Buněčná linie A375 – průvodce výzkumem melanomu

A375 je lidská buněčná linie melanomu široce používaná v toxikologickém a imunoonkologickém výzkumu. Vědci tuto buněčnou linii využívají ke studiu biologie rakoviny a signálních drah, k testování nebo screeningu potenciálních protinádorových látek a k vývoji nových a účinných léčiv.

Původ a obecné charakteristiky buněk A375

Znalost původu a obecných charakteristik buněčné linie vám může pomoci při plánování jejího využití ve výzkumu. Tato část článku se bude zabývat původem a vlastnostmi buněčné linie A375. Například: Co je buněčná linie A375? Jaké jsou charakteristiky buněčné linie A375? Odkud pocházejí buňky A375? Jaká je morfologie melanomových buněk A375? Jaká je velikost buněk A375?

• Buněčná linie A375 pochází z explantátové kultury solidního nádoru 54leté ženy s maligním melanomem [1].
• Buňky A375 mají epiteliální morfologii.
• Velikost buněk A375 je relativně menší ve srovnání s jinými buněčnými liniemi. Mají přibližně průměr 12 µm.
• Melanomové buňky A375 jsou hypotriploidní. Modální počet chromozomů pro tuto buněčnou linii je 62. Obvykle má každá buňka devět markerových chromozomů a jednu kopii normálních chromozomů N2, N6 a N22.

Buňky A375: Informace o buněčné kultuře

Buněčné kultury A375 se snadno udržují. Nemají žádné náročné požadavky na kultivaci. Tato sekce vám pomůže seznámit se s nezbytnými informacemi o buněčné kultuře. Například jaká je doba zdvojnásobení buněk A375. Jaké je médium pro buněčnou linii A375? Jaká je hustota výsevu buněk A375? Jsou melanomové buňky A375 adhezivní?

Klíčové body pro kultivaci buněk A375

Doba zdvojnásobení populace:

Doba zdvojnásobení buněk A375 je 20 hodin.

Adhezivní nebo v suspenzi:

A375 je adhezivní lidská melanomová buněčná linie.

Hustota výsevu:

Pro kultivaci buněk A375 je ideální hustota 1 x 10⁴ buněk/cm². Adherentní buňky se promyjí 1x fosfátovým pufrem (PBS) a inkubují se s pasážovacím roztokem (Accutase). Poté se k buňkám přidá kultivační médium a centrifugují se. Sklizené buňky se resuspendují v kultivačním médiu a rozdělí se do nových lahví pro růst.

Růstové médium:

Jako ideální médium pro A375 se doporučuje DMEM doplněné o 10 % fetálního bovinního séra (FBS), 4,5 g/l glukózy, 1,5 g/l NaHCO3, 4 mM L-glutaminu a 1,0 mM pyruvátu sodného. Médium pro A375 by se mělo obnovovat 2–3krát týdně.

Podmínky kultivace:

Melanomové buňky A375 se pěstují ve zvlhčeném inkubátoru (37 °C) s přívodem 5 % CO2.

Skladování:

Zmrazené buňky A375 by měly být uchovávány při teplotě pod -150 °C v plynné fázi kapalného dusíku nebo v elektrickém mrazáku.

Proces zmrazování a médium:

K zmrazení buněčné linie A375 se používají média CM-1 nebo CM-ACF. Pro zachování životaschopnosti buněk byl zvolen proces pomalého zmrazování, který umožňuje postupný pokles teploty o 1 °C.

Proces rozmrazování:

Lahvička se zmrazenými melanomovými buňkami A375 se rychle protřepává ve vodní lázni po dobu 40 až 60 sekund, dokud nezůstane pouze malá hrudka ledu. K buňkám se přidá čerstvé médium a centrifugují se, aby se odstranily prvky zmrazovacího média. Získaný buněčný pelet se znovu resuspenduje a nalije do nových lahví.

Úroveň biologické bezpečnosti:

S kulturami A375 se manipuluje a udržují se v laboratorních podmínkách úrovně biologické bezpečnosti 1.

Výzkumné využití buněčné linie A375

Buněčná linie A375 má široké využití ve výzkumu rakoviny. Zde jsou některé z běžných oblastí, kde se buňky A375 používají.

