תאי NCH612

‏800.00 ‏$*

המוצרים נשלחים קפואים בקרח יבש בתוך צינורות קריוגניים. כל צינור קריוגני מכיל בדרך כלל 3 × 10 ⁶ תאים עבור קווי תאים נצמדים או 5 × 10⁶ תאים עבור קווי תאים בתמיסה (לפרטים נוספים, עיין בתעודת ה-CoA של האצווה).

מחירים לא כולל מיסים בתוספת עלויות משלוח

cryovial

מספר מוצר: 300121

גיליון בטיחות

גיליון מוצר

תיאור	NCH612 הוא קו תאים אוליגודנדרוציטיים שמקורו ברקמת מוח אנושית ומשמש כמודל מחקר רלוונטי לאוליגודנדרוגליומה אנאפלסטית (דרגה III של ארגון הבריאות העולמי). קו תאים זה נושא את המוטציה IDH1 R132H, שינוי גנטי אופייני הקשור לעתים קרובות לאוליגודנדרוגליומות. המוטציה מובילה לשינויים אפיגנטיים, כולל פנוטיפ מתילציה של אי CpG בגליומה (G-CIMP), התורם להתפתחות ולהתקדמות הגידול. יש לציין כי NCH612 מציג מחיקה חלקית של זרועות הכרומוזומים 1p ו-19q, מאפיין גנטי הנפוץ באוליגודנדרוגליומות וקשור לפרוגנוזה טובה יותר ותגובה טובה יותר לטיפולים מסוימים. מחקרים הראו כי NCH612 רגיש במיוחד למעכב DNA methyltransferase decitabine (DAC). טיפול ב-DAC מביא להפחתת התרבות התאים והיווצרות מושבות, בעיקר באמצעות ויסות כלפי מטה של TERT (telomerase reverse transcriptase) וויסות כלפי מעלה של p21, מעכב קינאז תלוי-ציקלין המעורב בתגובה לנזק ל-DNA. מעניין לציין כי רגישות זו קשורה ככל הנראה לנוכחות הן של מוטציה ב-IDH1 והן של מחיקה משותפת של 1p/19q, שכן קווי תאים אחרים של גליומה עם מוטציה ב-IDH1 ללא מחיקה זו, כגון NCH1681, מפגינים עמידות ל-DAC. ממצאים אלה מצביעים על כך שטיפולים אפיגנטיים כמו DAC עשויים להיות יעילים במיוחד באנפלסטית אוליגודנדרוגליומה עם מוטציה ב-IDH1 ו-1p/19q codeletion. מחקרים מולקולריים נוספים מגלים כי טיפול ב-DAC בתאי NCH612 מוביל להעשרת מסלולים הקשורים לשכפול DNA, ויסות מחזור התא ותפקוד ליזוזומלי, מה שמאיר אור על מנגנון הפעולה של התרופה. דיכוי TERT על ידי DAC מתווך על ידי p21, מה שמדגיש את התפקיד הקריטי של מסלול זה בתגובה לטיפול אפיגנטי. בהתחשב בפרופיל הגנטי והאפיגנטי המוגדר היטב שלו, NCH612 מהווה מודל חשוב במבחנה לחקר הביולוגיה של אוליגודנדרוגליומות אנאפלסטיות ולפיתוח טיפולים ממוקדים המיועדים לגידולים עם מוטציה ב-IDH1 עם מחיקה משותפת של 1p/19q.
אורגניזם	אדם
רקמה	מוח
מחלה	אוליגודנדרוגליומה אנאפלסטית, דרגה III של ארגון הבריאות העולמי, מוטציה IDH1 (R132H)

גיל	39 שנים
מגדר	זכר
מוצא אתני	קווקזי
תכונות צמיחה	תרבות ספרואידית

ציטוט	NCH612 (מספר קטלוגי Cytion 300121)
רמת בטיחות ביולוגית	1
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	CVCL_x913

