תאי A549-RFP

A549-RFP הוא נגזרת המסומנת בפלואורסצנט של קו התאים האנושי A549 של אדנוקרצינומה ריאתית, שהונדסה כך שתבטא באופן קבוע חלבון פלואורסצנטי אדום (RFP) לצורך הדמיה ומעקב בזמן אמת. קו התאים ההורי A549 הוקם מאדנוקרצינומה של הריאה שמקורה בתורם בוגר, והוא מציג מורפולוגיה אפיתלית עם מאפייני צמיחה דבקים. תאי A549 שומרים על תכונות של תאי אפיתל אלבולריים מסוג II, כולל ביטוי של ציטוקרטין ויכולת לייצר חלבונים הקשורים לסורפקטנט. הכנסת קלטת ביטוי RFP יציבה מאפשרת פלואורסצנציה רציפה מבלי לשנות באופן משמעותי את תכונות ההתפשטות והמטבוליזם הפנימיות של הקו ההורי, מה שהופך את A549-RFP למתאים למחקרי הדמיה ארוכי טווח.

אפיון תפקודי של תאי A549 במסגרת פאנלים נרחבים של תאי סרטן הראה כי גודל התא, תכולת החלבון וקצב סינתזת החלבון מתואמים באופן חיובי עם נפח התא, וכי תאים גדולים יותר נוטים להתרבות בקצב איטי יותר. בניתוחים השוואתיים, תאי A549 ממוקמים בקבוצת קווי תאי סרטן אפיתל קטנים יחסית, המתרבים במהירות רבה יותר, בניגוד לתאים גדולים יותר, הדומים יותר לתאים מזנכימליים, המציגים ביטוי גבוה יותר של וימנטין ורמות נמוכות יותר של E-cadherin. הבדלים מטבוליים ופנוטיפיים אלה רלוונטיים לפרשנות הניסויית, שכן קצב סינתזת החלבונים והזרימות המטבוליות משתנים בהתאם לגודל התא ומשפיעים על הרגישות לחומרים המכוונים להתרבות או למסלולים אנבוליים המווסתים על ידי mTOR. השינוי ל-RFP שומר על התאמתם של תאי A549 למחקרים מטבוליים ופרמקולוגיים מסוג זה, תוך שהוא מאפשר הדמיה ישירה.

A549-RFP נמצא בשימוש נרחב במערכות תרבית משותפת, במודלים של שתלים זרים אורתוטופיים ואקטופיים, ובבדיקות פלישה או גרורות שבהן תיוג פלואורסצנטי מקל על הבחנה בין תאי הגידול לרכיבי הסטרומה או המארח. הפלואורסצנציה האדומה היציבה תומכת ביישומים כגון הדמיית תאים חיים, סינון תוכן גבוה, כימות מבוסס ציטומטריית זרימה, והדמיה אופטית in vivo. כגרסה הניתנת למעקב של מודל אדנוקרצינומה ריאתית המאופיין היטב, A549-RFP מספק פלטפורמה איתנה לחקר התרבות תאי הגידול, מעבר אפיתל-מזנכימלי, תגובה לתרופות, ואינטראקציות בין הגידול לסביבתו המיקרו-סביבתית, הן בתנאי מעבדה (in vitro) והן בתנאי חיים (in vivo).

שינוי גנטי: שונה באופן יציב באמצעות העברה לנטרווירוס שאינו מסוגל לשכפל את עצמו, כדי לבטא חלבון פלואורסצנטי אדום (RFP) כגלאי; נשמר כאוכלוסייה פוליקלונלית תחת סלקציה של פורומיצין (1–5 µg/mL). רמת אבטחה S1/BSL-1.