תאי HK EGFP-Kleisin-beta

‏800.00 ‏$*

המוצרים נשלחים קפואים בקרח יבש בתוך צינורות קריוגניים. כל צינור קריוגני מכיל בדרך כלל 3 × 10 ⁶ תאים עבור קווי תאים נצמדים או 5 × 10⁶ תאים עבור קווי תאים בתמיסה (לפרטים נוספים, עיין בתעודת ה-CoA של האצווה).

מחירים לא כולל מיסים בתוספת עלויות משלוח

cryovial

מספר מוצר: 300674

גיליון בטיחות

גיליון מוצר

תיאור	קו התאים HK EGFP-Kleisin-beta מייצג גרסה מהונדסת גנטית של תאי Hela Kyoto, שפותחה בעיקר לצורך מחקר על לכידות כרומוזומים במהלך מחזור התא. קו תאים זה מבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר (EGFP) הממוזג עם חלבון Kleisin-beta, מרכיב חיוני במכלול הקוהסין, החיוני ללכידות כרומוזומים אחים. הביטוי של Kleisin-beta המסומן ב-EGFP מאפשר הדמיה בזמן אמת של הדינמיקה והלוקליזציה של הקוהסין לאורך מחזור התא, מה שמאפשר ניתוח מפורט של מבנה הכרומוזומים ותפקודם בהקשר התאי. מודל תאים זה משמש בדרך כלל במחקרים המתמקדים במנגנונים של הפרדת כרומוזומים מיטוטיים ומיוטיים, ובמיוחד בבחינת האופן שבו ויסות הקוהזיה משפיע על היציבות הגנטית ועל חלוקת התאים. התיוג הזוהר של Kleisin-beta מאפשר לחקור את האינטראקציה שלו עם רכיבי קוהסין אחרים וחלבוני כרומוזומים, ומספק תובנות לגבי ההרכבה המרחבית והזמנית של קוהסין על כרומוזומים. השימוש בקו תאים זה משתרע על מחקרים של הפרעות גנטיות וסרטן שבהם תפקוד הקוהסין מופרע, ומספק כלי חשוב להבנת הפתוגנזה ולפיתוח אסטרטגיות טיפוליות.
אורגניזם	אדם
רקמה	צוואר הרחם
מחלה	קרצינומה
מילים נרדפות	HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b, HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP

גיל	30 שנה
מגדר	נקבה
מוצא אתני	אפרו-אמריקאי
מורפולוגיה	תאים דמויי אפיתל בצורת אבן פסיפס
תכונות צמיחה	שכבה אחת, דבוקה

ציטוט	HK EGFP-Kleisin-beta (מספר קטלוגי Cytion 300674)
רמת בטיחות ביולוגית	1
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	CVCL_1D64
מפקיד	מעבדת אלנברג (EMBL)
סטטוס GMO	GMO-S1: קו HeLa Kyoto זה מכיל מבנה EGFP-kleisin-beta למחקרים בתאים חיים של קוהסין וארכיטקטורת כרומוזומים. סיווג זה חל רק בגרמניה ועשוי להיות שונה במקומות אחרים.

ביטוי חלבון	EGFP-Kleisin-β: מיקום/גן: 1..589 / Pcmv, 619..645 / Flag-tag, 661..1368 / GFP, 1393..3206 / Kleisin Beta, 4474..5268 KanR/NeoR

תרבית ביניים	DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
תוספים	הוסף לתווך 10% FBS
חומר מפרק	אקוטאז
תת-תרבות	הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
צפיפות זריעה	1 x 10⁴ תאים/סמ^"ר
חידוש נוזלים	2 עד 3 פעמים בשבוע
התאוששות לאחר הפשרה	לאחר ההפשרה, צלחת את התאים ב-5 x 10⁴ תאים/סמ"^ר והניח לתאים להתאושש מתהליך ההקפאה ולהידבק למשך 24 שעות לפחות.
חומר הקפאה	כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
הפשרה וגידול תאים	ודא שהבקבוקון נשאר קפוא לחלוטין בעת המסירה, שכן התאים נשלחים בקרח יבש כדי לשמור על טמפרטורה אופטימלית במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, אחסן את הבקבוקון הקריוגני מיד בטמפרטורה נמוכה מ-150°C כדי להבטיח את שמירת שלמות התאים, או המשך לשלב 3 אם נדרשת תרבית מיידית. לצורך תרבית מיידית, הפשיר את הבקבוקון במהירות על ידי טבילתו באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם מים נקיים וחומר אנטי-מיקרוביאלי, תוך ערבוב עדין במשך 40-60 שניות עד שנותר גוש קרח קטן. בצע את כל השלבים הבאים בתנאים סטריליים במנדף, וחטא את בקבוקון הקריוואלי באתנול 70% לפני הפתיחה. פתח בזהירות את הבקבוקון המחוטא והעבר את תמיסת התאים לצינור צנטריפוגה בנפח 15 מ"ל המכיל 8 מ"ל של מצע תרבית בטמפרטורת החדר, תוך ערבוב עדין. סובבו את התערובת בצנטריפוגה ב-300 x g למשך 3 דקות כדי להפריד את התאים, וזרקו בזהירות את הנוזל העליון המכיל את שאריות מצע ההקפאה. השרו בעדינות את משקע התאים ב-10 מ"ל של מצע תרבית טרי. עבור תאים נצמדים, חלקו את התמיסה בין שני צלוחיות תרבית T25; עבור תרבויות תמיסה, העבירו את כל המצע לצלוחית T25 אחת כדי לקדם אינטראקציה וצמיחה יעילות של התאים. הקפידו על פרוטוקולי תת-תרבות קבועים להמשך צמיחה ותחזוקה של קו התאים, כדי להבטיח תוצאות ניסוי אמינות.
אטמוספירת דגירה	37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.
ציפוי בקבוק	אף אחד
הליך ההקפאה	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי משלוח	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי אחסון	לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

עקרות	זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה. כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

מוצרים קשורים

תאי HK EB3-EGFP

אורגניזם	אדם
רקמה	צוואר הרחם
מחלה	קרצינומה

‏800.00 ‏$*

תאי HK EGFP-אלפא-טובולין/H2B-mCherry

אורגניזם	אדם
רקמה	צוואר הרחם
מחלה	קרצינומה

‏800.00 ‏$*

תאי HK EGFP-H2B

אורגניזם	אדם
רקמה	צוואר הרחם
מחלה	קרצינומה

‏800.00 ‏$*

תאי HK EGFP-Cap-D2

אורגניזם	אדם
רקמה	צוואר הרחם
מחלה	קרצינומה

‏800.00 ‏$*

תאי HK EGFP-LaminB1/H2B-mCherry

אורגניזם	אדם
רקמה	צוואר הרחם
מחלה	קרצינומה

‏800.00 ‏$*

תאי HK Mad2-LAP/H2B-mCherry

אורגניזם	אדם
רקמה	צוואר הרחם
מחלה	קרצינומה

‏800.00 ‏$*

תאי HK EGFP-LaminA/H2B-mCherry

אורגניזם	אדם
רקמה	צוואר הרחם
מחלה	קרצינומה

‏800.00 ‏$*

תאי HK EGFP-Kleisin-beta

מידע כללי

מאפיינים

נתונים רגולטוריים

נתונים ביו-מולקולריים

טיפול

בקרת איכות וניתוח מולקולרי