תאי MML-1

‏800.00 ‏$*

המוצרים נשלחים קפואים בקרח יבש בתוך צינורות קריוגניים. כל צינור קריוגני מכיל בדרך כלל 3 × 10 ⁶ תאים עבור קווי תאים נצמדים או 5 × 10⁶ תאים עבור קווי תאים בתמיסה (לפרטים נוספים, עיין בתעודת ה-CoA של האצווה).

מחירים לא כולל מיסים בתוספת עלויות משלוח

cryovial

מספר מוצר: 300288

גיליון בטיחות

גיליון מוצר

תיאור	קו התאים MML-1 הוא קו תאים של מלנומה שמקורו במלנומה ממאירה. קו תאים זה משמש בעיקר לחקר הביולוגיה של מלנומה, ובפרט לתפקיד של שלפוחיות תאיות (EVs) בתקשורת בין תאים ובהתקדמות הגידול. תאי MML-1 משחררים תת-סוגים שונים של EVs, כולל אקסוזומים, מיקרו-שלפוחיות וגופי אפופטוזיס, שכל אחד מהם נושא מטען RNA שונה, כגון microRNAs (miRNAs) ו-RNAs אחרים שאינם מקודדים. מחקרים שבוצעו בתאי MML-1 הוכיחו כי האקסוזומים המשתחררים מתאים אלה מכילים miRNA ספציפיים כגון miR-214-3p, miR-199a-3p ו-miR-155-5p, הקשורים קשר הדוק להתקדמות המלנומה ולגרורות. MiRNAs אלה מועשרים באקסוזומים בהשוואה לסוגים אחרים של EV, והם קשורים למסלולים חשובים הקשורים למלנומה, כגון ויסות מסלול האיתות MAPK ואינטראקציות במיקרו-סביבה של הגידול. מעניין לציין כי השוואות בין פרופילי miRNA מאקסוזומים שמקורם ב-MML-1 לדגימות קליניות של מלנומה מראות חפיפה משמעותית, מה שמצביע על הרלוונטיות הקלינית של מודל תאים זה להבנת התקדמות המלנומה. בנוסף ל-miRNAs, תאי MML-1 משחררים גם RNAs אחרים שאינם מקודדים, כגון RNAs נוקלאולריים קטנים (snoRNAs) ו-RNAs מעבירים הקשורים למיטוכונדריה (mt-RNAs), אשר מופצים באופן שונה בין תתי-סוגי ה-EV. ממצאים אלה מדגישים את התועלת של קו התאים MML-1 בחקר המנגנונים המולקולריים של מלנומה, ובפרט את האופן שבו תאי הגידול מתקשרים באמצעות EVs ומשפיעים על הסביבה המיקרוסקופית שלהם.
אורגניזם	אדם
רקמה	עור
מחלה	מלנומה
מילים נרדפות	MML1

גיל	לא צוין
מגדר	לא צוין
מורפולוגיה	דמוי אפיתל
תכונות צמיחה	דבק

ציטוט	MML-1 (מספר קטלוגי Cytion 300288)
רמת בטיחות ביולוגית	1
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	CVCL_6004

ביטוי חלבון	P53 חיובי
Tumorigenic	כן, בעכברים עירומים
טרנסקריפטאז הפוך	שלילי
פרופיל מוטציוני	מוטציה מסוג V600E BRAF נקבעה באמצעות שיטות מבוססות DNA (ריצוף, RT-PCR) ושיטות מבוססות חלבון (Western Blot).

תרבית ביניים	RPMI 1640, w: 2.0 mM גלוטמין יציב, w: 2.0 g/L NaHCO3 (מספר קטלוגי של Cytion 820700a)
תוספים	הוסף לתווך 10% FBS
חומר מפרק	אקוטאז
תת-תרבות	הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
צפיפות זריעה	1 x 10⁴ תאים/סמ^"ר
חידוש נוזלים	2 עד 3 פעמים בשבוע
התאוששות לאחר הפשרה	לאחר ההפשרה, צלחת את התאים ב-5 x 10⁴ תאים/סמ"^ר והניח לתאים להתאושש מתהליך ההקפאה ולהידבק למשך 24 שעות לפחות.
חומר הקפאה	כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
הפשרה וגידול תאים	ודא שהבקבוקון נשאר קפוא לחלוטין בעת המסירה, שכן התאים נשלחים בקרח יבש כדי לשמור על טמפרטורה אופטימלית במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, אחסן את הבקבוקון הקריוגני מיד בטמפרטורה נמוכה מ-150°C כדי להבטיח את שמירת שלמות התאים, או המשך לשלב 3 אם נדרשת תרבית מיידית. לצורך תרבית מיידית, הפשיר את הבקבוקון במהירות על ידי טבילתו באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם מים נקיים וחומר אנטי-מיקרוביאלי, תוך ערבוב עדין במשך 40-60 שניות עד שנותר גוש קרח קטן. בצע את כל השלבים הבאים בתנאים סטריליים במנדף, וחטא את בקבוקון הקריוואלי באתנול 70% לפני הפתיחה. פתח בזהירות את הבקבוקון המחוטא והעבר את תמיסת התאים לצינור צנטריפוגה בנפח 15 מ"ל המכיל 8 מ"ל של מצע תרבית בטמפרטורת החדר, תוך ערבוב עדין. סובבו את התערובת בצנטריפוגה ב-300 x g למשך 3 דקות כדי להפריד את התאים, וזרקו בזהירות את הנוזל העליון המכיל את שאריות מצע ההקפאה. השרו בעדינות את משקע התאים ב-10 מ"ל של מצע תרבית טרי. עבור תאים נצמדים, חלקו את התמיסה בין שני צלוחיות תרבית T25; עבור תרבויות תמיסה, העבירו את כל המצע לצלוחית T25 אחת כדי לקדם אינטראקציה וצמיחה יעילות של התאים. הקפידו על פרוטוקולי תת-תרבות קבועים להמשך צמיחה ותחזוקה של קו התאים, כדי להבטיח תוצאות ניסוי אמינות.
אטמוספירת דגירה	37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.
ציפוי בקבוק	אף אחד
הליך ההקפאה	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי משלוח	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי אחסון	לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

עקרות	זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה. כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

מופעל על ידי Bioz לפרטים נוספים על Bioz

תאי MML-1

מידע כללי

מאפיינים

נתונים רגולטוריים

נתונים ביו-מולקולריים

טיפול

בקרת איכות / פרופיל גנטי / HLA