تاريخ النشر: 2023 | آخر مراجعة: مايو 2026

تقنيات تفكيك الخلايا المزروعة

يعد تفكيك الخلايا خطوة حاسمة في صيانة مزرعة الخلايا. ويتضمن ذلك فصل الخلايا عن سطح نموها لتمكين إعادة زراعتها أو حصادها. يوضح هذا القسم طريقتين رئيسيتين: استخدام محاليل تفكيك خالية من الإنزيمات واستخدام الكواشف الإنزيمية.

استخدام محاليل تفكيك الخلايا الخالية من الإنزيمات

هذه الطريقة لطيفة وتحافظ على سلامة الخلايا دون استخدام الإنزيمات:

1. التحضير
   • تأكد من تسخين جميع الكواشف إلى 37 درجة مئوية قبل الاستخدام لتجنب صدمة الخلايا.
2. إزالة وسط النمو:
   • تخلص من وسط النمو القديم من وعاء الاستزراع.
3. الشطف
   • اشطف الطبقات الأحادية للخلايا بـ 5 مل من محلول PBS الخالي من الكالسيوم والمغنيسيوم لكل قارورة T75 أو طبق 100 مم.
   • هز الوعاء برفق لمدة 30 إلى 60 ثانية في درجة حرارة الغرفة.
   • قم بشفط محلول الشطف وتخلص منه.
   • كرر خطوة الشطف هذه مرة أخرى.
4. التفكك
   • أضف حوالي 5 مل من محلول تفكيك الخلايا الخالي من الإنزيمات إلى الوعاء.
   • قم بهز الوعاء برفق في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 إلى 2 دقيقة وتحقق من التفكك تحت المجهر.
   • اضغط على القارورة أو الطبق بيدك لإزاحة الخلايا إذا لزم الأمر.
   • إذا كانت الخلايا ملتصقة، اتركها في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 إلى 5 دقائق إضافية، وانقر عليها مرة أخرى إذا لزم الأمر، باستخدام المزيد من محلول التفكك.
   • بمجرد انفصال الخلايا، أضف ما لا يقل عن 5 مل من وسط النمو الكامل لتحييد محلول الفصل وإعادة تعليق الخلايا.
5. فحص قابلية البقاء
   • راقب قابلية الخلايا للحياة أثناء إعادة الاستنبات، وتأكد من أنها تظل أعلى من 90%.

استخدام كواشف أخرى للفصل

تسمح هذه الطريقة باستخدام كواشف تفكيك متنوعة:

1. إزالة الوسط المستخدم
   • تخلص من الوسط القديم من وعاء الاستزراع.
2. غسل الخلايا
   • اغسل الخلايا بمحلول ملحي متوازن خالٍ من الكالسيوم والمغنيسيوم، أو استخدم EDTA.
   • أضف محلول الغسل برفق إلى الجانب المقابل للخلايا وقم بهز الوعاء لمدة 1 إلى 2 دقيقة قبل التخلص من محلول الغسل.
3. الفصل
   • ضع 2 إلى 3 مل من محلول التفكك المختار لكل 25 سم² من سطح النمو، مع التأكد من تغطية طبقة الخلايا.
   • قم بتحضين الوعاء عند 37 درجة مئوية وقم بهزه برفق. يحدث التفكك عادةً في غضون 5 إلى 15 دقيقة، اعتمادًا على خط الخلايا.
   • بالنسبة للخلايا العنيدة، يمكن أن يؤدي النقر على الوعاء إلى تسريع العملية.
   • راقب الخلايا بعناية لمنع التعرض المفرط والتلف المحتمل.
4. حصاد الخلايا
   • بمجرد انفصال الخلايا تمامًا، اتركها تتجمع في قاع الوعاء بوضعه في وضع مستقيم.
   • أضف الوسط الكامل، ثم قم بتشتيت الخلايا وجمعها عن طريق سحبها بالماصة فوق طبقة الخلايا.
   • قم بالعد والمضي قدماً في إعادة الاستزراع.

في كلتا الطريقتين، من المهم تحديد الظروف المثلى لكل خط خلوي من خلال الملاحظة التجريبية. يجب أن تحافظ العملية على حيوية الخلايا، والتي يجب فحصها بشكل روتيني للتأكد من أنها تتجاوز 90٪ أثناء إعادة الاستنبات. توفر هذه الإجراءات أساسًا للباحثين للتكيف بناءً على المتطلبات والخصائص المحددة لخطوطهم الخلوية.

نظرة عامة على تقنيات إعادة زراعة الخلايا الملتصقة

يتطلب الاستزراع الفرعي الفعال للخلايا الملتصقة فصلها عن وعاء الاستزراع. يتم استخدام طرق مختلفة، كل منها مناسب لأنواع وظروف خلوية مختلفة. عند اختيار طريقة الفصل، من الضروري مراعاة الاحتياجات المحددة لسلالة الخلايا وأهداف التجربة. يعد المراقبة المنتظمة لحيوية الخلايا، بهدف الوصول إلى نسبة تزيد عن 90٪ في وقت إعادة الاستنبات، أمرًا ضروريًا للحفاظ على صحة وإنتاجية المزرعة. فيما يلي نظرة عامة على هذه الإجراءات: