její dobu zdvojnásobení, růstová média, podmínky a protokoly pro buněčnou kultivaci. V této části se budeme zabývat následujícími otázkami: Jaká je doba zdvojnásobení buněk B16-F10? Jak se kultivují buňky B16-F10? Jaká jsou růstová média pro buňky B16-F10? Jaké podmínky kultivace se doporučují pro buňky B16-F10?
Klíčové body pro kultivaci buněk B16-F10
Doba zdvojnásobení:
Doba zdvojnásobení buněk B16-F10 je přibližně 20,1 hodiny. Může se pohybovat v rozmezí 17 až 21 hodin, v závislosti na kultivačních podmínkách.
Adherentní nebo v suspenzi:
B16-F10 je adhezivní buněčná linie. Buňky rostou rychle a tvoří monovrstvy.
Poměr dělení:
Buňky B16-F10 se subkultivují v poměru dělení 1:2 až 1:4. Buňky se promyjí fosfátovým pufrem (1x) a poté se inkubují s pasážovacím roztokem Accutase po dobu 8 až 10 minut při pokojové teplotě. Do buněk se přidá čerstvé médium a centrifugují se. Získaný buněčný pelet se znovu resuspenduje a buňky se rozdělí do nové baňky obsahující čerstvé kultivační médium podle poměru dělení.
Růstové médium:
Buňky B16-F10 se kultivují v médiu DMEM. Médium je doplněno 10 % FBS, 4 mM L-glutaminem, 1,5 g/l NaHCO3, 4,5 g/l glukózou a 1,0 mM pyruvátem sodným pro ideální růst buněk. Média by měla být vyměňována 2 až 3krát týdně.
Podmínky růstu:
Buňky B16-F10 se pěstují ve zvlhčeném inkubátoru při teplotě 37 °C s přívodem 5 % CO2.
Skladování:
Zmrazené buňky se skladují při teplotě pod -150 °C v elektrickém mrazáku s extrémně nízkou teplotou nebo v plynné fázi kapalného dusíku, aby se zachovala životaschopnost buněk.
Proces zmrazování a médium:
Buňky B16-F10 se pro skladování zmrazují v médiích CM-1 nebo CM-ACF. K tomu se doporučuje proces pomalého zmrazování, který umožňuje pokles teploty pouze o 1 °C za minutu, aby se zabránilo šoku buněk.
Proces rozmrazování:
Zmrazené buňky B16-F10 se rozmrazují v předem nastavené vodní lázni o teplotě 37 °C po dobu 40 až 60 sekund. Poté se buňky přidají do čerstvého média a odstředí se, aby se odstranily složky zmrazovacího média. Shromážděné buňky se resuspendují v růstovém médiu a nalijí se do baňek pro kultivaci.
Úroveň biologické bezpečnosti:
Pro manipulaci a udržování buněčné linie B16-F10 je vyžadována laboratoř s úrovní biologické bezpečnosti 1.
Buňky B16-F10: Výhody a nevýhody
Stejně jako jiné buněčné linie má i B16-F10 některé výhody a nevýhody. V této části jsou popsány některé významné klady a zápory této buněčné linie kožního melanomu.
Výhody
Buněčná linie B16-F10 je široce využívána ve výzkumu rakoviny. Výhody buněk B16-F10 jsou:
Metastatický potenciál
Buňky B16F10 kožního melanomu vykazují vysoký metastatický potenciál, což je činí cennými pro studium metastázování rakoviny a souvisejících mechanismů.
In vitro model nádoru
Buňky B16-F10 slouží jako in vitro model pro studium progrese a růstu rakoviny a pomáhají vědcům porozumět buněčným a molekulárním mechanismům, které rakovinu pohánějí.
Nevýhody
Nevýhody spojené s buněčnou linií B16-F10 jsou:
Buněčná linie odvozená z myší
B16-F10 je buněčná linie odvozená z myší, což omezuje její použitelnost ve studiích zaměřených specificky na člověka. Výsledky výzkumu těchto buněk nemusí být vždy přímo přenositelné na lidskou biologii.
Výzkumné aplikace buněk B16-F10
Buněčná linie B16-F10 se hojně využívá ve výzkumu rakoviny. Zde se budeme zabývat několika slibnými aplikacemi této buněčné linie.
- Výzkum rakoviny: Buněčná linie B16-F10 je cenným modelem pro studium procesů v rakovinných buňkách, včetně proliferace, invaze, migrace a buněčné smrti neboli apoptózy. Kromě toho pomáhá výzkumníkům získat vhled do molekulárních mechanismů a drah, které tyto buněčné procesy řídí. Studie provedená v roce 2018 zkoumala roli CCR5 (C-C chemokinový receptor typu 5) v epiteliálně-mezenchymální transformaci a metastázování buněk melanomu. Výsledky odhalily, že nedostatek CCR5 omezuje růst nádoru a metastázy, zatímco vysoká exprese vede k zesílenému růstu a metastázování buněk B16-F10. Další výzkumy uvádějí, že CCR5 reguluje expresi TGFβ1, který reguluje signální dráhu PI3K/AKT/GSK3β a podporuje tak epiteliálně-mezenchymální přechod a buněčnou migraci [4].
- Testování a vývoj léčiv: Nádorové buňky melanomu B16F10 jsou vysoce agresivní, a proto jsou vhodné pro testování potenciálních protinádorových léků a léčebných postupů. Vědci tyto buňky využívají a hodnotí účinek různých sloučenin na buněčný růst, proliferaci a metastázy, čímž napomáhají vývoji léčiv. Studie provedená v roce 2018 Valentinou Nanni a kolegy zkoumala terapeutické účinky hydroalkoholického extraktu z květů Spartium junceum. Studie navrhla, že květinový extrakt byl účinný při vyvolávání senescence v buňkách B16-F10, což vede k potlačení buněčného růstu a melanogeneze, a může tak vykazovat potenciální protinádorové účinky [5].
5. Publikace zabývající se buněčnou linií B16-F10
Zde uvádíme některé významné výzkumné publikace zabývající se buněčnou linií melanomu B16-F10:
Tato studie byla publikována v časopise Nutrients (2020). Navrhuje, že etanolový extrakt z Sorghum bicolor má anti-melanogenní účinek na buňky melanomu B16F10.
Kalcitriol inhibuje proliferaci a potenciálně indukuje apoptózu v buňkách B16–F10
Výzkum publikovaný v časopise Medical Science Monitor Basic Research (2022) navrhuje, že lék kalcitriol má protinádorové účinky v buňkách melanomu B16-F10 tím, že inhibuje proliferaci a indukuje apoptózu.
Tento článek byl publikován v časopise Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). Výsledky odhalily, že kardoly, resorcinolové lipidy, vykazují intenzivní cytotoxicitu na buněčnou linii B16-F10.
Studie publikovaná v časopise Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018) zkoumala antimetastatický potenciál extraktu z exokarpu Ginkgo biloba na buňkách B16-F10.
Tento výzkum publikovaný v časopise World Neurosurgery (2018) navrhl, že thymoquinon může být účinnou terapií proti intracerebrálním metastatickým lézím, protože potlačuje růst buněk B16-F10 a indukuje apoptózu.
Zdroje pro buněčnou linii B16-F10: protokoly, videa a další
Endoteliální buňky B16F10 se široce používají ve výzkumu rakoviny kůže. Zde je několik online zdrojů vysvětlujících protokoly jejich kultivace a transfekce:
- Transfekce melanomových buněk B16F10: Tento videonávod vám pomůže seznámit se s protokolem transfekce buněk B16-F10.
- Transfekce B16-F10: Tento dokument vysvětluje protokol in vitro transfekce DNA pro buňky kožního melanomu B16F10.
Následující odkaz obsahuje protokol pro kultivaci buněk B16-F10:
- Subkultivace B16-F10: Tato webová stránka obsahuje užitečné informace o nádorových buňkách melanomu B16F10. Zahrnuje růstová média, dobu zdvojnásobení, podmínky kultivace a protokol pro subkultivaci buněk a manipulaci s kryokonzervovanými a proliferativními kulturami.
Reference
- Poste, G., et al., Srovnání metastatických vlastností klonů melanomu B16 izolovaných z kultivovaných buněčných linií, subkutánních nádorů a jednotlivých plicních metastáz. Cancer Research, 1982. 42(7): s. 2770–2778.
- Nakamura, M., D. Ono a S. Sugita, Mechanofenotypizace variant buněk melanomu B16 pro hodnocení účinnosti léčby (-)-epigallokatechin-galátem pomocí zúženého mikrofluidního zařízení. Micromachines, 2019. 10(3): s. 207.
- Danciu, C. a kol., Chování čtyř různých subliní myších melanomových buněk B16: kůže C57BL/6J. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): s. 73–80.
- Liu, J., et al., Vysoká exprese CCR5 v melanomu zvyšuje epiteliálně-mezenchymální přechod a metastázy prostřednictvím TGFβ1. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): s. 481–493.
- Nanni, V., et al., Hydroalkoholický extrakt z květů Spartium junceum L. inhibuje růst a melanogenezi v buňkách B16-F10 indukcí senescence. Phytomedicine, 2018. 46: s. 1-10.