תאי B-LCL-CDG5

‏800.00 ‏$*

המוצרים נשלחים קפואים בקרח יבש בתוך צינורות קריוגניים. כל צינור קריוגני מכיל בדרך כלל 3 × 10 ⁶ תאים עבור קווי תאים נצמדים או 5 × 10⁶ תאים עבור קווי תאים בתמיסה (לפרטים נוספים, עיין בתעודת ה-CoA של האצווה).

מחירים לא כולל מיסים בתוספת עלויות משלוח

מבחנה קריוגנית

מספר מוצר: 302016

גיליון בטיחות

גיליון מוצר

תיאור	B-LCL-CDG5 הוא קו תאים של לימפוציטים B שעברו שינוי על ידי EBV, שמקורו בחולה עם PMM2-CDG, הפרעה מולדת בגליקוזילציה (CDG) הנגרמת על ידי מוטציות בגן PMM2. הפרעה זו פוגעת בסינתזה התקינה ובקשר של מבני גליקאן לגליקופרוטאינים וגליקוליפידים, ומשפיעה על מערכות איברים רבות. החוסר בפוספומנומוטאז 2 (PMM2) משבש את ההמרה של מנוז-6-פוספט למנוז-1-פוספט, שלב קריטי בגליקוזילציה, מה שמוביל לפגמים בתפקוד התאי ולסיבוכים מערכתיים. כקו תאים B שהונצח על ידי EBV, B-LCL-CDG5 משמש מודל חיוני לחקר ההשפעות הביוכימיות והמולקולריות של מוטציות PMM2. קו תאים זה מאפשר לחוקרים לחקור פגמים בגליקוזילציה, פעילות אנזימטית של PMM2 וההשלכות התאיות של גליקוזילציה לקויה. בנוסף, הוא מספק פלטפורמה לבחינת גישות טיפוליות פוטנציאליות, כגון חלבונים מלווים פרמקולוגיים, טיפולים לשיפור פעילות אנזימטית או אסטרטגיות לתוספת מצע. B-LCL-CDG5, בשילוב עם קווי תאים אחרים שמקורם בחולי CDG, מסייע בקידום ההבנה שלנו לגבי PMM2-CDG ובפיתוח אפשרויות טיפול ממוקדות.
אורגניזם	אדם
רקמה	דם היקפי
מחלה	קו תאים לימפובלסטואידיים מסוג B שעברו טרנספורמציה על ידי נגיף EBV (B-LCL); PMM2-CDG (הפרעה מולדת בגליקוזילציה, שמקורה בחולה)
אתר גרורתי	לא רלוונטי (B-LCL שעבר טרנספורמציה על ידי EBV; ללא גרורות)
יישומים	גנוטיפ של השפעות CDG בתאי חיסון, בדיקות תפקודיות (למשל, אנטיגנים על פני תאי B), בדיקות של תרופות ציטוטוקסיות. ניתוח מוטציות, ניתוח מנגנוני אפופטוזיס, סיווג HLA, השפעת גליקוזילציה פגומה של גליקופרוטאינים תאיים שונים על תפקודים מגוונים.

מגדר	נקבה
מוצא אתני	קווקזי
מורפולוגיה	תאים עגולים
סוג התא	לימפוציט B
תכונות צמיחה	מתלה, אשכול

ציטוט	B-LCL-CDG5 (מספר קטלוגי Cytion 302016)
רמת בטיחות ביולוגית	2
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	לא הוקצה
סטטוס GMO	GMO-S2: תאי B-LCL אלה מכילים אפיזום של נגיף EBV המוחזק באופן יציב, המקודד לגנים של השלב הרדום של הנגיף (EBNA-1/-2/-3, LMP-1/-2). EBV הוא פתוגן מקבוצת סיכון 2; נדרשת רמת אבטחה BSL-2. סיווג זה חל בגרמניה; התקנות עשויות להיות שונות במקומות אחרים.

נגיפים	טרנספורמנט: EBV

תרבית ביניים	RPMI 1640, w: 2.0 mM גלוטמין יציב, w: 2.0 g/L NaHCO3 (מספר קטלוגי של Cytion 820700a)
תוספים	הוסף לתווך 10% FBS מנוטרל בחום
תת-תרבות	שמרו על התרבויות על ידי הוספה או החלפה תקופתית של המצע. התחילו את התרבויות בצפיפות של 2 x 10⁵ תאים/מ"ל ושמרו על ריכוז התאים בטווח של 1 x 10⁵ עד 5 x 10⁵ תאים/מ"ל לצורך צמיחה מיטבית.
חידוש נוזלים	ברגע שהצבע הבינוני הפך לצהוב
התאוששות לאחר הפשרה	בינוני
חומר הקפאה	כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
הפשרה וגידול תאים	ודא שהבקבוקון נשאר קפוא לחלוטין בעת המסירה, שכן התאים נשלחים בקרח יבש כדי לשמור על טמפרטורה אופטימלית במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, אחסן את הבקבוקון הקריוגני מיד בטמפרטורה נמוכה מ-150°C כדי להבטיח את שמירת שלמות התאים, או המשך לשלב 3 אם נדרשת תרבית מיידית. לצורך תרבית מיידית, הפשיר את הבקבוקון במהירות על ידי טבילתו באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם מים נקיים וחומר אנטי-מיקרוביאלי, תוך ערבוב עדין במשך 40-60 שניות עד שנותר גוש קרח קטן. בצע את כל השלבים הבאים בתנאים סטריליים במנדף, וחטא את בקבוקון הקריוואלי באתנול 70% לפני הפתיחה. פתח בזהירות את הבקבוקון המחוטא והעבר את תמיסת התאים לצינור צנטריפוגה בנפח 15 מ"ל המכיל 8 מ"ל של מצע תרבית בטמפרטורת החדר, תוך ערבוב עדין. סובבו את התערובת בצנטריפוגה ב-300 x g למשך 3 דקות כדי להפריד את התאים, וזרקו בזהירות את הנוזל העליון המכיל את שאריות מצע ההקפאה. השרו בעדינות את משקע התאים ב-10 מ"ל של מצע תרבית טרי. עבור תאים נצמדים, חלקו את התמיסה בין שני צלוחיות תרבית T25; עבור תרבויות תמיסה, העבירו את כל המצע לצלוחית T25 אחת כדי לקדם אינטראקציה וצמיחה יעילות של התאים. הקפידו על פרוטוקולי תת-תרבות קבועים להמשך צמיחה ותחזוקה של קו התאים, כדי להבטיח תוצאות ניסוי אמינות.
אטמוספירת דגירה	37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.
ציפוי בקבוק	אף אחד
הליך ההקפאה	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי משלוח	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי אחסון	לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

עקרות	זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה. כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

תאי B-LCL-CDG5

מידע כללי

מאפיינים

נתונים רגולטוריים

נתונים ביו-מולקולריים

טיפול

בקרת איכות וניתוח מולקולרי