• Výzkum rakoviny: Buňky A375 mají široké uplatnění ve výzkumu melanomu. Vědci tyto buňky použili k výzkumu biologie rakoviny kůže, jejích procesů a základních mechanismů buněčné signalizace, včetně buněčné proliferace, migrace a invaze. To může vědcům pomoci také při identifikaci nových molekulárních terapeutických cílů. Studie provedená Lin Zhu a kolegy v roce 2019 použila vysoce agresivní melanomové buňky A375 a zjistila roli mikroRNA-3662 na růst a invazi melanomových buněk A375. Závěry studie uvádějí, že mikroRNA-3662 cílí na gen ZEB1 a reguluje růst melanomových buněk in vitro a in vivo v nádorovém modelu A375 [2]. Podobně výzkum provedený v roce 2018 zjistil, že signální dráhy PI3K/AKT a MAPK/ERK se podílejí na proliferaci a metastázování buněčné linie A375 [3].
• Objev a testování léčiv: Buněčná linie A375 je užitečným in vitro nádorovým modelem pro testování a screening potenciálních protinádorových látek. Vědci pomocí těchto melanomových buněk A375 hodnotí toxicitu a účinnost nových chemoterapeutických léků, sloučenin a dalších terapií. Například jedna studie zkoumala protinádorové vlastnosti mikro- a nanovesikul odvozených z grapefruitu na lidských melanomových buňkách A375. Výsledky odhalily, že mikro- a nanovesikuly indukují zastavení buněčného cyklu a apoptózu a brání genové expresi při buněčné proliferaci, migraci a invazi [4].

Buňky A375: Publikace

Zde jsou uvedeny některé významné výzkumné publikace zabývající se buňkami A375.

Vitamin D a jeho analogy s nízkým vápníkovým obsahem modulují protinádorové vlastnosti cisplatiny a dakarbazinu v lidské buněčné linii melanomu A375

Tato studie byla publikována v časopise Journal of Oncology v roce 2019. Studie navrhla, že souběžná léčba vitamínem D a jeho analogy zlepšuje protinádorovou aktivitu cisplatiny a dakarbazinu v buňkách melanomu A375.

In vitro hodnocení protimelanomových účinků (buněčná linie A375) gelu a extraktů z celých listů vybraných druhů aloe

Tento výzkum byl publikován v časopise Journal of Herbal Medicine v roce 2022. Tato studie zkoumala účinky aloe vera gelu proti melanomu v buňkách melanomu A375.

Člen rodiny fermitinů 2 podporuje progresi melanomu tím, že zvyšuje vazbu p-α-Pix na Rac1 a aktivuje tak MAPK signální dráhu

Tato studie v časopise Oncogene (2021) navrhla, že člen rodiny fermitinů 2 (FERMT2 nebo kindlin-2) podporuje progresi melanomu prostřednictvím aktivace MAPK vazbou s p-α-Pix a Rac1.

FARP1 usnadňuje buněčnou proliferaci prostřednictvím modulace signální dráhy MAPK u kožního melanomu

Tato studie v časopise The American Journal of Dermatopathology (2019) navrhuje, že FARP1 může usnadňovat vývoj a progresi kožního melanomu. Může tedy být užitečným terapeutickým cílem.

Cytotoxický a apoptotický potenciál extraktů z Phyllodium elegans na lidské nádorové buněčné linie

Tento výzkumný článek byl publikován v časopise Bioengineered (2019). Tato studie zkoumala cytotoxickou a apoptotickou aktivitu extraktu z rostliny Phyllodium elegans na lidské karcinomové buněčné linie, včetně A375.

Zdroje pro buněčnou linii A375: protokoly, videa a další

Níže uvádíme několik online zdrojů věnovaných buňkám A375.

• Transfekce buněk A375: Tento videonávod vám pomůže krok za krokem se naučit transfekci buněk A375.
• Pěstování buněk: Toto video obsahuje velmi užitečné informace týkající se pěstování buněčných linií.

Protokoly pro kultivaci buněk A375 jsou uvedeny zde.

• Buněčná linie A375: Tento odkaz obsahuje užitečné informace o kultivaci a údržbě buněčné linie A375, včetně médií pro A375 a manipulace se zmrazenými a proliferujícími kulturami A375.

Literatura

1. Avram, S., et al., Standardizace modelů lidského melanomu A375 na chorioallantoické membráně kuřecích embryí a nahých myších Balb/c. Oncol Rep, 2017. 38(1): s. 89–99.
2. Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 se zaměřuje na ZEB1 a tlumí invazi vysoce agresivní buněčné linie melanomu A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: s. 5845–5856.
3. Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C inhibuje proliferaci a metastázy buněk melanomu A375 prostřednictvím potlačení signálních drah PI3K/Akt a MAPK/ERK. Life sciences, 2018. 206: s. 35–44.
4. Stanly, C., et al., Mikro- a nanovesikuly získané z grapefruitu vykazují odlišné metabolomické profily a protinádorové účinky v lidské buněčné linii melanomu A375. Cells, 2020. 9(12): s. 2722.