Buněčná linie A375 - průvodce výzkumem melanomu

A375 je lidská melanomová buněčná linie široce používaná v toxikologickém a imunoonkologickém výzkumu. Výzkumníci tuto buněčnou linii využívají ke studiu biologie rakoviny a signálních drah, k testování nebo screeningu potenciálních protinádorových látek a k vývoji nových a účinných terapeutik.

Původ a obecné vlastnosti buněk A375

Znalost původu a obecných charakteristik buněčné linie vám může pomoci při plánování jejího použití ve výzkumu. Tato část článku se zabývá původem a vlastnostmi buněčné linie A375. Co je například buněčná linie A375? Jaké jsou vlastnosti buněčné linie A375? Odkud buňky A375 pocházejí? Jaká je morfologie melanomových buněk A375? Jaká je velikost buněk A375?

Buněčná linie kožního nádoru A375 pochází z explantátové kultury solidního nádoru 54leté ženy s maligním melanomem [1].
Buňky A375 mají epiteliální morfologii.
Velikost buněk A375 je ve srovnání s jinými buněčnými liniemi relativně menší. Jejich průměr je zhruba 12 µm.
Buňky melanomu A375 jsou hypotriploidní. Modální počet chromozomů této buněčné linie je 62. Obvykle má každá buňka devět markerových chromozomů a jednu kopii normálních chromozomů N2, N6 a N22.

Lékař vyšetří výrůstky na kůži dospělého člověka, zda se nejedná o rakovinu kůže.

Buňky A375: Informace o buněčných kulturách

Buněčné kultury A375 se snadno udržují. Nemají žádné náročné požadavky na kultivaci buněk. Tato část vám pomůže dozvědět se potřebné informace o buněčných kulturách. Například jaká je doba zdvojení buněk A375. Jaká jsou média buněčné linie A375? Jaká je hustota výsevu A375? Jsou buňky melanomu A375 adherentní?

Klíčové body pro kultivaci buněk A375

Doba zdvojení populace:	Doba zdvojení populace A375 je 20 hodin.
Adherentní nebo v suspenzi:	A375 je adherentní linie lidských melanomových buněk.
Hustota výsevu:	hustota^buněk: 1 x¹⁰⁴ buněk/cm2 je ideální pro buněčné kultury A375. Adherentní buňky se opláchnou 1 x fosfátovým pufrem (PBS) a inkubují se s pasážovacím roztokem (Accutase). Poté byly buňky doplněny kultivačním médiem a odstředěny. Sklizené buňky byly resuspendovány v kultivačním médiu a rozděleny do nových baněk pro růst.
Kultivační médium:	Jako ideální médium pro A375 se doporučuje DMEM doplněný 10 % fetálního hovězího séra (FBS), 4,5 g/l glukózy, 1,5 g/l NaHCO3, 4 mM L-glutaminu a 1,0 mM pyruvátu sodného. Médium A375 by se mělo obnovovat 2-3 dny v týdnu.
Růstové podmínky:	A375 melanomové buňky se pěstují ve zvlhčeném inkubátoru (37 °C) s 5% přívodem CO2.
Skladování:	Zmrazené buňky A375 by měly být uchovávány při teplotě nižší než -150 °C v plynné fázi tekutého dusíku nebo v elektrickém mrazáku.
Postup zmrazování a médium:	Ke zmrazení buněčné linie A375 se používají média CM-1 nebo CM-ACF. Pro ochranu životaschopnosti buněk byl zvolen pomalý proces zmrazování, který umožňuje postupné snižování teploty o 1 °C.
Postup rozmrazování:	Zmrazená lahvička s melanomovými buňkami A375 se rychle míchá ve vodní lázni po dobu 40 až 60 sekund, dokud nezůstane jen malý ledový chuchvalec. Buňky se doplní čerstvým médiem a odstředí se, aby se odstranily prvky zmrazovacího média. Získaná buněčná peleta se opět resuspenduje a přelije do nových baněk.
Úroveň biologické bezpečnosti:	S kulturami A375 se zachází a udržují v laboratorních podmínkách úrovně biologické bezpečnosti 1.

Konfluentní vrstva adherentních buněk A375 při 20násobném zvětšení.

Výhody a omezení buněčné linie A375

Stejně jako jiné buněčné linie je i melanomová buněčná linie A375 spojena s jedinečnou kombinací výhod a omezení, což z ní činí cenný nástroj pro výzkum melanomové rakoviny. V této části je uvedeno pouze několik významných výhod a nevýhod buněčné linie A375.

Výhody

Níže jsou uvedeny významné výhody buněk A375:

Model melanomového nádoru: Buněčná linie A375 byla odvozena z maligního melanomového nádoru, a slouží tak jako neocenitelný nádorový model pro zkoumání biologie melanomu a terapeutických zásahů. Tyto buňky vykazují vlastnosti podobné melanomu, jako je vysoká míra proliferace a invazivita.
Nádorová aktivita: Buňky A375 jsou vysoce tumorigenní, což znamená, že mohou vytvářet nádory. Uvádí se, že buňky A375 vytvářejí agresivní amelanotické melanomy u myší NIH Swiss, kterým je podáváno sérum proti tymocytům (imunosupresivní látka).
Dobře charakterizované: A375 je geneticky dobře charakterizovaná buněčná linie. Vykazuje specifické genetické mutace jako melanom. Mutace A375 zahrnují změnu genu A375 BRAF, díky níž je citlivá na inhibitory specifické pro BRAF. Díky tomuto genetickému profilu jsou tedy buňky A375 skvělým nástrojem výzkumu rakoviny pro studium základních molekulárních drah a cílených terapií.

