خلايا BV2 - شرح أبحاث الجهاز العصبي المركزي باستخدام خلايا الخلايا الدبقية الدبقية الصغيرة BV2
BV2 هو خط خلايا الخلايا الدبقية الدبقية الصغيرة المشتقة من الفأر والمستخدمة على نطاق واسع في أبحاث علم الأعصاب. يمكن استخدام هذا الخط الخلوي الخالد كنموذج في المختبر لدراسة الأمراض العصبية التنكسية العصبية والحالات والعمليات الخلوية المرتبطة بها، أي الالتهاب العصبي. إلى جانب ذلك، تُعتبر خلايا BV2 نظاماً نموذجياً بديلاً للخلايا الدبقية الصغيرة الأولية.
ستناقش هذه المقالة الأصل، ومعلومات زراعة الخلايا، والتطبيقات البحثية لخط خلايا الخلايا الدبقية الدبقية الصغيرة للفأر، BV2. وعلى وجه الخصوص، سنستعرض ما يلي:
- المنشأ والخصائص العامة لخلايا BV2
- خط خلايا BV2 معلومات الزراعة
- مزايا وقيود خلايا BV2
- تطبيقات خط الخلايا BV2 في الأبحاث
- خلايا BV2: المنشورات البحثية
- موارد خط الخلايا BV2: البروتوكولات ومقاطع الفيديو والمزيد
1. المنشأ والخصائص العامة لخلايا BV2
يشرح هذا القسم من المقال منشأ خط الخلايا BV2 والخصائص العامة التي تميزه عن خطوط الخلايا الدبقية الصغيرة الأخرى. هنا، سوف تدرس ما هي خلايا BV2؟ من أين تأتي خلايا BV2؟ ما هو حجم خلية BV2؟
- تم الحصول على سلالة الخلايا الدبقية الدبقية المجهرية BV2 من الخلايا الدبقية المجهرية لحديثي الولادة (حديثي الولادة) C57/BL6 تم تخليد خط الخلايا عن طريق إصابة الخلايا بالفيروس القهقري J2 الذي يحمل الجين الورمي v-raf/v-myc [1].
- تمتلك خلايا BV2 غير المحفزة مورفولوجيا متضخمة تشبه الأميبا. ويُظهر هذا المورفولوجيا حالة نشطة والتهابية للغاية لخلايا BV2 مقارنةً بالخلايا الدبقية الصغيرة الأولية [2].
- يتراوح القطر المُبلغ عنه لخط الخلايا BV2 بين 10 إلى 15 ميكرومتر.
BV2 مقابل خط خلايا BV2 مقابل خط خلايا ECO 2
كلاهما من خطوط الخلايا الدبقية الدبقية الصغيرة للفأر ولكنهما مختلفان عن بعضهما البعض. والفرق الرئيسي بينهما هو أن BV2 تم تخليدها عن طريق التلاعب الجيني، في حين أن ECO 2 تم تخليدها تلقائيًا. وعلاوة على ذلك، تمتلك ECO 2 نفس الخصائص العامة التي يمتلكها BV2 ولكنها تتطلب مكملات العامل المحفز للمستعمرة -1 (CSF-1) لزراعتها.
