תאי HCT116-Luc

HCT 116-Luc הוא נגזרת של קו התאים HCT 116, המקורו בסרטן המעי הגס האנושי, המבטאת לוקיפרז. הקו נוצר באמצעות טרנסדוקציה עם קונסטרוקט המקודד ללוציפרז של גחלילית (Photinus pyralis) יחד עם קסטת עמידות לפורומיצין (pac), כך שהביטוי של הרפורט הוא קונסטיטטיבי ולא תלוי במסלול. לפיכך, האות הביולומינסצנטי פרופורציונלי למספר התאים החיים, מה שהופך את המודל למתאים למעקב לא פולשני אחר עומס הגידול in vivo ולכימות מהיר, המבוסס על צלחות, של חיוניות התאים והתפשטותם in vitro.

קו ה-HCT 116 ההורי שומר על מאפייניו המגדירים בגרסה הנגזרת הזו, כולל חוסר יציבות במיקרו-סאטליטים עם תיקון לא תקין של אי-התאמות ב-DNA, TP53 מסוג הבר, וקריוטיפ כמעט דיפלואידי. הרקע המוטציוני שלו כולל KRAS p.Gly13Asp, PIK3CA p.His1047Arg, מוטציה הטרוזיגוטית ב-CTNNB1 p.Ser45del המייצבת את β-catenin ומניעה איתות Wnt קבוע, ומוטציות הומוזיגוטיות מסוג frameshift ב-TGFBR2 וב-ACVR2A, האופייניות לגידולים קולורקטליים עם MSI. מופיעים וריאנטים נוספים ב-CDKN2A, EP300, BRCA2 ו-PPM1D. שילוב יציב של הרפורט מאפשר הדמיה לאורך זמן של שתלים אורתוטופיים ותת-עוריים באותו בעל חיים, מה שמצמצם את גודל הקוהורטות ומבטל את הצורך בנקודות סיום סופיות בכל נקודת זמן. נעשה שימוש בברירה באמצעות פו-רומיצין לשמירה על הגן המהונדס במהלך התרבות שגרתית.

קו זה נמצא בשימוש נרחב באונקולוגיה פרה-קלינית, במחקרי יעילות של חומרים ציטוטוקסיים וממוקדים, במודלים של גרורות ו"הומינג" של גידולים, ובסינון ציטוטוקסיות בתפוקה גבוהה, שבו קריאה זוהרת מציעה טווח דינמי רחב יותר מאשר בדיקות קולורימטריות. מכיוון שביטוי לוקיפראז אינו נתון לשליטה הניתנת להשראה, האות מדווח על מספר התאים ועל מצבם המטבולי ולא על פעילותו של מסלול ספציפי; לפיכך, תרכובות המשנות את רמות ה-ATP או את חילוף החומרים התאי יכולות להשפיע על הזוהר ללא תלות בהרג התאים. מומלץ לבצע בדיקות חיוניות אורתוגונליות לאישור, ויש לקחת בחשבון את הרקע של חוסר תקינות בתיקון אי-התאמות ב-HCT 116 בעת פרשנות התגובות לחומרים הפוגעים ב-DNA ולטיפולים אימונומודולטוריים.