Omezení

Omezení spojená s buňkami A375 jsou následující:

Omezení in vitro: A375 je in vitro model nádoru. I když napodobuje vlastnosti melanomu, nemůže plně reprezentovat komplexnost melanomových nádorů. Proto je třeba opatrnosti při zobecňování výsledků in vitro na klinické studie.

Zakupte si své buňky A375 nyní

430,00 €*

Obsah: 1.5 milliliter

Ceny bez daní a nákladů na dopravu

cryovial

Číslo výrobku: 300110

Výzkumné využití buněčné linie A375

Buněčná linie A375 má široké využití ve výzkumu rakoviny. Zde jsou uvedeny některé z běžných oblastí, kde se buňky A375 využívají.

Výzkum rakoviny: Buňky A375 mají široké uplatnění ve výzkumu melanomu. Výzkumníci tyto buňky používají ke zkoumání biologie rakoviny kůže, procesů a základních mechanismů buněčné signalizace, včetně buněčné proliferace, migrace a invaze. To může výzkumníkům také pomoci identifikovat nové molekulární terapeutické cíle. Studie, kterou v roce 2019 provedl Lin Zhu s kolegy, použila vysoce agresivní melanomové buňky A375 a zjistila roli mikroRNA-3662 na růst a invazi melanomových buněk A375. Závěry studie uvádějí, že mikroRNA-3662 cílí na gen ZEB1 a reguluje růst melanomových buněk in vitro a in vivo na modelu nádoru A375 [2]. Podobně výzkum provedený v roce 2018 zjistil, že na proliferaci a metastazování buněčné linie A375 se podílejí dráhy PI3K/AKT a MAPK/ERK [3].
Objevování a testování léčiv: Buněčná linie A375 je užitečným in vitro modelem nádoru pro testování a screening potenciálních protinádorových látek. Vědci pomocí těchto melanomových buněk A375 hodnotí toxicitu a účinnost nových chemoterapeutik, sloučenin a dalších léčebných postupů. Studie například zkoumala protinádorové vlastnosti mikro- a nanovesikulí získaných z grapefruitu na buňkách lidského melanomu A375. Výsledky odhalily, že mikro a nanovesikuly vyvolávají zástavu buněčného cyklu a apoptózu a brzdí expresi genů v buněčné proliferaci, migraci a invazi [4].

Buňky A375: Publikace

Zde jsou uvedeny některé významné výzkumné publikace týkající se buněk A375.

Vitamin D a jeho nízkokalcemické analogy modulují protinádorové vlastnosti cisplatiny a dakarbazinu u buněčné linie lidského melanomu A375

Tato studie byla publikována v časopise Journal of Oncology v roce 2019. Studie navrhla, že současná léčba vitaminem D a jeho analogy zlepšuje protinádorovou aktivitu cisplatiny a dakarbazinu u melanomových buněk A375.

In vitro hodnocení protimelanomových účinků (buněčná linie A375) gelu a celých extraktů z listů vybraných druhů aloe

Tento výzkum byl publikován v časopise Journal of Herbal Medicine v roce 2022. Tato studie zkoumala antimelanomové účinky gelu z aloe vera u melanomových buněk A375.

Člen rodiny fermitinů 2 podporuje progresi melanomu tím, že zvyšuje vazbu p-α-Pix na Rac1 za účelem aktivace dráhy MAPK

Tato studie v časopise Oncogene (2021) navrhuje, že člen rodiny fermitinu 2 (FERMT2 nebo kindlin-2) podporuje progresi melanomu prostřednictvím aktivace MAPK vazbou s p-α-Pix a Rac1.

FARP1 usnadňuje buněčnou proliferaci prostřednictvím modulace signální dráhy MAPK u kožního melanomu

Tato studie v časopise The American Journal of Dermatopathology (2019) navrhla, že FARP1 může usnadňovat vývoj a progresi kožního melanomu. Může tak být užitečným terapeutickým cílem.

Cytotoxický a apoptotický potenciál extraktů z Phyllodium elegans na lidské nádorové buněčné linie

Tento výzkumný článek byl publikován v časopise Bioengineered (2019). Tato studie zkoumala cytotoxickou a apoptotickou aktivitu rostlinného extraktu Phyllodium elegans na lidských karcinomových buněčných liniích, včetně A375.

Zdroje pro buněčnou linii A375: Další zdroje: protokoly, videa a další

Níže je uvedeno několik online zdrojů s buňkami A375.

Transfekce buněk A375: Tento videonávod vám pomůže naučit se transfekci buněk A375 krok za krokem.
Kultivace buněk: Toto video obsahuje velmi užitečné informace o kultivaci buněčných linií.

Protokoly pro kultivaci buněk A375 jsou uvedeny zde.

Buněčná linie A375: Tento odkaz obsahuje užitečné informace o kultivaci a údržbě buněčné linie A375, včetně médií A375 a zacházení se zmrazenými a proliferujícími kulturami A375.

Často kladené otázky (FAQ) pro buňky A375

Odkazy

Avram, S., et al., Standardizace modelů lidského melanomu A375 na kuřecí embryonální chorioallantoické membráně a Balb/c nahých myších. Oncol Rep, 2017. 38(1): p. 89-99.
Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 cílí na ZEB1 a oslabuje invazi vysoce agresivní buněčné linie melanomu A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: p. 5845-5856.
Peng, X., et al., Oxyfadichalkon C inhibuje proliferaci a metastazování buněk melanomu A375 prostřednictvím potlačení drah PI3K/Akt a MAPK/ERK. Life sciences, 2018. 206: p. 35-44.
Stanly, C., et al., Grapefruit-derived micro and nanovesicles show distinct metabolome profiles and anticancer activities in the A375 human melanoma cell line. Cells, 2020. 9(12): p. 2722.