תאי HEK293-Rpn11-HTBH
מידע כללי
| תיאור | תאי HEK293 יציבים - Rpn11-HTBH הם נגזרת שעברה טרנספקציה יציבה של קו התאים HEK293 (Human Embryonic Kidney 293), שהונדסו לביטוי גרסה מתויגת של Rpn11 (הידוע גם כ-PSMD14 או POH1), יחידת המשנה של הדוביקוויטינאז במכלול מכסה הפרוטאזום 26S. Rpn11 הוא דה-אוביקוויטינאז בעל תחום JAMM התלוי ב-Zn²⁺, המסיר שרשראות אוביקוויטין מסובסטרטים הקשורים לפרוטאזום במהלך פירוק פרוטאזומי. התג HTBH (הקס-היסטידין-TEV-פפטיד מקבל ביוטין-הקס-היסטידין) מאפשר טיהור על בסיס זיקה של קומפלקסים המכילים Rpn11 בתנאים טבעיים, מה שהופך את קו התאים הזה למתאים במיוחד לטיהור קומפלקסי פרוטאזום ולמחקרי אינטראקטום. קו תאים זה מתאים למחקרים על ביולוגיית הפרוטאזום 26S, ויסות מסלול האוביקוויטין-פרוטאזום (UPS), תפקוד Rpn11/PSMD14 בבקרת איכות החלבונים, הרכבת הפרוטאזום ודינמיקתו, ומנגנון הפעולה של מעכבי הפרוטאזום. היא משמשת גם לטיהור זיקה של קומפלקסי פרוטאזום טבעיים וכמודל לחקר הביולוגיה של דה-אוביקוויטינאז בהקשר של הפרוטאזום. מערכת התיוג HTBH מאפשרת טיהור קפדני ביותר של קומפלקסים ביוטיניליים באמצעות שיטת "פול-דאון" (pulldowns) המבוססת על סטרפטאווידין. |
|---|---|
| אורגניזם | אדם |
| רקמה | כליה |
| מחלה | כליה עוברית שעברה שינוי/הונצחה (רקע HEK293; טרנסגן Rpn11-HTBH) |
| יישומים | ביולוגיה של הפרוטאזום 26S; תפקוד Rpn11/PSMD14; מסלול האוביקוויטין-פרוטאזום; טיהור קומפלקס הפרוטאזום; ביולוגיה של דה-אוביקוויטינאז; טיהור על בסיס זיקה באמצעות תווית HTBH; מחקרים על האינטראקטום של הפרוטאזום |
מאפיינים
| מורפולוגיה | דמוי אפיתל |
|---|---|
| סוג התא | תאי אפיתל |
| תכונות צמיחה | דבק |
נתונים רגולטוריים
| ציטוט | תאי HEK293 יציבים - Rpn11-HTBH (מספר קטלוג Cytion 305719) |
|---|---|
| רמת בטיחות ביולוגית | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| סטטוס GMO | GMO-S1: נגזרת HEK293 זו מכילה קלטת ביטוי Rpn11-HTBH המשולבת באופן יציב (Rpn11/PSMD14 המסומן בהקסאהיסטידין-TEV-פפטיד מקבל ביוטין-הקסאהיסטידין). סיווג זה חל אך ורק בגרמניה ועשוי להיות שונה במקומות אחרים. |
נתונים ביו-מולקולריים
טיפול
| תרבית ביניים | DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a) |
|---|---|
| תוספים | הוסף לתווך 10% FBS |
| חומר מפרק | רוב התאים מתנתקים ב-PBS; במידת הצורך, יש להוסיף Accutase למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר |
| זמן הכפלה | כ-24 עד 36 שעות |
| תת-תרבות | יש להסיר את התרבית מהמדיום, לשטוף אותה ב-PBS ללא סידן ומגנזיום, לכסות ב-Accutase, להניח באינקובטור למשך 8–10 דקות בטמפרטורת החדר, להחזיר את התאים לתמיסה במדיום, לסובב בצנטריפוגה ב-300×g למשך 3 דקות, לשפוך את הנוזל העליון, ולשתול מחדש במדיום טרי. |
| יחס פיצול | 1 עד 10 |
| צפיפות זריעה | 2 עד 4 × 10⁴ תאים/סמ"ר |
| חידוש נוזלים | כל 2-3 ימים |
| חומר הקפאה | כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה. |
| הפשרה וגידול תאים |
|
| אטמוספירת דגירה | 37°C, 5%CO2, אווירה לחה. |
| תנאי משלוח | שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים. |
| תנאי אחסון | לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי. |
בקרת איכות וניתוח מולקולרי
תעודת ניתוח (CoA)
| מספר לוט | סוג התעודה | תאריך | מספר קטלוגי |
|---|---|---|---|
| 305719-040526 | תעודת ניתוח | 24. Jun. 2026 | 305719 |