تقنيات تفكك مزرعة الخلية

يعتبر تفكك مزرعة الخلية خطوة حاسمة في صيانة مزرعة الخلية. وتتضمن فصل الخلايا عن سطح نموها لتمكين الزراعة الفرعية أو الحصاد. يوضح هذا القسم طريقتين رئيسيتين: استخدام مخازن تفكك الخلية الخالية من الإنزيمات واستخدام الكواشف الأنزيمية.

1.استخدام مخازن تفريق الخلايا الخالية من الإنزيمات

هذه الطريقة لطيفة وتحافظ على سلامة الخلايا دون استخدام الإنزيمات:

1. التحضير
   • التأكد من تدفئة جميع الكواشف إلى 37 درجة مئوية قبل الاستخدام لتجنب حدوث صدمة للخلايا.
2. إزالة وسط النمو
   • تخلص من وسط النمو القديم من وعاء الاستزراع.
3. الشطف
   • اشطف الطبقات الأحادية الخلوية باستخدام 5 مل من PBS الخالي من الكالسيوم والمغنيسيوم لكل دورق T75 أو طبق 100 مم.
   • هز الوعاء برفق لمدة 30 إلى 60 ثانية في درجة حرارة الغرفة.
   • اشفط محلول الشطف وتخلص منه.
   • كرر خطوة الشطف هذه مرة أخرى.
4. التفكك
   • أضف حوالي 5 مل من مخزن تفكك الخلايا العازل الخالي من الإنزيمات إلى الوعاء.
   • قم بالتأرجح برفق في درجة حرارة الغرفة لمدة دقيقة إلى دقيقتين وتحقق من التفكك تحت المجهر.
   • اضغط على الدورق أو الطبق باليد لإزاحة الخلايا إذا لزم الأمر.
   • إذا كانت الخلايا ملتصقة، اتركها في درجة حرارة الغرفة لمدة دقيقتين إلى 5 دقائق إضافية، ثم اضغط مرة أخرى إذا لزم الأمر، باستخدام المزيد من المخزن المؤقت للتفكك.
   • بمجرد أن تنفصل الخلايا، أضف 5 مل على الأقل من وسط النمو الكامل لمعادلة المخزن المؤقت للانفصال وإعادة ترسيب الخلايا.
5. فحص الصلاحية
   • مراقبة صلاحية الخلايا خلال عملية الاستزراع الفرعي، والتأكد من بقائها أعلى من 90%.

2.استخدام كواشف أخرى للتفكك

تسمح هذه الطريقة باستخدام كواشف تفكك مختلفة:

1. إزالة الوسط المستخدم
   • التخلص من الوسائط القديمة من وعاء المزرعة.
2. غسل الخلايا
   • اغسل الخلايا بمحلول ملح متوازن خالٍ من الكالسيوم والمغنيسيوم، أو استخدم EDTA.
   • أضف محلول الغسيل برفق إلى الجانب المقابل للخلايا وهز الوعاء لمدة دقيقة إلى دقيقتين قبل التخلص من الغسيل.
3. التفكك
   • ضع من 2 إلى 3 مل من محلول التفكك المختار لكل 25 سم مربع من سطح النمو، مع ضمان تغطية صفيحة الخلية.
   • احتضان الوعاء عند درجة حرارة 37 درجة مئوية مع التأرجح برفق. يحدث التفكك عادةً في غضون 5 إلى 15 دقيقة، اعتماداً على خط الخلية.
   • بالنسبة للخلايا العنيدة، يمكن أن يؤدي النقر على الوعاء إلى تسريع العملية.
   • راقب الخلايا بعناية لمنع التعرض المفرط والتلف المحتمل.
4. حصاد الخلايا
   • بمجرد أن تنفصل الخلايا بالكامل، اسمح لها بالتجمع في قاع الوعاء عن طريق وضعه في وضع مستقيم.
   • أضف الوسائط الكاملة، ثم قم بتفريق الخلايا وجمعها عن طريق الماص فوق طبقة الخلية.
   • عد الخلايا والمضي قدماً في الزراعة الفرعية.

في كلتا الطريقتين، من المهم تحديد الظروف المثلى لكل خط خلوي من خلال الملاحظة التجريبية. يجب أن تحافظ العملية على صلاحية الخلية، والتي يجب أن يتم فحصها بشكل روتيني لتتجاوز 90% أثناء الزراعة الفرعية. وتوفر هذه الإجراءات أساسًا للباحثين لتكييفها بناءً على المتطلبات والخصائص المحددة لخطوط الخلايا الخاصة بهم.

3.نظرة عامة على تقنيات الاستزراع الفرعي للخلايا الملتصقة

تتطلب الاستزراع الفرعي الفعال للخلايا الملتصقة فصلها عن وعاء الاستزراع. يتم استخدام طرق مختلفة، كل منها مناسب لأنواع وظروف مختلفة من الخلايا. عند اختيار طريقة الفصل، من الضروري مراعاة الاحتياجات المحددة لخط الخلية وأهداف التجربة. تُعد المراقبة المنتظمة لحيوية الخلية، بهدف الوصول إلى أكثر من 90% في وقت الاستزراع الفرعي، أمرًا ضروريًا لاستمرار صحة وإنتاجية المزرعة. فيما يلي نظرة عامة على هذه الإجراءات: