תאי HK-CRISPR-Nup188-mEGFP

‏800.00 ‏$*

המוצרים נשלחים קפואים בקרח יבש בתוך צינורות קריוגניים. כל צינור קריוגני מכיל בדרך כלל 3 × 10 ⁶ תאים עבור קווי תאים נצמדים או 5 × 10⁶ תאים עבור קווי תאים בתמיסה (לפרטים נוספים, עיין בתעודת ה-CoA של האצווה).

מחירים לא כולל מיסים בתוספת עלויות משלוח

cryovial

מספר מוצר: 300657

גיליון בטיחות

גיליון מוצר

תעודת ניתוח (CoA)

תיאור	HK-CRISPR-Nup188-mEGFP הוא קו תאים Hela Kyoto שעבר שינוי גנטי. הוא משתמש בטכנולוגיית CRISPR/Cas9 כדי לשלב mEGFP (חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר מונומרי) בלוקוס Nup188. Nup188 הוא חלבון נוקליופורין מרכזי המעורב במתחם הנקבוביות הגרעיניות, החיוני להעברת מולקולות בין הגרעין לציטופלסמה. תיוג mEGFP מאפשר הדמיה בזמן אמת של Nup188, ומסייע בחקר הדינמיקה והתפקוד של מתחם הנקבוביות הגרעיניות. קו תאים זה שימושי במיוחד לחוקרים המתמקדים בהובלה גרעינית ובביולוגיה של מורכבות הנקבוביות הגרעיניות. תיוגו הזוהר מאפשר תצפית ב-Nup188 בתנאים שונים, כולל טיפולים תרופתיים ושינויים גנטיים. היישומים כוללים סינון תוכן גבוה, הדמיית תאים חיים וטכניקות אחרות המבוססות על זוהר, המספקות תובנות חשובות על הובלה גרעינית-ציטופלזמית ושלמות מעטפת הגרעין.
אורגניזם	אדם
רקמה	צוואר הרחם
מחלה	אדנוקרצינומה
אתר גרורתי	Not applicable (HeLa Kyoto derivative; primary tumor site is endocervix)
יישומים	Nuclear pore complex (NPC) biology; nucleocytoplasmic transport; Nup188 dynamics and function; live-cell fluorescence imaging of nuclear envelope; high-content screening; CRISPR knock-in validation studies; nuclear transport inhibitor evaluation

גיל	30 שנה
מגדר	נקבה
מוצא אתני	אפרו-אמריקאי
מורפולוגיה	תאים דמויי אפיתל בצורת אבן פסיפס
סוג התא	Epithelial cells
תכונות צמיחה	דבק

ציטוט	HK-CRISPR-Nup188-mEGFP (מספר קטלוגי Cytion 300657)
רמת בטיחות ביולוגית	1
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	Not assigned (HK-CRISPR-Nup188-mEGFP is a CRISPR-modified HeLa Kyoto derivative; parental HeLa Kyoto CVCL_1922)
מפקיד	מעבדת אלנברג (EMBL)
סטטוס GMO	GMO-S1: קו HeLa Kyoto זה מכיל CRISPR knock-in של mEGFP בלוקוס Nup188, המאפשר הדמיה של הדינמיקה של שלד הנקבוביות הגרעיניות. סיווג זה חל רק בגרמניה ועשוי להיות שונה במקומות אחרים.

ביטוי חלבון	Nup188, mEGFP-tag

תרבית ביניים	DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
תוספים	הוסף לתווך 10% FBS
חומר מפרק	אקוטאז
תת-תרבות	הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
חומר הקפאה	כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
הפשרה וגידול תאים	ודא שהבקבוקון נשאר קפוא לחלוטין בעת המסירה, שכן התאים נשלחים בקרח יבש כדי לשמור על טמפרטורה אופטימלית במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, אחסן את הבקבוקון הקריוגני מיד בטמפרטורה נמוכה מ-150°C כדי להבטיח את שמירת שלמות התאים, או המשך לשלב 3 אם נדרשת תרבית מיידית. לצורך תרבית מיידית, הפשיר את הבקבוקון במהירות על ידי טבילתו באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם מים נקיים וחומר אנטי-מיקרוביאלי, תוך ערבוב עדין במשך 40-60 שניות עד שנותר גוש קרח קטן. בצע את כל השלבים הבאים בתנאים סטריליים במנדף, וחטא את בקבוקון הקריוואלי באתנול 70% לפני הפתיחה. פתח בזהירות את הבקבוקון המחוטא והעבר את תמיסת התאים לצינור צנטריפוגה בנפח 15 מ"ל המכיל 8 מ"ל של מצע תרבית בטמפרטורת החדר, תוך ערבוב עדין. סובבו את התערובת בצנטריפוגה ב-300 x g למשך 3 דקות כדי להפריד את התאים, וזרקו בזהירות את הנוזל העליון המכיל את שאריות מצע ההקפאה. השרו בעדינות את משקע התאים ב-10 מ"ל של מצע תרבית טרי. עבור תאים נצמדים, חלקו את התמיסה בין שני צלוחיות תרבית T25; עבור תרבויות תמיסה, העבירו את כל המצע לצלוחית T25 אחת כדי לקדם אינטראקציה וצמיחה יעילות של התאים. הקפידו על פרוטוקולי תת-תרבות קבועים להמשך צמיחה ותחזוקה של קו התאים, כדי להבטיח תוצאות ניסוי אמינות.
אטמוספירת דגירה	37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.
ציפוי בקבוק	אף אחד
הליך ההקפאה	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי משלוח	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי אחסון	לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

עקרות	זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה. כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

מספר לוט	סוג התעודה	תאריך	מספר קטלוגי
300657-171123	תעודת ניתוח	23. May. 2025	300657

תאי HK-CRISPR-Nup188-mEGFP

מידע כללי

מאפיינים

נתונים רגולטוריים

נתונים ביו-מולקולריים

טיפול

בקרת איכות / פרופיל גנטי / HLA

תעודת ניתוח (CoA)