תאי HCC366
מידע כללי
| תיאור | HCC366 הוא קו תאים של קרצינומה אדנו-סקוואמוסית של הריאה האנושית, שהופק מהצטברות נוזל פלאורלי ממאיר של מטופלת אירופית בת 80 במרכז הסרטן "המון" (Hamon Cancer Center), במרכז הרפואי UT Southwestern. קרצינומה אדנוסקוואמוסית היא תת-סוג היסטולוגי מעורב נדיר של סרטן ריאה שאינו קטן-תאי (NSCLC), המשלב מאפיינים של אדנוקרצינומה ושל קרצינומה של תאי קשקש. HCC366 נכלל בפאנלים של Cancer Dependency Map (DepMap), CCLE, קווי תאים COSMIC, ו-MD Anderson Cell Lines Project. הקו נושא מוטציה הומוזיגוטית TP53 p.Tyr220Cys (מוטציה מבנית של תחום קישור ה-DNA) ומוטציה הטרוזיגוטית ATM p.Pro534Ala. הוא אינו נושא מוטציות מדרבנות ב-KRAS, EGFR או STK11, ומפגין יציבות מיקרו-סאטליטית (MSS). זמן הכפלה הוא כ-60–70 שעות. HCC366 מתאים למחקר בנושא NSCLC, ובפרט למחקרים העוסקים בביולוגיה של קרצינומה אדנוסקוואמוטית של הריאה, תחום שעדיין לא נחקר מספיק בהשוואה לתתי-סוגים של אדנוקרצינומה טהורה או קרצינומה של תאי קשקש. היישומים העיקריים כוללים: מחקרים על מוטציות של רווח תפקוד ב-TP53; תגובה לנזק ב-DNA בתיווך ATM; בדיקות רגישות ועמידות לכימותרפיה (ציספלטין, פקליטקסל, גמציטאבין); הערכת תרופות ממוקדות; פרופיל רגישות לתרופות במסגרת DepMap ו-CCLE; גילוי סמנים ביולוגיים ל-NSCLC בהיסטולוגיה מעורבת; גנומיקה השוואתית; ופרופיל פרוטאומי/טרנסקריפטומי. HCC366 תרם גם למחקרים בתחום הביולוגיה התאית של סרטן הריאה, לרבות מנגנוני התרבות, נדידה ופלישה הרלוונטיים למחלות פלאורליות ממאירות. |
|---|---|
| אורגניזם | אדם |
| רקמה | ריאה |
| מחלה | סרטן ריאות תאים לא קטנים |
| אתר גרורתי | הצטברות נוזל פלאורלי ממאיר (אתר לקיחת הדגימה) |
| יישומים | מחקר בנושא NSCLC; הביולוגיה של קרצינומה אדנוסקוואמוסית של הריאה; מחקרים על רווח תפקוד של TP53 p.Tyr220Cys; תגובת ATM לנזק ב-DNA; רגישות לכימותרפיה (ציספלטין, פקליטקסל, גמציטאבין); פרופיל רגישות לתרופות באמצעות DepMap/CCLE; גילוי סמנים ביולוגיים; גנומיקה השוואתית של NSCLC; ביולוגיה של מחלות פלאורליות ממאירות |
| מילים נרדפות | HCC-366, HCC0366, מרכז הסרטן חמון 366 |
מאפיינים
| גיל | 80 שנים |
|---|---|
| מגדר | נקבה |
| מוצא אתני | אירופאי |
| מורפולוגיה | דמוי אפיתל |
| סוג התא | תאי אפיתל |
| תכונות צמיחה | שכבה אחת, דבוקה |
נתונים רגולטוריים
| ציטוט | HCC366 (מספר קטלוגי Cytion 302155) |
|---|---|
| רמת בטיחות ביולוגית | 1 |
| NCBI_TaxID | 9606 |
| CellosaurusAccession | CVCL_2059 |
| סטטוס GMO | ללא שינוי גנטי; קו תאים מסוג NSCLC מסוג "wildtype" עם מוטציות סומטיות אנדוגניות (TP53 p.Tyr220Cys הומוזיגוטי; ATM p.Pro534Ala הטרוזיגוטי) |
נתונים ביו-מולקולריים
| סטטוס MSI | MSS |
|---|---|
| פרופיל מוטציוני | TP53 p.Tyr220Cys (c.659A>G) הומוזיגוטי; ATM p.Pro534Ala (c.1600C>G) הטרוזיגוטי |
טיפול
| תרבית ביניים | RPMI 1640, w: 2.0 mM גלוטמין יציב, w: 2.0 g/L NaHCO3 (מספר קטלוגי של Cytion 820700a) |
|---|---|
| תוספים | הוסף לתווך 10% FBS מנוטרל בחום |
| חומר מפרק | אקוטאז |
| זמן הכפלה | כ-60 עד 70 שעות |
| תת-תרבות | הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי. |
| יחס פיצול | 1 עד 5 |
| צפיפות זריעה | 1 עד 3 × 10⁴ תאים/סמ"ר |
| חידוש נוזלים | 2 עד 3 פעמים בשבוע |
| התאוששות לאחר הפשרה | לאחר ההפשרה, יש להניח את התאים בצפיפות של 5 × 10⁴ תאים/סמ"ר ולהמתין לפחות 24 שעות עד שהן ייקלטו לפני החלפת התווך הראשונה. |
| חומר הקפאה | כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה. |
| הפשרה וגידול תאים |
|
| אטמוספירת דגירה | 37°C, 5%CO2, אווירה לחה. |
| ציפוי בקבוק | אף אחד |
| הליך ההקפאה | שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים. |
| תנאי משלוח | שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים. |
| תנאי אחסון | לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי. |
בקרת איכות וניתוח מולקולרי
| עקרות | זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה. כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות. |
|---|
תעודת ניתוח (CoA)
| מספר לוט | סוג התעודה | תאריך | מספר קטלוגי |
|---|---|---|---|
| 302155-071024 | תעודת ניתוח | 23. May. 2025 | 302155 |