תאי B-LCL-CDG1

‏800.00 ‏$*

המוצרים נשלחים קפואים בקרח יבש בתוך צינורות קריוגניים. כל צינור קריוגני מכיל בדרך כלל 3 × 10 ⁶ תאים עבור קווי תאים נצמדים או 5 × 10⁶ תאים עבור קווי תאים בתמיסה (לפרטים נוספים, עיין בתעודת ה-CoA של האצווה).

מחירים לא כולל מיסים בתוספת עלויות משלוח

cryovial

מספר מוצר: 302012

גיליון בטיחות

גיליון מוצר

תיאור	B-LCL-CDG1 הוא קו תאים של לימפוציטים B שעברו שינוי EBV, שמקורו בחולה שאובחן עם PMM2-CDG, הפרעה מולדת בגליקוזילציה (CDG). הפרעה מטבולית נדירה זו נובעת ממוטציות בגן PMM2, המקודד לפוספומנומוטאז 2 (PMM2), אנזים חיוני במסלול הגליקוזילציה. מוטציות ב-PMM2 משבשות את הסינתזה של שרשראות אוליגוסכרידים גליקוזילציה, מה שמוביל לגליקוזילציה פגומה של גליקופרוטאינים וגלוקוספינגוליפידים שונים ברקמות ובדם. ההפרעה מאופיינת בתופעות רב-מערכתיות, המשפיעות לעתים קרובות על תפקודים נוירולוגיים, כבדיים ואנדוקריניים. כקו תאים לימפוציטואידיים שעברו טרנספורמציה על ידי EBV, B-LCL-CDG1 מספק מודל חשוב במבחנה לחקר ההשלכות המולקולריות והתאיות של מחסור ב-PMM2. קו תאים זה יכול לשמש לחקר פגמים בגליקוזילציה, פעילות האנזים PMM2 והתערבויות טיפוליות פוטנציאליות, כולל תיקון גנים ותוספת מצעים. B-LCL-CDG1, יחד עם קווי תאים אחרים שמקורם בחולי CDG, משמש כמשאב חיוני להבנת הפתופיזיולוגיה של CDG ולהערכת אסטרטגיות טיפול חדשות להפרעות אלה.
אורגניזם	אדם
רקמה	דם היקפי
מחלה	הפרעות מולדות בגליקוזילציה
אתר גרורתי	לא רלוונטי (B-LCL שעבר טרנספורמציה על ידי EBV; ללא גרורות)
יישומים	גנוטיפ של השפעות CDG בתאי חיסון. בדיקות תפקודיות (למשל, אנטיגנים על פני תאי B). בדיקות של תרופות ציטוטוקסיות. ניתוח מוטציות. ניתוח מנגנוני אפופטוזיס. סיווג HLA. השפעת גליקוזילציה פגומה של גליקופרוטאינים תאיים שונים על תפקודים מגוונים.

מגדר	נקבה
מוצא אתני	קווקזי
מורפולוגיה	תאים עגולים
סוג התא	לימפוציט B
תכונות צמיחה	מתלה, אשכול

ציטוט	B-LCL-CDG1 (מספר קטלוגי Cytion 302012)
רמת בטיחות ביולוגית	2
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	לא הוקצה
סטטוס GMO	GMO-S2: תאי B-LCL אלה מכילים אפיזום של נגיף EBV המוחזק באופן יציב, המקודד לגנים של השלב הרדום של הנגיף (EBNA-1/-2/-3, LMP-1/-2). EBV מסווג כפתוגן מקבוצת סיכון 2; נדרשת רמת אבטחה BSL-2. סיווג זה חל בגרמניה; התקנות עשויות להיות שונות במקומות אחרים.

נגיפים	טרנספורמנט: EBV

תרבית ביניים	RPMI 1640, w: 2.0 mM גלוטמין יציב, w: 2.0 g/L NaHCO3 (מספר קטלוגי של Cytion 820700a)
תוספים	הוסף לתווך 10% FBS מנוטרל בחום
תת-תרבות	שמרו על התרבויות על ידי הוספה או החלפה תקופתית של המצע. התחילו את התרבויות בצפיפות של 2 x 10⁵ תאים/מ"ל ושמרו על ריכוז התאים בטווח של 1 x 10⁵ עד 5 x 10⁵ תאים/מ"ל לצורך צמיחה מיטבית.
חידוש נוזלים	ברגע שהצבע הבינוני הפך לצהוב
חומר הקפאה	כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
הפשרה וגידול תאים	ודא שהבקבוקון נשאר קפוא לחלוטין בעת המסירה, שכן התאים נשלחים בקרח יבש כדי לשמור על טמפרטורה אופטימלית במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, אחסן את הבקבוקון הקריוגני מיד בטמפרטורה נמוכה מ-150°C כדי להבטיח את שמירת שלמות התאים, או המשך לשלב 3 אם נדרשת תרבית מיידית. לצורך תרבית מיידית, הפשיר את הבקבוקון במהירות על ידי טבילתו באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם מים נקיים וחומר אנטי-מיקרוביאלי, תוך ערבוב עדין במשך 40-60 שניות עד שנותר גוש קרח קטן. בצע את כל השלבים הבאים בתנאים סטריליים במנדף, וחטא את בקבוקון הקריוואלי באתנול 70% לפני הפתיחה. פתח בזהירות את הבקבוקון המחוטא והעבר את תמיסת התאים לצינור צנטריפוגה בנפח 15 מ"ל המכיל 8 מ"ל של מצע תרבית בטמפרטורת החדר, תוך ערבוב עדין. סובבו את התערובת בצנטריפוגה ב-300 x g למשך 3 דקות כדי להפריד את התאים, וזרקו בזהירות את הנוזל העליון המכיל את שאריות מצע ההקפאה. השרו בעדינות את משקע התאים ב-10 מ"ל של מצע תרבית טרי. עבור תאים נצמדים, חלקו את התמיסה בין שני צלוחיות תרבית T25; עבור תרבויות תמיסה, העבירו את כל המצע לצלוחית T25 אחת כדי לקדם אינטראקציה וצמיחה יעילות של התאים. הקפידו על פרוטוקולי תת-תרבות קבועים להמשך צמיחה ותחזוקה של קו התאים, כדי להבטיח תוצאות ניסוי אמינות.
אטמוספירת דגירה	37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.
ציפוי בקבוק	אף אחד
הליך ההקפאה	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי משלוח	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי אחסון	לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

עקרות	זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה. כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

תאי B-LCL-CDG1

מידע כללי

מאפיינים

נתונים רגולטוריים

נתונים ביו-מולקולריים

טיפול

בקרת איכות / פרופיל גנטי / HLA