תאי NCI-H1048

1. ודא שהבקבוקון נשאר קפוא לחלוטין בעת המסירה, שכן התאים נשלחים בקרח יבש כדי לשמור על טמפרטורה אופטימלית במהלך ההובלה.

2. עם קבלת המשלוח, אחסן את הבקבוקון הקריוגני מיד בטמפרטורה נמוכה מ-150- מעלות צלזיוס כדי להבטיח את שמירת שלמות התאים, או המשך לשלב 3 אם נדרשת תרבית מיידית.

3. לצורך תרבית מיידית, הפשר את הבקבוקון במהירות על ידי טבילתו באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם מים נקיים וחומר אנטי-מיקרוביאלי, תוך ערבוב עדין במשך 40-60 שניות עד שנותר גוש קרח קטן.

4. בצע את כל השלבים הבאים בתנאים סטריליים במנדף, וחטא את בקבוקון הקריוגני ב-70% אתנול לפני הפתיחה.

5. פתח בזהירות את הבקבוקון המחוטא והעבר את תמיסת התאים לצינור צנטריפוגה בנפח 15 מ"ל המכיל 8 מ"ל של מצע תרבית בטמפרטורת החדר, תוך ערבוב עדין.

מדיום

מדיום HITES בתוספת 5% סרום עגלי: המדיום הבסיסי עבור קו תאים זה הוא DMEM:F12Medium (מספר קטלוגי 820400a). כדי להכין את המדיום המלא, הוסף את המרכיבים הבאים למדיום הבסיסי:

• 0.005 מ"ג/מ"ל אינסולין
• 0.01 מ"ג/מ"ל טרנספרין
• 30 ננומטר סלניט נתרן (ריכוז סופי)
• 10 ננומטר הידרוקורטיזון (ריכוז סופי)
• 10 ננומטר בטא-אסטרדיול (ריכוז סופי)
• 2 מ"מ L-גלוטמין נוסף (לריכוז סופי של 4.5 מ"מ)
• 5% סרום עגלי (ריכוז סופי)

6. סובבו את התערובת בצנטריפוגה ב-300 x g למשך 3 דקות כדי להפריד את התאים, והיפטרו בזהירות מהנוזל העליון המכיל שאריות של חומר הקפאה.

7. השרו מחדש את משקע התאים ב-10 מ"ל של חומר גידול טרי. עבור תאים נצמדים, חלקו את התמיסה בין שני צלוחיות גידול T25; עבור תרבויות תמיסה, העבירו את כל חומר הגידול לצלוחית T25 אחת כדי לקדם אינטראקציה וצמיחה יעילות של התאים.

8. הקפידו על פרוטוקולי תת-תרבות קבועים להמשך צמיחה ותחזוקה של קו התאים, כדי להבטיח תוצאות ניסוי אמינות.

37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.