SW480-Luc
777.00 $*
המוצרים נשלחים קפואים בקרח יבש בתוך צינורות קריוגניים. כל צינור קריוגני מכיל בדרך כלל 3 × 10 6 תאים עבור קווי תאים נצמדים או 5 × 106 תאים עבור קווי תאים בתמיסה (לפרטים נוספים, עיין בתעודת ה-CoA של האצווה).
מידע כללי
| תיאור | SW480-Luc הוא נגזרת ביולומינסצנטית של קו התאים האנושי SW480 של אדנוקרצינומה במעי הגס, שהונדס כך שיבטא באופן יציב את גן הרפורט של לוקיפרז של גחלילית. קו התאים SW480 המקורי הוקם מאדנוקרצינומה ראשונית של המעי הגס של מטופל גבר לבן בן 51, והוא נמצא בשימוש נרחב כמודל לסרטן המעי הגס הראשוני. תאי SW480 מציגים מורפולוגיה דמוית אפיתל ומכילים מוטציות אונקוגניות מרכזיות, כולל KRAS G12V, TP53 R273H ו-P309S, וכן קיצור של APC, מה שהופך את הקו הזה למודל רלוונטי לחקר תפקידם של מסלולי האיתות Wnt/β-catenin ו-KRAS בסרטן המעי הגס. חשוב לציין כי SW480 נגזר מאותו חולה כמו SW620, אך מייצג את הגידול הראשוני, מה שמאפשר מחקרים השוואתיים בין הביולוגיה של סרטן המעי הגס הראשוני לזו של סרטן המעי הגס הגרורתי. השילוב היציב של לוקיפרז ב-SW480-Luc מאפשר הדמיה רגישה וכמותית באמצעות ביולומינציה (BLI) של עומס הגידול במודלים של שתלים תת-עוריים ואורתוטופיים, תוך שימוש במאכסנים בעלי מערכת חיסונית מוחלשת. האות הזוהר הנפלט מתואם למספר תאי הגידול החיים, מה שמאפשר ניטור ארוך טווח ולא פולשני של השתלת הגידול, קינטיקת הצמיחה והתגובה הטיפולית. SW480-Luc נמצא בשימוש נרחב להערכה in vivo של חומרים המכוונים ל-KRAS, מעכבי מסלול Wnt ומשטרי כימותרפיה בסרטן המעי הגס, וכן למחקרים השוואתיים עם קו SW620 הגרורתי התואם. SW480-Luc שומר על המאפיינים המולקולריים המוכרים של קו SW480 ההורי, כולל מוטציות ב-KRAS, TP53 ו-APC. השינוי בלוקיפרז משפר באופן משמעותי את תפוקת הניסוי ואת הרגישות למחקרים פרמקודינמיים in vivo. על החוקרים לאמת את פעילות הלוציפרז, את פרופיל המוטציות ואת קינטיקת הגידול בתנאי הניסוי הספציפיים שלהם, לפני שימוש פרה-קליני בקנה מידה גדול. |
|---|---|
| אורגניזם | אדם |
| רקמה | קולון |
| מחלה | אדנוקרצינומה של המעי הגס |
מאפיינים
| גיל | 51 שנים |
|---|---|
| מגדר | זכר |
| מוצא אתני | קווקזי |
| מורפולוגיה | דמוי אפיתל |
| תכונות צמיחה | דבק |
נתונים רגולטוריים
| ציטוט | SW480-Luc (מספר קטלוג Cytion 305698) |
|---|---|
| רמת בטיחות ביולוגית | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_C8Y1 |
| סטטוס GMO | GMO-S1: קו תאים זה מכיל קלטת דיווח של לוקיפרז של גחלילית (Luc2, עם קודונים מותאמים) המשולבת באופן יציב, שהוכנסה באמצעות העברה לנטרווירוס שאינו מסוגל לשכפל את עצמו. אוכלוסיית התאים הפוליקלונלית שהתקבלה נשמרה תחת סלקציה של פורומיצין (1–5 µg/mL). נדרשת רמת אבטחה S1. סיווג זה חל רק בגרמניה ועשוי להיות שונה במקומות אחרים. |
נתונים ביו-מולקולריים
| קולטנים מבוטאים | פקטור גדילה אפידרמלי (EGF), קרטין (צביעת אימונופרוקסידאז). מטריליזין, מטאלופרוטאינז הקשור לפולשנות הגידול, אינו בא לידי ביטוי. |
|---|---|
| ביטוי חלבון | חלבון P53; Luc2 (גחלילית, מותאם לקודונים) |
| ביטוי אנטיגן | HLA A2, B8, B17, סוג דם A, Rh+. Luc2 (גחלילית, מותאם לקודונים) |
| איזואנזימים | G6PD, B, PGM1, 2, PGM3, 1, 6PGD, A, PEP-D, 1, ES-D, 1 |
| Tumorigenic | כן, בעכברים עירומים |
| נגיפים | שלילי לטרנסקריפטאז הפוך |
| רגישות לנגיפים | נגיף הכשל החיסוני האנושי (HIV, LAV) |
| מוצרים | אנטיגן קרצינו-עוברי (CEA) 0.7 ng/106 תאים/10 ימים, קרטין, TGF-β. דווח כי התאים מייצרים GM-CSF. |
| פרופיל מוטציוני | מוטציה: p.Gln1338Ter, הומוזיגוטי; מוטציה: p.Gly12Val, הומוזיגוטי; מוטציה: p.Arg273His, הטרוזיגוטי; מוטציה: p.Pro309Ser, הטרוזיגוטי |
טיפול
| תרבית ביניים | DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a) |
|---|---|
| תוספים | הוסף לתווך 10% FBS |
| חומר מפרק | אקוטאז |
| תת-תרבות | הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי. |
| יחס פיצול | 1 עד 3 |
| צפיפות זריעה | 1 עד 3 x 104 תאים/סמ"ר |
| חידוש נוזלים | 2 עד 3 פעמים בשבוע |
| חומר הקפאה | כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה. |
| הפשרה וגידול תאים |
|
| אטמוספירת דגירה | 37°C, 5%CO2, אווירה לחה. |
| תנאי משלוח | שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים. |
| תנאי אחסון | לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי. |