2.خط الخلايا BV2: معلومات الاستزراع
قبل التعامل مع مزرعة خط الخلية وصيانتها، تعتبر معلومات زراعة الخلايا أمرًا بالغ الأهمية. سيساعدك قسم هذه المقالة على معرفة جميع النقاط الرئيسية لزراعة خطوط خلايا BV2. على وجه الخصوص، سنتحدث عن ما يلي: ما هو وقت مضاعفة BV2؟ ما هي الوسائط المستخدمة لزراعة خلايا BV2؟ هل خط الخلايا BV2 ملتصق أم معلق؟ كيف يتم إذابة خلايا BV2؟
النقاط الرئيسية لزراعة خلايا BV2
|
وقت المضاعفة: |
تنمو خلايا الخلايا الدبقية الدبقية الصغيرة BV2 بسرعة كبيرة، حيث يبلغ متوسط وقت مضاعفة BV2 34.5 ساعة. |
|
ملتصقة أو معلقة: |
BV2 هو خط خلايا ملتصقة. |
|
نسبة الانقسام: |
يتم زراعة خط الخلايا الدبقية الدبقية الصغيرة الملتصقة هذا بنسبة انقسام من 1:2 إلى 1:4. يتم غسل الخلايا بمحلول PBS وتحضينها بمحلول أكوتاز (محلول التفكك). بعد 10 دقائق، يتم طردها مركزيًا وحصادها. ثم تضاف هذه الخلايا إلى قوارير وسائط نمو جديدة وفقًا لنسبة التقسيم الموصى بها. |
|
وسط النمو: |
يُستخدم وسط RPMI 1640 لزراعة خط خلايا BV2. يُستكمل وسط BV2 RPMI ب 10% FBS، و2.0 مللي مولار جلوتامين مستقر، و2.0 جم/لتر NaHCO3 لنمو مثالي للخلايا. يتم تجديد الوسائط من 2 إلى 3 مرات في الأسبوع. |
|
ظروف النمو: |
يتم الاحتفاظ بمزارع BV2 في حاضنة مرطبة بدرجة حرارة 37 درجة مئوية مع توصيل مستمر لثاني أكسيد الكربون بنسبة 5%. |
|
التخزين: |
تُحفظ قوارير خلايا BV2 المجمدة تحت درجة حرارة أقل من -150 درجة مئوية إما في مرحلة بخار النيتروجين السائل أو في مجمد كهربائي. |
|
عملية التجميد والوسط: |
يوصى باستخدام وسائط التجميد CM-1 أو CM-ACF لخطوط خلايا BV2. يتم تجميد الخلايا باستخدام عملية تجميد بطيئة تسمح بانخفاض درجة الحرارة بمقدار 1 درجة مئوية فقط في الدقيقة للحفاظ على حيوية الخلية. |
|
عملية الذوبان: |
يتم تقليب قارورة خلايا BV2 المجمدة بسرعة في حمام مائي (37 درجة مئوية) لمدة 40 إلى 60 ثانية حتى يتبقى كتلة ثلج صغيرة. تُضاف الخلايا المذابة مع وسائط نمو جديدة ويتم طردها مركزيًا للتخلص من مكونات وسائط التجميد. يتم إعادة تعليق الخلايا المجمعة مرة أخرى وسكبها في دورق مستنبت للنمو. |
|
مستوى السلامة البيولوجية: |
يوصى بمستوى السلامة البيولوجية 1 لزراعة خط خلايا BV2. |
3.مزايا وقيود خلايا BV2
مثل خطوط الخلايا الأخرى، ترتبط خلايا BV2 أيضًا ببعض المزايا والقيود. بعض هذه المزايا مذكورة هنا.
المزايا
تتضمن مزايا خط خلايا BV2 ما يلي:
|
ميزات أولية شبيهة بالميكروغليا |
تمتلك خلايا BV2 بعض الخصائص الشبيهة بالخلايا الدبقية المجهرية الأولية وتستخدم كنموذج بديل لدراسة وظائف الخلايا الدبقية المجهرية واستجاباتها. وهي تعبر عن F4/80 وCD11b وIba1، وهي مؤشرات حيوية أساسية للخلايا الدبقية الدبقية الصغيرة الأولية. |
|
الخلود |
تكون خلايا BV2 غير خالدة مما يمكنها من النمو المستمر. هذه الخاصية تجعلها مثالية لتجارب زراعة الخلايا على المدى الطويل. |
القيود
القيود المرتبطة بخلايا BV2 هي:
|
خط خلايا من أصل الفئران |
خط خلايا BV2 مشتق من الخلايا الدبقية الدبقية الصغيرة للفأر. قد تكون نتائج الأبحاث باستخدام خلايا BV2 محدودة التطبيق على الأمراض والأبحاث الخاصة بالإنسان. |
|
النموذج المختبري |
تُستخدم خلايا BV2 كنموذج في المختبر لدراسة وظائف الخلايا الدبقية المجهرية. ومع ذلك، من المهم ملاحظة أنها قد لا تكرر بشكل كامل خصائص وتعقيدات الخلايا الدبقية الدبقية الصغيرة في الدماغ في الجسم الحي. |
4.تطبيقات خط الخلايا BV2 في الأبحاث
يقدم خط خلايا BV2 العديد من التطبيقات في أبحاث علم الأعصاب. يتم ذكر بعض الاستخدامات البحثية الشائعة لخلايا BV2 في هذا القسم.
أبحاث الأمراض العصبية التنكسية العصبية: يُعد خط الخلايا الدبقية العصبية الدقيقة للفئران BV2 أداة بحثية قيّمة لدراسة الأمراض العصبية التنكسية مثل مرض باركنسون ومرض الزهايمر والتصلب المتعدد. وقد درس الباحثون السمية العصبية وأمراض الأمراض وقيموا العوامل العلاجية باستخدام خطوط خلايا BV2. على سبيل المثال، قيّمت دراسة أُجريت في عام 2020 التأثير المضاد للالتهابات والوقاية العصبية لمركب هيدروكسيستيلبين الطبيعي، رابونتيتشين، الموجود في نبات ريوم رابونتيكوم، باستخدام خلايا BV2 المنشطة بالسكريات الشحمية كنموذج لمرض باركنسون. يخفف المركب من تنشيط خلايا BV2 بوساطة عديد السكاريد الشحمي (LPS) عن طريق تثبيط سينثاز أكسيد النيتريك وتقليل أنواع الأكسجين التفاعلية والوسائط المؤيدة للالتهابات. بإيجاز، يمارس الرابونيتيسين تأثيرات مضادة للالتهابات ومضادة للوقاية العصبية على نموذج الخلايا الدبقية الصغيرة (BV2) الناجم عن عديد السكاريد LPS [3]. وبالمثل، بحثت دراسة أخرى في مشاركة مسارات الإشارات في الالتهاب العصبي. طوّر الباحثون نموذجًا للالتهاب من خلال تنشيط BV2 بوساطة عديد السكاريد الشحمي. وقد وجدوا أن محور الإشارات AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κBalling متورط في الالتهاب العصبي. إلى جانب ذلك، قاموا أيضًا بتقييم مركب بيتا-نافثوفلافون (BNF)، وهو مركب فلافونويد طبيعي، لتأثيراته المضادة للالتهابات والوقاية العصبية باستخدام هذا النموذج. وقد مارس المركب هذه التأثيرات العلاجية عن طريق تثبيط تنشيط BV2 [4]. وبالمثل، استخدم البحث خلايا BV2 ودرس التأثير التحسيني لعقار الزونيساميد على الخلل الوظيفي للميتوكوندريا في الخلايا الدبقية الدقيقة. تدعم نتائج هذه الدراسة استخدام الزونيساميد سريريًا لعلاج مرض باركنسون [5].
5.خلايا BV2 المنشورات البحثية
فيما يلي بعض الدراسات البحثية المثيرة للاهتمام والأكثر استشهاداً بها والتي تضم خلايا BV2.
نُشر هذا البحث في مجلة مرض الزهايمر (2015). اقترحت الدراسة أن جزيء DAMP (النمط الجزيئي المرتبط بالضرر) المشتق من تلف الميتوكوندريا (النمط الجزيئي المرتبط بالضرر) يمكن أن يسبب تغيرات التهابية في الخلايا الدبقية العصبية الدقيقة (BV2). وبالتالي، قد تساهم أيضًا في الالتهاب العصبي لمرض الزهايمر.
