תאי HaCaT-ras A5

‏550.00 ‏$*

המוצרים נשלחים קפואים בקרח יבש בתוך צינורות קריוגניים. כל צינור קריוגני מכיל בדרך כלל 3 × 10 ⁶ תאים עבור קווי תאים נצמדים או 5 × 10⁶ תאים עבור קווי תאים בתמיסה (לפרטים נוספים, עיין בתעודת ה-CoA של האצווה).

מחירים לא כולל מיסים בתוספת עלויות משלוח

cryovial

מספר מוצר: 300494

גיליון בטיחות

גיליון מוצר

תיאור	תאי HaCaT-ras A5 הם קו תאים של קרטינוציטים בעור האדם, שהפכו באופן ספונטני לבלתי מתים ואינם גורמים לגידולים, והם משמשים במחקר על אינטראקציות בסביבה המיקרו-סביבתית של הגידול ועל התקדמות קרצינומה בעור. תאים אלה, שמקורם בגבר לבן בן 62, עברו ברירה קלונלית ומוטגנזה, אשר בשילוב עם ויסות גורם גדילה אוטוקריני, מאפשרים היווצרות של גידולים ציסטיים שפירים, בעלי צמיחה איטית ומבדילים מאוד, בעכברי Balb/c-nu/nu. זה הופך אותם למודל חשוב לחקר הדינמיקה התאית והמנגנונים המולקולריים של התקדמות הגידול in vivo. תאי HaCaT-ras A5 שימושיים במיוחד להבהרת האינטראקציות המורכבות בין תאי הגידול לתאי הסטרומה הסובבים אותם, כולל פיברובלסטים, תאי חיסון ותאי אנדותל. אינטראקציות אלה מתווכות על ידי הפרשת מולקולות איתות שונות, כגון גורמי גדילה, ציטוקינים ופרוטאזות, שביניהן אינטרלוקין-6 (IL-6) ממלא תפקיד מרכזי. ידוע כי IL-6 הופך לבלתי מבוקר בסוגים רבים של סרטן, בעיקר באמצעות ביטוי יתר או הפעלה מתמשכת של גורם השעתוק STAT3. מחקרים הראו שגירוי IL-6 של תאי HaCaT-ras A5 מגביר באופן משמעותי את התרבותם באמצעות מסלול האיתות JAK/STAT, בעוד שתאי פיברובלסטים נותרים ללא השפעה בשל עיכוב חזק יותר על ידי SOCS3, רגולטור שלילי של מסלול זה. תגובה דיפרנציאלית זו תועדה במודל מתמטי המתאר את הדינמיקה של STAT3 ו-SOCS3, ומספק הבנה מעמיקה יותר של שרשראות איתות ספציפיות לתאים. יתר על כן, IL-6 לא רק משפיע ישירות על התרבות תאי HaCaT-ras A5, אלא גם משפיע בעקיפין על הסביבה התאית באמצעות הפעלת רשת של גורמי גדילה כגון HGF, KGF, VEGF ו-IL-8. ניתוח ביטוי גנים של מעל 16,000 גנים גילה שגירוי IL-6 מעלה את הרגולציה של 19 גנים הקשורים למסלול האותות של אינטרפרון בתאי HaCaT-ras A5 ובפיברובלסטים, מה שמתאים לעיכוב הצמיחה שנצפה בפיברובלסטים. גילוי תפקידו המכריע של SerpinB4 בשגשוג תאי HaCaT-ras A5, שאושר באמצעות ניסויי siRNA knockdown, מדגיש את הוויסות המורכב של IL-6 בתאי הגידול ובתאי הסטרומה. הבנה מקיפה זו של תפקידי IL-6 מגבירה את הפוטנציאל לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות ממוקדות שמטרתן לווסת את מסלולי האיתות של IL-6 בסביבה המיקרו-סביבתית של הגידול. בסך הכל, תאי HaCaT-ras A5 מהווים מודל יציב לחקר האינטראקציה המורכבת בתוך הסביבה המיקרו-סביבתית של הגידול, ומסללים את הדרך לגישות חדשות במחקר הסרטן ובפיתוח טיפולים.
אורגניזם	אדם
רקמה	עור
מילים נרדפות	HaCaT-ras שיבוט A-5, HaCaT A-5, A-5, A5

גיל	62 שנים
מגדר	זכר
מוצא אתני	קווקזי
סוג התא	קרטינוציט
תכונות צמיחה	דבק

ציטוט	HaCaT-ras A5 (מספר קטלוגי Cytion 300494)
רמת בטיחות ביולוגית	1
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	CVCL_xK16
סטטוס GMO	GMO-S1: קו HaCaT-ras A5 זה מכיל קונסטרוקט אונקוגן c-Ha-ras המועבר באמצעות פלסמיד למחקר על שינוי אפיתל. סיווג זה חל רק בגרמניה ועשוי להיות שונה במקומות אחרים.

