Buňky NCI-H460 – Výzkum rakoviny plic s využitím poznatků o linii NCI-H460

Informace o kultivaci buněk NCI-H460

Pro správnou manipulaci a péči o buněčnou linii NCI-H460 byste měli znát následující klíčové body. Dozvíte se zde informace o době zdvojnásobení buněk NCI-H460, kultivačním médiu pro NCI-H460 a základních postupech při kultivaci buněk NCI-H460 z plicního karcinomu.

Klíčové body pro kultivaci buněk NCI-H460

Doba zdvojnásobení:

Doba zdvojnásobení buněk NCI-H460 je přibližně 33 hodin.

Adherentní nebo v suspenzi:

Buňky rakoviny plic NCI-H460 jsou adhezivní.

Poměr při subkultivaci:

Doporučený poměr subkultivace pro buněčnou linii NCI-H460 je 1:2 a 1:4. Po odstranění starého média se adhezivní buňky propláchnou 1× fosfátovým pufrem. Poté se buňky inkubují s pasážovacím roztokem Accutase po dobu 8 až 10 minut při pokojové teplotě. Disociované buňky se resuspendují v kultivačním médiu a odstředí. Sklizené buňky se znovu resuspendují a přelijí do nové baňky pro kultivaci.

Růstové médium:

Jako kultivační médium pro NCI-H460 se používá RPMI 1640. Je doplněno 10 % fetálního bovinního séra, 2,1 mM stabilního glutaminu a 2,0 g/l NaHCO₃. Médium by se mělo vyměňovat 2 až 3krát týdně.

Podmínky kultivace:

Kultury NCI-H460 se udržují při teplotě 37 °C ve zvlhčeném inkubátoru s nepřetržitým přívodem 5 % CO₂.

Skladování:

Buňky rakoviny plic NCI-H460 lze dlouhodobě skladovat v plynné fázi kapalného dusíku nebo při teplotě pod -150 °C v elektrickém mrazáku s extrémně nízkou teplotou.

Proces zmrazování a médium:

K zmrazení a skladování buněk NCI-H460 se používá médium CM-1 nebo CM-ACF. Pro zachování maximální životaschopnosti buněk se doporučuje metoda pomalého zmrazování.

Proces rozmrazování:

Zmrazené buňky NCI-H460 se rozmrazují v předehřáté vodní lázni (při teplotě 37 °C) po dobu 40 až 60 sekund, dokud nezůstane pouze malá hrudka ledu. K rozmraženým buňkám se přidá čerstvé médium a buňky se odstředí, aby se odstranily složky mrazicího média. Získaný buněčný pelet se znovu resuspenduje a buňky se naočkují do nových lahví obsahujících médium pro růst. Přilnutí buněk NCI-H460 k povrchu lahve může trvat téměř 24 hodin.

Úroveň biologické bezpečnosti:

S buňkami rakoviny plic NCI-H460 se manipuluje a kultivují se v laboratořích s úrovní biologické bezpečnosti 1.

Zveřejněno: 2023 | Poslední revize: květen 2026

Výhody a nevýhody buněk NCI-H460

NCI-H460 je široce používaná buněčná linie ve výzkumu rakoviny plic. Tato část se bude zabývat obecnými výhodami a nevýhodami buněk rakoviny plic NCI-H460.

Výhody

Výhody buněčné linie NCI-H460 pro nemalobuněčný karcinom plic jsou:

• Původ nádoru

  Buněčná linie NCI-H460 byla odvozena od pacienta s velkobuněčným karcinomem plic a reprezentuje tento konkrétní typ rakoviny plic. Používá se jako model ke studiu biologie rakoviny plic a k vývoji nových a účinných léčebných postupů. Buňky NCI-H460 mají tumorigenní potenciál a lze je injikovat imunodeficientním myším za účelem vytvoření in vivo nádorových modelů pro studium růstu a vývoje nádoru a účinnosti potenciálních léčiv.