תרבית ביניים	DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3.1 g/L גלוקוז, w: 2.5 mM L-גלוטמין, w: 15 mM HEPES, w: 0.5 mM נתרן פירובט, w: 1.2 g/L NaHCO3 (מספר קטלוגי Cytion 820400a)
תוספים	הוסף לתמיסה 10% FBS, 5 מ"ג/ל' הפרין, 20 נ"ג/מ"ל bFGF, 20 מיקרוגרם/ל' EGF, 5 מ"ג/ל' אינסולין, 100 מ"ג/ל' טרנספרין, 5.2 מיקרוגרם/ל' Na-selenit, 6.3 מיקרוגרם/ל' פרוגסטרון, 161.1 מיקרוגרם/ל' Putrescin, 50 מ"ג/ל' Hydrocortinson
תת-תרבות	לצורך תרבית משנה של תרבויות כדוריות, יש להתחיל בפירוק מכני של הכדוריות באמצעות פיפטה Eppendorf עם קצות מסנן של 1000 μl, על ידי שאיבה כלפי מעלה ומטה 5 עד 10 פעמים. לאחר מכן, יש לסובב את התערובת בצנטריפוגה ב-300g למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר כדי להפריד את התאים. יש לשפוך את הנוזל העליון ולהחזיר את תאי התרבות למדיום תרבית טרי. לבסוף, העבירו את התאים המושעים מחדש לכלי תרבית חדשים כדי לקדם היווצרות נוספת של ספרואידים. גישה זו מבטיחה פירוק יעיל של הספרואידים ומכינה אותם להמשך צמיחה בסביבה חדשה
צפיפות זריעה	1 x 10⁵ תאים/מ"ל
חידוש נוזלים	יש להוסיף מצע טרי כל 2-3 ימים (2-5 מ"ל, בהתאם לגודל צלוחית תרבית התאים).
התאוששות לאחר הפשרה	לאט. לאחר ההפשרה, יש לאפשר לתאים להתאושש מתהליך ההקפאה במשך 48 שעות לפחות.
חומר הקפאה	כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים ב-50% מדיום בסיסי + 40% FBS + 10% DMSO, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקירור.
הפשרה וגידול תאים	ודא שהבקבוקון נשאר קפוא לחלוטין בעת המסירה, שכן התאים נשלחים בקרח יבש כדי לשמור על טמפרטורה אופטימלית במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, אחסן את הבקבוקון הקריוגני מיד בטמפרטורה נמוכה מ-150°C כדי להבטיח את שמירת שלמות התאים, או המשך לשלב 3 אם נדרשת תרבית מיידית. לצורך תרבית מיידית, הפשיר את הבקבוקון במהירות על ידי טבילתו באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם מים נקיים וחומר אנטי-מיקרוביאלי, תוך ערבוב עדין במשך 40-60 שניות עד שנותר גוש קרח קטן. בצע את כל השלבים הבאים בתנאים סטריליים במנדף, וחטא את בקבוקון הקריוואלי באתנול 70% לפני הפתיחה. פתח בזהירות את הבקבוקון המחוטא והעבר את תמיסת התאים לצינור צנטריפוגה בנפח 15 מ"ל המכיל 8 מ"ל של מצע תרבית בטמפרטורת החדר, תוך ערבוב עדין. סובבו את התערובת בצנטריפוגה ב-300 x g למשך 3 דקות כדי להפריד את התאים, וזרקו בזהירות את הנוזל העליון המכיל את שאריות מצע ההקפאה. השרו בעדינות את משקע התאים ב-10 מ"ל של מצע תרבית טרי. עבור תאים נצמדים, חלקו את התמיסה בין שני צלוחיות תרבית T25; עבור תרבויות תמיסה, העבירו את כל המצע לצלוחית T25 אחת כדי לקדם אינטראקציה וצמיחה יעילות של התאים. הקפידו על פרוטוקולי תת-תרבות קבועים להמשך צמיחה ותחזוקה של קו התאים, כדי להבטיח תוצאות ניסוי אמינות.
אטמוספירת דגירה	37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.
ציפוי בקבוק	אף אחד
הליך ההקפאה	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי משלוח	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי אחסון	לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

עקרות	זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה. כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.
אללים HLA	A: 02:01:01 B: '57:01:01, '57:01:01G C: 04:01:01 DRB1: 11:01:01 DQA1: 05:05:01 DQB1: 03:01:01 DPB1*: 04:02:01 E: 01:03:02

תאי NCH612

מידע כללי

מאפיינים

נתונים רגולטוריים

נתונים ביו-מולקולריים

טיפול

בקרת איכות / פרופיל גנטי / HLA