Buněčná linie BeWo
BeWo je buněčná linie odvozená z lidského choriokarcinomu, která se široce používá v biomedicínském výzkumu. Slouží jako cenný in vitro model pro zkoumání složitého procesu vývoje placenty a syncytiální diferenciace lidských trofoblastů. Vědci také využívají tyto buňky ke studiu chování trofoblastových buněk, produkce hormonů a transportu látek přes placentu. Kromě toho mají buňky BeWo také uplatnění ve studiích toxikologie, infekcí a přenosu nemocí.
Tento článek obsahuje základní informace o buňkách BeWo, které vám mohou pomoci při práci s nimi ve vašem výzkumu. Obsahuje:
- Obecné charakteristiky a původ buněk BeWo
- Buněčná linie BeWo: Informace o kultivaci
- Výhody a nevýhody buněčné linie BeWo
- Výzkumné aplikace buněk BeWo
- Výzkumné publikace zabývající se buňkami BeWo
- Zdroje pro buněčnou linii BeWo: protokoly, videa a další
Obecné charakteristiky a původ buněk BeWo
Znalost původu a obecných charakteristik buněčné linie je pro její použití ve vašem výzkumu zásadní. Tato část článku se zabývá původem buněčné linie BeWo, jejími charakteristickými rysy a mnohem více. Dozvíte se zde: Co je buněčná linie BeWo choriokarcinomu? Co je to syncytiální diferenciace BeWo? Odkud pocházejí buňky BeWo? Jaká je morfologie buněk BeWo? Jaká je ploidie BeWo?
- Placentární buněčná linie BeWo vznikla v roce 1968 z maligního gestačního choriokarcinomu placenty mužského plodu [1]. Slouží tedy jako neocenitelný model pro výzkum placenty.
- Buňky BeWo vykazují epiteliální morfologii.
- Buňky BeWo jsou relativně malé, jejich velikost se pohybuje mezi 20 a 30 µm [2].
- Buňky BeWo vykazují stabilní karyotyp. Jejich počet chromozomů je hypotetraploidní. Modální počet chromozomů buněk BeWo je 86. Může se pohybovat v rozmezí od 71 do 178.
- Buňky BeWo produkují několik hormonů, tj. lidský choriový somatomamotropin, lidský choriový gonadotropin (hCG) a steroidní hormony.
- Buňky BeWo exprimují molekulární markery, včetně CK 7, E-kadherinu a VE-kadherinu.
Sublinie B30
B30 je sublinie buněk BeWo. Používá se k výzkumu příjmu a transportu živin. To je dáno jejich bujným růstem na porézních membránách.
BeWo a JEG-3
Buněčné linie BeWo a JEG-3 jsou odvozeny z choriokarcinomů a používají se ve výzkumu placenty. Buňky BeWo produkují hormony v nižších hladinách než JEG-3, například lidský choriový gonadotropin (hCG) a estradiol.
Buněčná linie BeWo: Informace o kultivaci
Udržování buněčné kultury může být složité, pokud neznáte klíčové podrobnosti. Například: Jaká je doba zdvojnásobení buněk BeWo? Jaké je kultivační médium pro buňky BeWo? Jak se kultivuje buněčná linie BeWo? A jak se buňky BeWo zmrazují?
Klíčové body pro kultivaci buněk BeWo
Doba zdvojnásobení:
Doba zdvojnásobení populace buněk BeWo je přibližně 30 hodin.
Adherentní nebo v suspenzi:
BeWo je adhezivní buněčná linie.
Hustota výsevu buněk:
Doporučená hustota výsevu pro buňky BeWo je 1 × 10⁴ buněk/cm². Před výsevem se z buněk odstraní staré médium a buňky se propláchnou 1× PBS. Poté se přidá Accutase (roztok pro pasážování) a buňky se inkubují po dobu 8 až 10 minut při pokojové teplotě. Následně se odloučené buňky smíchají s kultivačním médiem a odstředí. Získané buňky se poté resuspendují a přelijí do nové baňky.
Růstové médium:
K kultivaci buněk BeWo se používá médium Ham's F12K obsahující 10 % FBS, 2,0 mM L-glutaminu, 2,0 mM pyruvátu sodného a 2,5 g/l NaHCO₃. Kultivační médium pro buňky BeWo by se mělo vyměňovat 2 až 3krát týdně.
Podmínky kultivace:
Buňky BeWo se udržují ve zvlhčeném inkubátoru nastaveném na teplotu 37 stupňů Celsia a s přívodem 5 % CO₂.
Skladování:
Zmrazené buňky BeWo se skladují při teplotě pod -150 °C v elektrickém mrazáku s ultranízkou teplotou nebo v plynné fázi kapalného dusíku.
Proces zmrazování a médium:
Pro zmrazení buněk BeWo se doporučuje použít zmrazovací médium CM-1 nebo CM-ACF. Buňky se zmrazují metodou pomalého zmrazování. Tato metoda umožňuje pokles teploty pouze o 1 stupeň za minutu, čímž se zabrání šoku buněk a zachová se jejich životaschopnost.
Proces rozmrazování:
Zmrazené buňky se rozmrazují ponořením do předem připravené vodní lázně o teplotě 37 °C na 40 až 60 sekund, dokud nezůstane pouze malá hrudka ledu. Poté se přidá čerstvé růstové médium a buňky se odstředí, aby se odstranily složky zmrazovacího média. Získaný buněčný pelet se resuspenduje a přenese do kultivační baňky pro růst.
Úroveň biologické bezpečnosti:
Pro manipulaci a udržování buněčných kultur BeWo je nutná laboratoř s úrovní biologické bezpečnosti 1.
Vydáno: 2023 | Poslední revize: květen 2026
Výhody a nevýhody buněčné linie BeWo
Buňky BeWo vykazují jedinečné vlastnosti a mají specifické výhody i nevýhody. V této části se podíváme na některé z těch nejvýznamnějších.
Výhody
Hlavní výhody buněčné linie BeWo z choriokarcinomu jsou:
-
In vitro model placentárních buněk
Buňky BeWo poskytují in vitro model pro studium chování trofoblastových buněk a syncytiální diferenciace placenty, čímž replikují procesy, které je obtížné pozorovat in vivo.
-
Produkce hormonů
Buňky BeWo vylučují hormony, jako je hCG a placentární laktogen, což je činí cennými pro studie hormonální regulace a výzkum v oblasti reprodukční biologie.
Nevýhody
Nevýhody trofoblastových buněk BeWo jsou:
-
Rakovinná buněčná linie
Buňky BeWo byly odvozeny z choriokarcinomu, což je placentární nádor. Tento původ nemusí plně reprezentovat normální funkci placentárních buněk.
Výzkumné aplikace buněk BeWo
Buněčná linie BeWo je široce využívána ve výzkumu placenty. Zde uvádíme několik konkrétních aplikací této buněčné linie:
- Výzkum placenty a těhotenství: Buňky BeWo hrají klíčovou roli ve výzkumu placenty a těhotenství. Vědci tyto buňky využívají například ke studiu transportu látek, včetně léků, živin a toxinů, přes placentární bariéru. Kromě toho také zkoumají produkci a regulaci hormonů, včetně lidského choriogonadotropinu (hCG), placentárního laktogenu a steroidních hormonů. To je důležité pro pochopení hormonálních změn během těhotenství. Výzkum provedený v roce 2018 zkoumal vliv bromovaných retardérů hoření (BFR) na aktivitu sulfotransferázy v lidské trofoblastické buněčné linii (BeWo). Tento enzym se podílí na regulaci intracelulárních hladin hormonu štítné žlázy [3].