استخدم هذا المقال الذي نُشر في مجلة FARMACIA (2021) خلايا BV2 وحدد التأثير العلاجي لمغلي هوانغليان جيدو (HLJDD) على مرض الزهايمر. ووجدت الدراسة أن HLJDD يعزز البلعمة الأميلويد بيتا BV2 عن طريق زيادة تعبير بروتين Trm2 كما تم التحقق من صحته من خلال تحليل اللطخة الغربية BV2.
ينشط ألفا سينوكليين ألفا سينوكليين الخلايا الدبقية الصغيرة BV2 اعتمادًا على حالة تجميعه
اقترحت هذه المقالة البحثية المنشورة في مجلة Biochemical and Biophysical Research Communications (2016) أن بروتين ألفا سينوكليين، وهو بروتين قابل للذوبان في الجهاز العصبي المركزي للبالغين، يمكن أن ينشط خلايا BV2 اعتمادًا على حالة تجمعها.
نُشر هذا البحث في مجلة Neuroscience Letters عام 2013. تنص هذه الدراسة على أن الجسيمات الخارجية التي تفرزها خلايا BVV2 الدقيقة المنشطة بواسطة ألفا سينوكليين، يمكن أن تكون وسيطًا أساسيًا للضمور العصبي في مرض باركنسون.
نُشرت هذه الدراسة في مجلة Frontiers Cellular Neuroscience (2019). وقد اقترحت الدراسة أن إيديبينون، وهو أحد مضادات الأكسدة، يعدل الاستقطاب في الخلايا الدبقية الدبقية الصغيرة ويقلل من الالتهاب في خلايا BV2 المحفزة بعديد السكاريد الشحمي ونموذج الفئران التي يسببها مرض باركنسون (MPTP) التي يسببها مرض باركنسون.
6.مصادر خط خلايا BV2: البروتوكولات ومقاطع الفيديو والمزيد
الموارد المتاحة على الإنترنت حول BV2 محدودة. فيما يلي بعض منها.
- الزراعة الفرعية لخط خلايا BV2: يتكون رابط الموقع الإلكتروني هذا من بروتوكول موجز للزراعة الفرعية لخط خلايا BV2.
- إذابة الخلايا المجمدة: يساعدك هذا الفيديو على تعلم البروتوكول الأساسي لإذابة الخلايا المجمدة وزراعتها.
بروتوكول زراعة الخلايا لخلايا BV2 مذكور هنا.
- زراعة خلايا BV2: يحتوي رابط هذا الموقع الإلكتروني على بروتوكول زراعة خلايا BV2. بالإضافة إلى ذلك، يوفر أيضًا وسائط زراعة الخلايا وتركيبات وسائط التجميد لخط خلايا BV2.
المراجع
- Wang, Y. Y., Y. Peng, and H. Yan, Commentary: نماذج زراعة الخلايا العصبية الالتهابية في المختبر والتطبيقات المحتملة للاضطرابات العصبية. Front Pharmacol, 2021. 12: p. 792614.
- Sarkar, S., et al.، التوصيف والتحليل المقارن لنموذج جديد للخلايا الدبقية العصبية الدقيقة للفأر لدراسة آليات الالتهاب العصبي أثناء الإهانات السمية العصبية. علم السموم العصبية، 2018. 67: p. 129-140.
- Zhao, F., et al., التأثير الوقائي العصبي للرابونتينسين ضد مرض باركنسون: رؤى من نموذج BV-2 في المختبر ونموذج الفئران التي يسببها MPTP في الجسم الحي. مجلة الكيمياء الحيوية والسموم الجزيئية، 2021. 35(1): p. e22631.
- Gao, X., وآخرون، بيتا-نافثوفلافون يثبط الالتهاب الناجم عن LPS في خلايا BV-2 عبر محور إشارات AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κB. علم المناعة، 2020. 225(4): p. 151965.
- Tada, S., et al., Zonisamide Ameliorates Mitochondriopathy Microglial Mitochondriopathy في نماذج مرض باركنسون. علوم الدماغ، 2022. 12(2): p. 268.