תאי B-LCL-CDG3

‏800.00 ‏$*

המוצרים נשלחים קפואים בקרח יבש בתוך צינורות קריוגניים. כל צינור קריוגני מכיל בדרך כלל 3 × 10 ⁶ תאים עבור קווי תאים נצמדים או 5 × 10⁶ תאים עבור קווי תאים בתמיסה (לפרטים נוספים, עיין בתעודת ה-CoA של האצווה).

מחירים לא כולל מיסים בתוספת עלויות משלוח

cryovial

מספר מוצר: 302014

גיליון בטיחות

גיליון מוצר

תיאור	B-LCL-CDG3 הוא קו תאים של לימפוציטים B שעברו שינוי על ידי EBV, שמקורו בחולה עם PMM2-CDG, הפרעה מולדת בגליקוזילציה (CDG) הנגרמת על ידי מוטציות בגן PMM2. PMM2 מקודד לפוספומנומוטאז 2, אנזים מפתח במסלול N-גליקוזילציה, האחראי להמרת מנוז-6-פוספט למנוז-1-פוספט. מחסור ב-PMM2 גורם לפגיעה בגליקוזילציה של גליקופרוטאינים וגליקוליפידים רבים, מה שמוביל למגוון רחב של תופעות קליניות, כולל תפקוד לקוי של מערכת העצבים, הכבד והמערכת האנדוקרינית. כקו תאים B שהונצח על ידי EBV, B-LCL-CDG3 משמש כמודל חשוב במבחנה לחקר ההשפעות המולקולריות של מוטציות PMM2. קו תאים זה יכול לשמש לניתוח פגמים בגליקוזילציה, לחקר פעילות האנזים PMM2 ולבחינת אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות, כגון טיפולים להגברת פעילות האנזים או תוספת מצע. B-LCL-CDG3, יחד עם מודלים תאיים אחרים שמקורם בחולי CDG, תורם לקידום המחקר על הפתופיזיולוגיה של CDG ופיתוח טיפולים.
אורגניזם	אדם
רקמה	דם היקפי
מחלה	הפרעות מולדות בגליקוזילציה
אתר גרורתי	לא רלוונטי (B-LCL שעבר טרנספורמציה על ידי EBV; ללא גרורות)
יישומים	גנוטיפ של השפעות CDG בתאי חיסון, בדיקות תפקודיות (למשל, אנטיגנים על פני תאי B), בדיקות של תרופות ציטוטוקסיות. ניתוח מוטציות, ניתוח מנגנוני אפופטוזיס, סיווג HLA, השפעת גליקוזילציה פגומה של גליקופרוטאינים תאיים שונים על תפקודים מגוונים.

מגדר	נקבה
מוצא אתני	קווקזי
מורפולוגיה	תאים עגולים
סוג התא	לימפוציט B
תכונות צמיחה	מתלה, אשכול

ציטוט	B-LCL-CDG3 (מספר קטלוגי Cytion 302014)
רמת בטיחות ביולוגית	2
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	לא הוקצה
סטטוס GMO	GMO-S2: תאי B-LCL אלה מכילים אפיזום של נגיף EBV המוחזק באופן יציב, המקודד לגנים של השלב הרדום הנגיפי (EBNA-1/-2/-3, LMP-1/-2). EBV מסווג כפתוגן מקבוצת סיכון 2; נדרשת רמת בטיחות BSL-2. סיווג זה חל בגרמניה; התקנות עשויות להיות שונות במקומות אחרים.

נגיפים	טרנספורמנט: EBV

תרבית ביניים	RPMI 1640, w: 2.0 mM גלוטמין יציב, w: 2.0 g/L NaHCO3 (מספר קטלוגי של Cytion 820700a)
תוספים	הוסף לתווך 10% FBS מנוטרל בחום
תת-תרבות	שמרו על התרבויות על ידי הוספה או החלפה תקופתית של המצע. התחילו את התרבויות בצפיפות של 2 x 10⁵ תאים/מ"ל ושמרו על ריכוז התאים בטווח של 1 x 10⁵ עד 5 x 10⁵ תאים/מ"ל לצורך צמיחה מיטבית.
חידוש נוזלים	ברגע שהצבע הבינוני הפך לצהוב
התאוששות לאחר הפשרה	בינוני
חומר הקפאה	כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
הפשרה וגידול תאים	ודא שהבקבוקון נשאר קפוא לחלוטין בעת המסירה, שכן התאים נשלחים בקרח יבש כדי לשמור על טמפרטורה אופטימלית במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, אחסן את הבקבוקון הקריוגני מיד בטמפרטורה נמוכה מ-150°C כדי להבטיח את שמירת שלמות התאים, או המשך לשלב 3 אם נדרשת תרבית מיידית. לצורך תרבית מיידית, הפשיר את הבקבוקון במהירות על ידי טבילתו באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם מים נקיים וחומר אנטי-מיקרוביאלי, תוך ערבוב עדין במשך 40-60 שניות עד שנותר גוש קרח קטן. בצע את כל השלבים הבאים בתנאים סטריליים במנדף, וחטא את בקבוקון הקריוואלי באתנול 70% לפני הפתיחה. פתח בזהירות את הבקבוקון המחוטא והעבר את תמיסת התאים לצינור צנטריפוגה בנפח 15 מ"ל המכיל 8 מ"ל של מצע תרבית בטמפרטורת החדר, תוך ערבוב עדין. סובבו את התערובת בצנטריפוגה ב-300 x g למשך 3 דקות כדי להפריד את התאים, וזרקו בזהירות את הנוזל העליון המכיל את שאריות מצע ההקפאה. השרו בעדינות את משקע התאים ב-10 מ"ל של מצע תרבית טרי. עבור תאים נצמדים, חלקו את התמיסה בין שני צלוחיות תרבית T25; עבור תרבויות תמיסה, העבירו את כל המצע לצלוחית T25 אחת כדי לקדם אינטראקציה וצמיחה יעילות של התאים. הקפידו על פרוטוקולי תת-תרבות קבועים להמשך צמיחה ותחזוקה של קו התאים, כדי להבטיח תוצאות ניסוי אמינות.
אטמוספירת דגירה	37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.
ציפוי בקבוק	אף אחד
הליך ההקפאה	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי משלוח	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי אחסון	לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

עקרות	זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה. כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

תאי B-LCL-CDG3

מידע כללי

מאפיינים

נתונים רגולטוריים

נתונים ביו-מולקולריים

טיפול

בקרת איכות וניתוח מולקולרי