תאי NRK-EGFP3-Seh1

‏800.00 ‏$*

המוצרים נשלחים קפואים בקרח יבש בתוך צינורות קריוגניים. כל צינור קריוגני מכיל בדרך כלל 3 × 10 ⁶ תאים עבור קווי תאים נצמדים או 5 × 10⁶ תאים עבור קווי תאים בתמיסה (לפרטים נוספים, עיין בתעודת ה-CoA של האצווה).

מחירים לא כולל מיסים בתוספת עלויות משלוח

cryovial

מספר מוצר: 500731

גיליון בטיחות

גיליון מוצר

תיאור	קו התאים NRK-EGFP3-Seh1 הוא קו יציב משובט שמקורו בתאי כליה נורמליים של חולדה (NRK). קו תאים זה נוצר באמצעות טרנספקציה של פלסמיד מעגלי המקודד לחלבון היתוך EGFP3-Seh1. לאחר הטרנספקציה, התאים נבחרו על פי עמידותם לתרופות, כדי להבטיח יצירת אוכלוסייה יציבה המבטאת את המבנה הרצוי. כ-50% מהתאים באוכלוסייה זו מבטאים EGFP3-Seh1, חלבון פיוז'ן המשלב חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר (EGFP) עם Seh1, מרכיב חלבוני של קומפלקס הנקבוביות הגרעיניות. נוכחותו של EGFP מקלה על הדמיה ומעקב אחר חלבון הפיוז'ן בתוך התאים, ומאפשרת לחוקרים לחקור את הדינמיקה והתפקוד של Seh1 בתהליכים תאיים שונים. עם זאת, הביטוי של EGFP3-Seh1 בקו תאים זה מציג שונות מסוימת, המעידה על שונות ברמות הביטוי בין תאים בודדים באוכלוסייה. קו תאים זה שימושי במיוחד למחקרים העוסקים בהרכבת קומפלקס הנקבוביות הגרעיניות, בהובלה גרעינית-ציטופלזמית ובתפקידו של Seh1 בתהליכים אלה. הזוהר המסופק על ידי EGFP מאפשר הדמיה של תאים חיים וניתוח בזמן אמת של מיקום החלבונים והאינטראקציות ביניהם, מה שהופך את NRK-EGFP3-Seh1 לכלי חשוב לביולוגיה תאית ולמחקר מולקולרי.
אורגניזם	חולדה
רקמה	כליה
מילים נרדפות	NRK EGFP3-Seh1

זן/תת-זן	אוסבורן מנדל
מורפולוגיה	תאים דמויי פיברובלסטים בעלי צורה פוספורמית
תכונות צמיחה	שכבה אחת, דבוקה

ציטוט	NRK-EGFP3-Seh1 (מספר קטלוגי Cytion 500731)
רמת בטיחות ביולוגית	1
NCBI_TaxID	10116
CellosaurusAccession	CVCL_AV94
מפקיד	מעבדת אלנברג (EMBL)

קולטנים מבוטאים	פקטור גדילה אפידרמלי (EGF), פעילות מגרה שכפול (MSA)
ביטוי חלבון	EGFP3-Seh1
מוצרים	Seh1 (נולאופורין דמוי SEH1)

תרבית ביניים	DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
תוספים	הוסף לתמיסה 10% FBS, 0.5 מ"ג/מ"ל G418
חומר מפרק	אקוטאז
תת-תרבות	הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
יחס פיצול	מומלץ להשתמש ביחס של 1:3 עד 1:4
צפיפות זריעה	2 עד 4 x 10⁴ תאים/סמ^"ר
חידוש נוזלים	2 עד 3 פעמים בשבוע
חומר הקפאה	כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
הפשרה וגידול תאים	ודא שהבקבוקון נשאר קפוא לחלוטין בעת המסירה, שכן התאים נשלחים בקרח יבש כדי לשמור על טמפרטורה אופטימלית במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, אחסן את הבקבוקון הקריוגני מיד בטמפרטורה נמוכה מ-150°C כדי להבטיח את שמירת שלמות התאים, או המשך לשלב 3 אם נדרשת תרבית מיידית. לצורך תרבית מיידית, הפשיר את הבקבוקון במהירות על ידי טבילתו באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם מים נקיים וחומר אנטי-מיקרוביאלי, תוך ערבוב עדין במשך 40-60 שניות עד שנותר גוש קרח קטן. בצע את כל השלבים הבאים בתנאים סטריליים במנדף, וחטא את בקבוקון הקריוואלי באתנול 70% לפני הפתיחה. פתח בזהירות את הבקבוקון המחוטא והעבר את תמיסת התאים לצינור צנטריפוגה בנפח 15 מ"ל המכיל 8 מ"ל של מצע תרבית בטמפרטורת החדר, תוך ערבוב עדין. סובבו את התערובת בצנטריפוגה ב-300 x g למשך 3 דקות כדי להפריד את התאים, וזרקו בזהירות את הנוזל העליון המכיל את שאריות מצע ההקפאה. השרו בעדינות את משקע התאים ב-10 מ"ל של מצע תרבית טרי. עבור תאים נצמדים, חלקו את התמיסה בין שני צלוחיות תרבית T25; עבור תרבויות תמיסה, העבירו את כל המצע לצלוחית T25 אחת כדי לקדם אינטראקציה וצמיחה יעילות של התאים. הקפידו על פרוטוקולי תת-תרבות קבועים להמשך צמיחה ותחזוקה של קו התאים, כדי להבטיח תוצאות ניסוי אמינות.
אטמוספירת דגירה	37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.
ציפוי בקבוק	אף אחד
הליך ההקפאה	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי משלוח	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי אחסון	לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

עקרות	זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה. כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

תאי NRK-EGFP3-Seh1

מידע כללי

מאפיינים

נתונים רגולטוריים

נתונים ביו-מולקולריים

טיפול

בקרת איכות / פרופיל גנטי / HLA