- Výzkum infekcí a nemocí: Buňky BeWo se také používají ke zkoumání interakce mezi patogeny a placentárními buňkami. Tento výzkum je cenný pro pochopení nemocí, které se mohou přenášet z matky na plod, a pro vývoj strategií na ochranu zdraví plodu. Kromě toho tato buněčná linie pomáhá výzkumníkům zkoumat komplikace, které vznikají během těhotenství, jako je preeklampsie. Například studie provedená Michalinou Bralewskou v roce 2023 využila model trofoblastových buněk BeWo a zjistila, že jak chromogranin A (CgA), tak i z něj odvozený peptid, katestatin (CST), mohou hrát roli ve složitém procesu patogeneze preeklampsie (PE) [4]. Další studie se zabývala protinádorovým potenciálem trichosanthinu s využitím buněčné linie choriokarcinomu BeWo. Výzkum se také zaměřil na objev biomarkerů provedením srovnávací proteomické analýzy před a po experimentu [5].
5. Vědecké publikace zabývající se buňkami BeWo
Zde uvádíme několik významných výzkumných publikací zabývajících se trofoblastovými buňkami BeWo.
Tato studie publikovaná v časopise Frontiers in Bioscience-Landmark (2022) navrhuje, že AMPK signální dráha aktivuje mitofágii v trofoblastových buňkách BeWo prostřednictvím mitofágních drah zprostředkovaných FUNDC1 a PRKN. Výsledkem je, že mitofágie pomáhá udržovat produkci ATP a mitochondriální membránový potenciál.
Tento článek byl publikován v časopise Animal Cells and Systems (2020). Studie navrhla, že ethylparaben zprostředkovává apoptózu buněk BeWo prostřednictvím regulace dráhy kaspázy 3.
Tato studie v časopise Drug Metabolism and Disposition (2023) využila placentární buněčné linie, včetně BeWo, JAR, JEG-3 a HTR-8/SVneo, k výzkumu ukládání xenobiotik a steroidů v buňkách.
Tento výzkumný článek v časopise International Journal of Molecular Medicine (2020) navrhl, že apelin, ligand receptoru APJ, podporuje proliferaci buněk BeWo prostřednictvím signálních drah APJ a ERK1/2, stat3 a AMPK. Mohl by tedy být esenciálním adipokinem regulujícím vývoj placenty.
Antiepileptika a fetální živiny: účinky na transportéry cholinu v lidské placentární buněčné linii
Tato studie v časopise Epilepsia (2021) zkoumala účinky fetálních živin a antiepileptik na transportéry cholinu v lidské trofoblastové buněčné linii BeWo.
Zdroje pro buněčnou linii BeWo: protokoly, videa a další
Zde je několik online zdrojů týkajících se buněk BeWo:
- Transfekce in vitro: Toto video vám pomůže seznámit se s protokolem transfekce plazmidové DNA in vitro pro adhezivní buňky.
Následující odkaz obsahuje informace o buněčné kultuře pro buňky BeWo:
- Buňky BeWo: Tato webová stránka obsahuje základní informace o kultivaci buněk buněčné linie BeWo. Zahrnuje informace týkající se buněčných médií a podmínek kultivace. Obsahuje také protokoly pro subkultivaci a manipulaci s kryokonzervovanými a proliferativními kulturami.
Reference
- Weber, M., et al., Cytogenomika šesti lidských trofoblastových buněčných linií. Placenta, 2021. 103: s. 72-75.
- Kolokol'tsova, T., et al., Charakteristika trofoblastů v dlouhodobé kultuře. Bulletin of Experimental Biology and Medicine, 2017. 164: s. 259–265.
- Leonetti, C.P., C.M. Butt a H.M. Stapleton, Narušení aktivity sulfotransferázy štítné žlázy bromovanými chemickými látkami zpomalujícími hoření v lidské buněčné linii choriokarcinomu placenty, BeWo. Chemosphere, 2018. 197: s. 81–88.
- Bralewska, M., T. Pietrucha a A. Sakowicz, Snížení hladiny proteinu CST odvozeného od CgA v trofoblastických buněčných liniích HTR-8/SVneo a BeWo způsobené preeklampickým prostředím. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(8): s. 7124.
- Hu, Y. a kol., Srovnávací proteomická analýza přidání léčiva trichosanthinu do buněčné linie BeWo. Molecules, 2022. 27(5): s. 1603.