תאי K7M2 עם wt-Luc
מידע כללי
| תיאור | K7M2 wt-Luc הוא נגזרת ביולומינסצנטית של קו התאים K7M2 של אוסטאוסרקומה בעכברים, שהונדס כך שיבטא באופן יציב גן-דיווח של לוקיפרז של גחלילית. קו התאים ההורי K7M2 הוקם מתוך מיימת של אוסטאוסרקומה ספונטנית בעכבר מסוג BALB/c, והוא מאופיין במורפולוגיה אוסטאובלסטית ובפוטנציאל גרורתי גבוה, במיוחד לריאות. K7M2 הוא אחד ממודלי האוסטאוסרקומה הסינגניים הבודדים הזמינים ברקע BALB/c, מה שהופך אותו לכלי חשוב לחקר הביולוגיה של האוסטאוסרקומה, האינטראקציות בין הגידול למערכת החיסון, והערכת אסטרטגיות אימונותרפיה במאכסן בעל מערכת חיסונית תקינה. השילוב היציב של לוקיפרז ב-K7M2 wt-Luc מאפשר הדמיה רגישה ולא פולשנית באמצעות ביולומיננס (BLI) של צמיחת הגידול הראשוני והתפשטות גרורות ריאתיות בעכברי BALB/c סינגניים. לאחר מתן מצע הלוציפרין, האות הנפלט מתואם למספר תאי הגידול החיים, מה שמאפשר מעקב ארוך טווח אחר השתלת הגידול, התפשטות גרורתית ותגובה טיפולית ללא צורך בהליכים פולשניים בכל נקודת זמן. כתוצאה מכך, זן K7M2 wt-Luc מתאים במיוחד למחקרים פרה-קליניים הבוחנים חומרים נוגדי-גידול ונוגדי-גרורות, מעכבי נקודות בקרה ואסטרטגיות טיפול משולבות באוסטאוסרקומה. K7M2 wt-Luc שומר על התכונות הביולוגיות והאימונולוגיות של קו ה-K7M2 ההורי, כולל ביטוי של מרכיב המשלים C3 ושל קולטן Fc גמא I (FcgRI) – תכונות העשויות להשפיע על האינטראקציות עם המערכת החיסונית המולדת. הרפורט של לוקיפרז משפר באופן משמעותי את הגמישות והרגישות הניסויית למעקב בזמן אמת אחר התקדמות הגידול. על החוקרים לאמת את פעילות הלוציפרז, את קינטיקת הצמיחה ואת דפוס הגרורות בתנאי הניסוי הספציפיים שלהם, לפני שימוש בקנה מידה נרחב in vivo. |
|---|---|
| אורגניזם | עכבר |
| רקמה | מיימת |
| מחלה | אוסטאוסרקומה בעכבר |
| אתר גרורתי | ריאה |
| יישומים | מחקר בנושא אוסטאוסרקומה; מודל גידול סינגני מסוג BALB/c; הדמיה של גרורות ריאתיות באמצעות ביולומיננס; הערכת תרופות נגד גידולים ונגד גרורות; בדיקות מעכבי נקודות בקרה; מחקרים על אינטראקציות של המערכת החיסונית המולדת (C3, FcgRI); אימונותרפיה לסרטן העצם בילדים |
| מילים נרדפות | K7M2-WT, K7M2 |
מאפיינים
| זן/תת-זן | BALB/c |
|---|---|
| גיל | 895 ימים |
| מגדר | נקבה |
| סוג התא | אוסטאובלסט |
| תכונות צמיחה | דבק |
נתונים רגולטוריים
| ציטוט | K7M2 wt-Luc (מספר קטלוג Cytion 305684) |
|---|---|
| רמת בטיחות ביולוגית | 1 |
| NCBI_TaxID | 10090 |
| CellosaurusAccession | לא הוקצה (נגזרת של רפורט-K7M2 wt-Luc; אוסטאוסרקומה סינגנית K7M2 של BALB/c מההורה) |
| סטטוס GMO | GMO-S1: קו תאים זה מכיל קלטת דיווח של לוקיפרז של גחלילית (Luc2, עם קודונים מותאמים) המשולבת באופן יציב, שהוכנסה באמצעות העברה לנטרווירוס שאינו מסוגל לשכפל את עצמו. אוכלוסיית התאים הפוליקלונלית שהתקבלה נשמרה תחת סלקציה של פורומיצין (1–5 µg/mL). נדרשת רמת אבטחה S1. סיווג זה חל רק בגרמניה ועשוי להיות שונה במקומות אחרים. |
נתונים ביו-מולקולריים
| קולטנים מבוטאים | משלים (C3), מבוטא, קולטן Fc, IgG, זיקה גבוהה I(Fcgr1), מבוטא |
|---|---|
| ביטוי אנטיגן | Luc2 (גחלילית, מותאם לקודונים) |
| Tumorigenic | כן |
טיפול
| תרבית ביניים | DMEM |
|---|---|
| תוספים | הוסף לתווך 10% FBS |
| חומר מפרק | אקוטאז |
| תת-תרבות | הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי. |
| יחס פיצול | 1 עד 3 |
| צפיפות זריעה | 1 עד 3 x 104 תאים/סמ"ר |
| חידוש נוזלים | 2 עד 3 פעמים בשבוע |
| חומר הקפאה | כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה. |
| הפשרה וגידול תאים |
|
| אטמוספירת דגירה | 37°C, 5%CO2, אווירה לחה. |
| תנאי משלוח | שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים. |
| תנאי אחסון | לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי. |
בקרת איכות וניתוח מולקולרי
| אתר גרורתי: | ריאה |
|---|