Buňky NCI-H1299: Výzkum a klinický význam buněk NCI-H1299 z rakoviny plic
NCI-H1299 je imortalizovaná lidská buněčná linie nemalobuněčného karcinomu plic, která se široce používá ve výzkumu imunoonkologie, rakoviny a vývoje nových léků. Vědci navíc tyto buňky využívají ke zkoumání citlivosti na léčiva, základních signálních drah a molekulárních mechanismů souvisejících s rakovinou plic. Kromě toho se tyto buňky používají ke studiu virových infekcí, jako je SARS-CoV-2.
- Růstové médium
- RPM1 1640 je ideální růstové médium pro buňky NCI-H1299. Je obohaceno o 10 % fetálního bovinního séra, 4500 mg/l glukózy, 2,0 mM L-glutaminu, 1 mM pyruvátu sodného, 1500 mg/l NaHCO₃ a 10 mM HEPES. Médium by se mělo obnovovat 2 až 3krát týdně.
- Doba zdvojnásobení
- Doba zdvojnásobení počtu buněk NCI-H1299 se pohybuje v rozmezí 22–30 hodin.
- Typ růstu
- NCI-H1299 je adhezivní buněčná linie.
- Úroveň biologické bezpečnosti
- BSL-1
- K dispozici u
- Cytion — Objednat NCI-H1299
- Obecné charakteristiky a původ buněk NCI-H1299
- Informace o kultivaci
- Nákup buněčné linie NCI-H1299: Vysoce kvalitní výzkumné nástroje pro studium biologie rakoviny plic
- Výhody a nevýhody buněk NCI-H1299
- Výzkumné aplikace buněk NCI-H1299
- Výzkumné publikace zabývající se buňkami NCI-H1299
- Zdroje pro buněčnou linii NCI-H1299: protokoly, videa a další
- Často kladené otázky týkající se buněčné linie NCI-H1299
- Reference
- Často kladené otázky
Obecné charakteristiky a původ buněk NCI-H1299
První věcí, kterou je třeba o buněčné linii vědět, je její původ a obecné charakteristiky, protože vám pomohou naplánovat její využití ve vašem výzkumu. Tato část článku vám pomůže seznámit se s některými důležitými informacemi o původu a charakteristikách buněčné linie NCI-H1299. Například: Co jsou buňky rakoviny plic NCI-H1299? O jaký typ buněk se u NCI-H1299 jedná? Jaká je velikost buněk NCI-H1299? Jaký je rozdíl mezi A549 a NCI-H1299?
- Buněčná linie NCI-H1299 pochází z metastázy v lymfatické uzlině plic 43letého bělošského pacienta s rakovinou.
- Tyto buňky vykazují homozygotní částečnou deleci genu p53; proto neexprimují protein p53. Absence exprese proteinu p53 v buňkách NCI-H1299 přispívá k proliferační tendenci buněk rakoviny plic H1299.
- Kromě p53 mají tyto imortalizované buňky podle dostupných údajů také mutaci v genu KRAS, která je zodpovědná za jejich růst, proliferaci, migraci a invazivní vlastnosti.
- Karyotyp NCI-H1299 je téměř diploidní.
- Buňky NCI-H1299 mají morfologii podobnou epiteliálním buňkám.
- Tyto buňky jsou zploštělé a mají tloušťku menší než 5 µm.
NCI-H1299 a A549
NCI-H1299 a A549 jsou buněčné linie nemalobuněčného karcinomu plic. Buňky NCI-H1299 jsou agresivnější a citlivější než buňky A549. Obě mají relativně podobné mutace, jako je například KRAS. Na rozdíl od buněk NCI-H1299 však buňky A549 exprimují gen P53.
Informace o kultivaci
Udržování kultury buněčné linie není snadné, dokud neznáte všechny klíčové informace o ní, včetně: Jaká je doba zdvojnásobení NCI-H1299? Jaká je výsevní hustota NCI-H1299? Jaké je kultivační médium pro buňky NCI-H1299? Jak se kultivují buněčné linie NCI-H1299? Tato část vám pomůže najít odpovědi na všechny tyto otázky týkající se kultivace buněk NCI-H1299.
Klíčové body pro kultivaci buněk NCI-H1299
Doba zdvojnásobení:
Doba zdvojnásobení buněk NCI-H1299 se pohybuje v rozmezí 22–30 hodin.
Adherentní nebo v suspenzi:
NCI-H1299 je adhezivní buněčná linie.
Poměr subkultivace:
Buňky NCI-H1299 se subkultivují v doporučeném poměru 1:3 až 1:6. Pro naočkování se adhezivní buňky promyjí 1x PBS a inkubují s pasážovacím roztokem Accutase po dobu 8 až 10 minut při pokojové teplotě. Odloučené buňky se přidají do čerstvého kultivačního média a odstředí se. Buněčný pelet se poté resuspenduje a buňky se přelijí do nových lahví obsahujících růstové médium.
Růstové médium:
RPM1 1640 je ideální médium pro buňky NCI-H1299. Je doplněno 10 % fetálního bovinního séra, 4500 mg/l glukózy, 2,0 mM L-glutaminu, 1 mM pyruvátu sodného, 1500 mg/l NaHCO₃ a 10 mM HEPES. Média by se měla obnovovat 2 až 3krát týdně.
Podmínky kultivace:
Kultury buněk plicního karcinomu NCI-H1299 se udržují ve zvlhčeném inkubátoru při teplotě 37 °C s přívodem 5 % CO₂.
Skladování:
Buněčnou linii NCI-H1299 lze dlouhodobě skladovat v plynné fázi kapalného dusíku nebo v mrazničkách s extrémně nízkou teplotou při teplotě pod -150 °C.
Proces zmrazování a médium:
CM-1 nebo CM-ACF jsou média pro zmrazování buněk NCI-H1299. Buňky se zmrazují pomalým procesem, který umožňuje pokles teploty pouze o 1 stupeň za minutu, aby byla zachována životaschopnost buněk.
Proces rozmrazování:
Zmrazené buňky NCI-H1299 se rychle promíchávají v předehřáté vodní lázni o teplotě 37 °C po dobu 40 až 60 sekund, dokud nezůstane pouze malý kousek ledu. Rozmrazené buňky se doplní čerstvým médiem a lze je přímo kultivovat v nových baňkách nebo odstředit. V prvním případě by mělo být médium vyměněno po 24 hodinách inkubace. Odstředění pomáhá odstranit složky mrazicího média. Poté se získané buňky resuspendují v čerstvém médiu a přenesou do nové baňky pro kultivaci.
Úroveň biologické bezpečnosti:
Pro práci s buněčnou kulturou NCI-H1299 je vyžadována laboratoř úrovně biologické bezpečnosti 1.
Nákup buněčné linie NCI-H1299: vysoce kvalitní výzkumné nástroje pro studium biologie rakoviny plic
Výhody a nevýhody buněk NCI-H1299
Stejně jako jiné lidské nádorové buněčné linie má i NCI-H1299 některé charakteristické vlastnosti spojené s konkrétními výhodami a nevýhodami. Níže jsme shrnuli několik těch nejvýznamnějších.
Výhody
Mezi hlavní výhody buněčné linie NCI-H1299 pro nemalobuněčný karcinom plic patří:
-
In vitro model rakoviny plic
Buněčné linie NCI-H1299 byly vyvinuty z metastáz karcinomu plic v lymfatických uzlinách, a proto mají relativně podobné vlastnosti. Tyto buňky proto mohou sloužit jako in vitro model pro zkoumání biologie rakoviny plic, buněčných a molekulárních mechanismů a pro screening a testování potenciálních léčiv.
-
Snadná kultivace
Buňky NCI-H1299 se snadno kultivují a udržují ve výzkumné laboratoři. Nejsou kladeny žádné náročné požadavky na kultivaci buněk ani na postupy.
-
Mutace p53 a KRAS u buněk NCI-H1299
Buňky NCI-H1299 nevykazují expresi genu p53, což umožňuje buňkám intenzivní proliferaci. Navíc nesou mutaci genu KRAS, která přispívá k růstu, proliferaci, invazi a migraci buněk. Vzhledem k tomu používají výzkumníci buňky H1299 ke studiu molekulárních mechanismů souvisejících s mutacemi genů KRAS a p53.
Nevýhody
Nevýhody buněk NCI-H1299 jsou:
-
Tkáňová specificita
Buňky NCI-H1299 pocházejí z plicní tkáně. Jejich použitelnost je proto většinou omezena na výzkum karcinomu plic. Nemusí plně reprezentovat heterogenitu a obecné charakteristiky jiných typů rakoviny.
Výzkumné aplikace buněk NCI-H1299
Buněčná linie NCI-H1299 se hojně využívá ve výzkumu rakoviny plic. Zde uvádíme několik slibných aplikací této buněčné linie.
- Biologie rakoviny: Buňky NCI-H1299 slouží jako vynikající výzkumný nástroj pro zkoumání vzniku a progrese rakoviny a souvisejících buněčných a molekulárních mechanismů. Tyto buňky nesou určité mutace, což umožňuje výzkumníkům zkoumat související chování rakovinných buněk, signální dráhy a profily genové exprese. Několik studií využilo buněčnou linii NCI-H1299, pocházející z nemalobuněčného karcinomu plic, ke studiu biologie rakoviny plic. Například studie provedená v roce 2018 zkoumala signální dráhu podílející se na apoptóze buněk rakoviny plic s využitím buněk NCI-H1299. Výzkumníci zjistili, že signální dráha PI3K/AKT přispívá k buněčné proliferaci a její inhibice může způsobit smrt rakovinných buněk [1]. Podobně se další výzkum zabýval mechanismy zapojenými do epiteliálně-mezenchymální transformace (EMT) u buněk NCI-H1299. Tato studie navrhla, že extracelulární protein SPARC (sekretovaný protein kyselý a bohatý na cystein) přispívá k EMT a migraci buněk NCI-H1299, a tím podporuje tumorigenezi v buňkách – protein SPARC působí jako mediátor signální dráhy TGF-β1 [2].
- Objev a screening léčiv: NCI-H1299, lidská buněčná linie rakoviny plic, se hojně využívá k hodnocení toxicity a účinnosti potenciálních léčiv. Kromě toho ji výzkumníci používají ke zkoumání mechanismu účinku protinádorových léčiv. Tyto buňky byly rovněž využity ve studiích k identifikaci možných cílů léčiv a mechanismů rezistence. Například výzkum provedený Xiao-Yun Shenem a kolegy zkoumal protinádorový potenciál přírodní sloučeniny bruceinu D (BD). Výsledky odhalily, že BD významně brání proliferaci, invazi a migraci buněk NCI-H1299. Proto jej lze považovat za potenciální adjuvantní terapii pro léčbu nemalobuněčného karcinomu plic [3]. Podobně jedna studie hodnotila cytotoxické účinky xanthohumolu samotného i v kombinaci s chemoterapeutickým lékem cisplatinou na buňky rakoviny plic NCI-H1299 [4].
Vědecké publikace zabývající se buněčnou linií NCI-H1299
Zde jsou uvedeny některé významné a nejčastěji citované výzkumné publikace týkající se buněčné linie NCI-H1299 plicního karcinomu.
Tento článek byl publikován v časopise Human and Experimental Toxicology (2021). Studie navrhuje, že indol-3-karbinol indukuje apoptózu v buňkách H1299 prostřednictvím zvýšení hladiny reaktivních forem kyslíku (ROS).
Tento výzkum byl publikován v roce 2018 v časopise „Cellular Physiology and Biochemistry“. Výsledky výzkumu odhalily, že kombinace kyseliny kávové a paklitaxelu vykazuje synergický protinádorový účinek na buněčnou linii nemalobuněčného karcinomu plic NCI-H1299.
Tento výzkumný článek byl publikován v časopise *Molecular Medicine Reports* (2018). Studie hodnotila protinádorový účinek tubeimosidu-1, triterpenoidního saponinu, a související mechanismy v buněčné linii NCI-H1299.
Pristimerin indukuje apoptózu a inhibuje proliferaci a migraci buněk rakoviny plic H1299
Tento článek, publikovaný v časopise Journal of Cancer (2020), navrhl, že pristimerin, přírodní sloučenina, potlačuje proliferaci a migraci buněk NCI-H1299.
Mechanismus regulace buněk lidského adenokarcinomu plic H1299 genem VIPR1
Tato studie publikovaná v časopise Medical Oncology (2019) zkoumala potenciální účinky nadměrné exprese genu VIPR1 na buněčnou linii adenokarcinomu NCI-H1299.
Zdroje pro buněčnou linii NCI-H1299: protokoly, videa a další
Zde uvádíme několik online zdrojů věnovaných buňkám NCI-H1299.
- Transfekce NCI-H1299: Toto video vysvětluje postup pro přechodnou transfekci buněčných linií NCI-H1299.
- Subkultivace adhezivní buněčné linie: Toto video vám pomůže seznámit se s obecným postupem subkultivace adhezivní buněčné linie.
Následující odkaz obsahuje informace o buněčné kultuře buněk NCI-H1299.
- Buněčná linie NCI-H1299: Tento odkaz vám pomůže seznámit se s protokolem pasážování a transfekce buněk NCI-H1299.
Často kladené otázky o buněčné linii NCI-H1299
Literatura
- Gu, J. a kol., Studie apoptózy vyvolané EGCG v buňkách rakoviny plic prostřednictvím inhibice signální dráhy PI3K/Akt. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): s. 4557–4563.
- Sun, W., et al., SPARC působí jako mediátor TGF-β1 při podpoře epiteliálně-mezenchymální transformace v buňkách rakoviny plic A549 a H1299. Biofactors, 2018. 44(5): s. 453–464.
- Shen, X.-Y. a kol., Studie mechanismu působení bruceinu D při léčbě buněk H1299 u nemalobuněčného karcinomu plic. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): s. 500.
- Long, B., a kol., Cytotoxické účinky xanthohumolu a jeho kombinace s cisplatinou na buňky lidského metastatického karcinomu plic H1299. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): s. 1–15.