ביטוי חלבון	P53 (+), CEA (+),
Tumorigenic	היווצרות גידולים שפירים בעכברי Balb/c-nu/nu.
קריוטיפ	אנאופלואידי (היפוטטרהפלואידי)

תרבית ביניים	DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
תוספים	הוסף לתווך 10% FBS
חומר מפרק	יש להכין תערובת ביחס של 1:1 של EDTA (ריכוז 0.05%) וטריפסין (ריכוז 0.1%) בכל פעם לפני ניתוק התאים באמצעות PBS ללא Ca2+ ו-Mg2+ כדי להשיג אוסמולריות פיזיולוגית. לא מומלץ להשתמש בתערובות מוכנות של טריפסין/EDTA, מכיוון שהדבר עלול לגרום להיווצרות גושים של תאים. כחלופה, ניתן להשתמש ב-TrypLETM Express (Life Technologies) במקום טריפסין/EDTA. יש לפעול על פי הפרוטוקול של היצרן.
תת-תרבות	השלכת המדיום הישן: הסר את המדיום הישן מהבקבוקים. שטוף את התאים: הוסף 3-5 מ"ל PBS (ללא סידן ומגנזיום) לבקבוקי T25, או 5-10 מ"ל לבקבוקי T75, כדי לשטוף את התאים הדבוקים. הוסף תמיסת EDTA: כסה את שכבת התאים לחלוטין בתמיסת EDTA 0.05% שהוכנה זה עתה - השתמש ב-1-2 מ"ל לבקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל לבקבוקי T75. דגירה: דגרו את הבקבוקים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות. הוסף תמיסת טריפסין/EDTA: לאחר הדגירה, הוסף תמיסת טריפסין/EDTA טרייה (0.05% טריפסין, 0.025% EDTA) לבקבוקים, תוך הקפדה על כיסוי מלא של התאים - השתמש ב-1 מ"ל לבקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל לבקבוקי T75. עקוב אחר ההתנתקות: התבונן בתאים, אשר אמורים להתנתק תוך 1-2 דקות. נטרול הטריפסין: הוסף תמיסת תרבית תאים המכילה FBS כדי לעצור את פעילות הטריפסין. העברת תאים: מזגו את תמיסת התאים לתוך בקבוקים חדשים שמולאו מראש במדיום תרבית טרי.
צפיפות זריעה	1 x 10⁴ תאים/סמ^"ר
חידוש נוזלים	פעמיים בשבוע
חומר הקפאה	כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
הפשרה וגידול תאים	ודא שהבקבוקון נשאר קפוא לחלוטין בעת המסירה, שכן התאים נשלחים בקרח יבש כדי לשמור על טמפרטורה אופטימלית במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, אחסן את הבקבוקון הקריוגני מיד בטמפרטורה נמוכה מ-150°C כדי להבטיח את שמירת שלמות התאים, או המשך לשלב 3 אם נדרשת תרבית מיידית. לצורך תרבית מיידית, הפשיר את הבקבוקון במהירות על ידי טבילתו באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם מים נקיים וחומר אנטי-מיקרוביאלי, תוך ערבוב עדין במשך 40-60 שניות עד שנותר גוש קרח קטן. בצע את כל השלבים הבאים בתנאים סטריליים במנדף, וחטא את בקבוקון הקריוואלי באתנול 70% לפני הפתיחה. פתח בזהירות את הבקבוקון המחוטא והעבר את תמיסת התאים לצינור צנטריפוגה בנפח 15 מ"ל המכיל 8 מ"ל של מצע תרבית בטמפרטורת החדר, תוך ערבוב עדין. סובבו את התערובת בצנטריפוגה ב-300 x g למשך 3 דקות כדי להפריד את התאים, וזרקו בזהירות את הנוזל העליון המכיל את שאריות מצע ההקפאה. השרו בעדינות את משקע התאים ב-10 מ"ל של מצע תרבית טרי. עבור תאים נצמדים, חלקו את התמיסה בין שני צלוחיות תרבית T25; עבור תרבויות תמיסה, העבירו את כל המצע לצלוחית T25 אחת כדי לקדם אינטראקציה וצמיחה יעילות של התאים. הקפידו על פרוטוקולי תת-תרבות קבועים להמשך צמיחה ותחזוקה של קו התאים, כדי להבטיח תוצאות ניסוי אמינות.
אטמוספירת דגירה	37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.
ציפוי בקבוק	אף אחד
הליך ההקפאה	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי משלוח	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי אחסון	לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

עקרות	זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה. כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.
אללים HLA	A: '31:01:02 B: '40:01:02, '51:01:01 C: 03:04:01, 15:02:01 DRB1: '04:01:01, '15:01:01G DQA1: '01:02:01, '03:03:01 DQB1: '03:01:01, '06:02:01 DPB1*: '03:01:01G, '04:01:01G E: 01:03:01, 01:03:02

מופעל על ידי Bioz לפרטים נוספים על Bioz

תאי HaCaT-ras A5

מידע כללי

מאפיינים

נתונים רגולטוריים

נתונים ביו-מולקולריים

טיפול

בקרת איכות / פרופיל גנטי / HLA