• Vysoká rychlost proliferace

  NCI-H460 vykazuje vyšší rychlost růstu než jiné buněčné linie nemalobuněčného karcinomu plic, jako je například A549. Tato výhoda zvyšuje jejich dostupnost a pomáhá výzkumníkům provádět reprodukovatelné a časově náročné experimenty.

Nevýhody

Nevýhody spojené s buňkami karcinomu plic NCI-H460 jsou:

• Homogenita

  Buňky NCI-H460 jsou homogenní, protože byly získány z nádoru jediného pacienta. Proto jim obecně chybí komplexnost a heterogenita pozorovaná u nádorů pacientů.

Výzkumné aplikace buněk NCI-H460

Buňky rakoviny plic NCI-H460 se hojně používají ve studiích týkajících se karcinomu plic. Zde jsou některé z důležitých výzkumných aplikací buněk NCI-H460:

• Výzkum rakoviny plic: Buňky NCI-H460 představují neocenitelný model pro zkoumání buněčných a molekulárních mechanismů podílejících se na vzniku, růstu a metastázování nádoru. Kromě toho se používají ke studiu klíčových signálních drah, molekulárních cílů a různých genetických mutací spojených s progresí rakoviny plic. Bylo provedeno několik studií na buňkách NCI-H460 s cílem tyto faktory účinně prozkoumat. Studie z roku 2019 navrhla, že nadměrně exprimovaný nukleární ubikvitinový kasein a substrát kináz závislých na cyklinu (NUCKS) se podílejí na růstu nádorových buněk prostřednictvím regulace signální dráhy PI3K/AKT [1]. Podobně studie in vitro a in vivo využila buňky NCI-H460 ke zkoumání role genu eIF4E. Výsledky odhalily, že gen eIF4E se podílí na růstu karcinomu plic a angiogenezi a může být cílem pro vývoj slibných léků proti rakovině plic [2].
• Objev a vývoj léčiv: NCI-H460, lidská buněčná linie rakoviny plic, je široce využívána ve studiích zaměřených na objev a vývoj léčiv. Vědci tyto buňky používají k výzkumu toxicity a účinnosti nových kandidátů na léčiva, cílených terapií a léčebných postupů zaměřených především na mutace genu KRAS v buňkách NCI-H460. Studie provedená Haoyue Hu a kolegy v roce 2023 využila buňky NCI-H460 ke zkoumání protinádorových účinků léčiva anlotinib. Výsledky ukázaly, že anlotinib částečně ovlivňoval růst buněk rakoviny plic s mutací v genu KRAS prostřednictvím inhibice signální kaskády MEK/ERK [3]. Podobně byla pomocí buněk NCI-H460 testována fenolová sloučenina, kyselina karnozová, na antiproliferační a proapoptotické účinky [4].
• Léková rezistence: Buněčná linie NCI-H460 je ideální pro studium mechanismu lékové rezistence u karcinomu plic. Vědci tyto buňky využívají k vývoji modelů lékové rezistence za účelem identifikace příslušných genů, molekulárních faktorů a signálních drah. Například v jedné studii byly vyvinuty buňky NCI-H460 rezistentní na pemetrexed, multitargetové antifolátové činidlo, za účelem studia základních molekulárních mechanismů rezistence na pemetrexed v buňkách nemalobuněčného karcinomu plic [5].

Vědecké publikace zabývající se buněčnou linií NCI-H460

Zde uvádíme několik zajímavých výzkumných publikací o buněčné linii NCI-H460 z plicního karcinomu.

Přírodní glukan z černých fazolí inhibuje proliferaci rakovinných buněk prostřednictvím signálních drah PI3K-Akt a MAPK

Tato studie publikovaná v časopise Molecules (2023) navrhuje, že přírodní α-1,6-glukan BBWPW z černých fazolí inhibuje proliferaci buněk NCI-H460 prostřednictvím regulace signální dráhy PI3K/AKT/MAPK.

Dioscin-6′-O-acetát inhibuje proliferaci buněk rakoviny plic prostřednictvím indukce zastavení buněčného cyklu a kaspázou závislé apoptózy

Tento článek v časopise Phytomedicine (2019) zkoumal, že dioscin-6′-O-acetát, nová přírodní sloučenina, vykazuje antiproliferační účinek na buňky rakoviny plic NCI-H460.

miRNA-425-5p podporuje růst rakoviny plic prostřednictvím signální osy PTEN/PI3K/AKT

Výzkum publikovaný v časopise BMC Pulmonary Medicine (2020) uvádí, že mikroRNA-425-5p podporuje tumorigenezi karcinomu plic prostřednictvím signální dráhy PTEN/PI3K/AKT.

Chinalizarin vykazuje protinádorový účinek na buňky rakoviny plic A549 prostřednictvím modulace signálních drah Akt, MAPK, STAT3 a p53

Tento článek v časopise Molecular Medicine Reports (2017) poukazuje na protinádorový potenciál a základní mechanismy působení sloučeniny quinalizarinu v buňkách NCI-H460 a dalších buňkách rakoviny plic.

Odvar z Eucalyptus globulus Labill. inhibuje růst buněk NCI-H460 zvýšením hladin p53 a změnou profilu buněčného cyklu

Tento výzkum publikovaný v časopise Food and Function (2019) zdůrazňuje potenciální protinádorový účinek extraktu z Eucalyptus globulus Labill. na buňkách NCI-H460. Výsledky ukázaly, že rostlinný extrakt vykazoval tyto účinky zvýšením exprese p53 v buňkách NCI-H460 a modulací profilu buněčného cyklu.

Zdroje informací o buněčné linii NCI-H460: protokoly, videa a další

Zde uvádíme několik online zdrojů věnovaných buňkám rakoviny plic NCI-H460.

• Transfekce buněk NCI-H460: Tento videonávod představuje podrobný průvodce transfekcí buněk NCI-H460 plazmidovou DNA.

Následující odkazy obsahují nezbytné informace o kultivaci buněk H460. 

• Buňky NCI-H460: Tato webová stránka poskytuje důležité informace o kultivačních médiích pro buňky NCI-H460, postupech subkultivace, zmrazování a rozmrazování.
• Pasážování buněk NCI-H460: Tento dokument vás provede pasážováním a subkultivací buněčné linie NCI-H460. Kromě toho vám také pomůže seznámit se s protokolem transfekce buněk NCI-H460.

Literatura

1. Hu, C., et al., NUCKS podporuje proliferaci, migraci a invazi buněk rakoviny plic prostřednictvím signální dráhy Pi3k/Akt. Clinical and Investigative Medicine, 2021. 44(2): s. E55–61.
2. Qi, X., et al., EGPI-1, nový inhibitor interakce eIF4E/eIF4G, inhibuje růst buněk rakoviny plic a angiogenezi prostřednictvím signální dráhy Ras/MNK/ERK/eIF4E. Chemico-Biological Interactions, 2022. 352: s. 109773.
3. Hu, H., a kol., Anlotinib vykazuje protinádorové účinky na buňky rakoviny plic s mutací v genu KRAS prostřednictvím potlačení signální dráhy MEK/ERK. Cancer Management and Research, 2020: s. 3579–3587.
4. Corveloni, A.C., a kol., Kyselina karnozová vykazuje antiproliferační a proapoptotické účinky v nádorových plicních buňkách NCI-H460 a nenádorových plicních buňkách IMR-90. Journal of Toxicology and Environmental Health, část A, 2020. 83(10): s. 412–421.
5. Xu, Y.-L. a kol., Vytvoření a charakterizace buněk NCI-H460/PMT rezistentních na pemetrexed. Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry (dříve Current Medicinal Chemistry-Anti-Cancer Agents), 2019. 19(6): s. 731–739.