A375-GFP

‏800.00 ‏$*

המוצרים נשלחים קפואים בקרח יבש בתוך צינורות קריוגניים. כל צינור קריוגני מכיל בדרך כלל 3 × 10 ⁶ תאים עבור קווי תאים נצמדים או 5 × 10⁶ תאים עבור קווי תאים בתמיסה (לפרטים נוספים, עיין בתעודת ה-CoA של האצווה).

מחירים לא כולל מיסים בתוספת עלויות משלוח

cryovial

מספר מוצר: 305665

גיליון בטיחות

גיליון מוצר

תעודת ניתוח (CoA)

תיאור	A375-GFP הוא וריאנט מהונדס גנטית של קו התאים A375 של מלנומה ממאירה אנושית, המבטא באופן יציב חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר (eGFP). קו התאים ההורי A375 נגזר מגידול מלנומה בעור של מטופל בוגר, והוא נמצא בשימוש נרחב כמודל למלנומה עורית, במיוחד במחקרים העוסקים באיתות BRAF אונקוגני, שכן הוא נושא את המוטציה BRAF V600E. מוטציה זו מובילה להפעלה קבועה של מסלול ה-MAPK/ERK, המניעה התרבות והישרדות, והופכת את תאי A375 לרלוונטיים ביותר לחקר טיפולים ממוקדים כגון מעכבי BRAF ו-MEK. הנגזרת המבטאת GFP שומרת על מאפיינים מולקולריים ופנוטיפיים אלה, תוך שהיא מאפשרת יישומים מבוססי פלואורסצנציה. השילוב היציב של הרפורט eGFP מאפשר הדמיה בזמן אמת של תאי A375-GFP הן במערכות in vitro והן במערכות in vivo. הדמיה פלואורסצנטית מקלה על מעקב אחר התרבות תאים, נדידה, פלישה ושינויים מורפולוגיים, כמו גם על מעקב אחר צמיחת הגידול והתפשטות גרורתית במודלים של שתלים זרים. הגרסה המשופרת של GFP מספקת בהירות ויציבות משופרות בהשוואה למבנים קודמים של GFP, ומאפשרת זיהוי רגיש אפילו במספר תאים נמוך. דבר זה הופך את A375-GFP לשימושי במיוחד בניסויי תרבית משותפת, בפלטפורמות הדמיה בעלות תוכן גבוה ובמחקרים הדורשים רזולוציה מרחבית מדויקת של התנהגות תאי הגידול. A375-GFP שומר על הפנוטיפ האגרסיבי והמתרבה של קו המלנומה ההורי, כולל תגובתיות למעכבי מסלול ה-MAPK ויכולת הפלישה והגרורות במודלים ניסיוניים. הוספת ה-GFP מרחיבה את השימושיות שלו לסינון תרופות, הדמיית תאים חיים ומחקרים על האינטראקציה בין הגידול לסביבה המיקרו-סביבתית. כמו בקווי תאים אחרים המסומנים ברפורטרים, מומלץ לאמת את יציבות הזוהר ואת עקביותו לאורך מחזורי התרבות, לצורך יישומים ניסויים ספציפיים.
אורגניזם	אדם
רקמה	רגל, עור
מחלה	מלנומה ללא מלנוציטים

גיל	54 שנים
מגדר	נקבה
מוצא אתני	קווקזי
תכונות צמיחה	דבק

ציטוט	A375-GFP (מספר קטלוגי של Cytion: 305665)
רמת בטיחות ביולוגית	1
NCBI_TaxID	9606
CellosaurusAccession	CVCL_QZ67
סטטוס GMO	GMO-S1: קו תאי מלנומה אנושי A375 זה מכיל קונסטרוקט לביטוי מוגבר של GFP המועבר באמצעות וקטור לנטוירוס לצורך הדמיה פלואורסצנטית. סיווג זה חל רק בגרמניה ועשוי להיות שונה במקומות אחרים.

ביטוי אנטיגן	ZsGreen1 (חלבון פלואורסצנטי ירוק)
פרופיל מוטציוני	מוטציה: BRAF, פשוטה, p.Val600Glu (c.1799T>A), הומוזיגוטית (מקו תאים הורי).מוטציה, CDKN2A, פשוטה, p.Glu61Ter (c.181G>T) (p.Gly75Val, c.224G>T), הומוזיגוטית (מקו תאים הורי).מוטציה, CDKN2A, פשוטה, p.Glu69Ter (c.205G>T) (p.Gly83Val, c.248G>T), הומוזיגוטית (מקו תאים הורי).מוטציה, TERT, פשוטה, c.1-146C>T (c.250C>T) (C250T), לא מוגדרת, הערה=בפרומוטור (מקו תאים הורי).

תרבית ביניים	DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
תוספים	הוסף לתווך 10% FBS
חומר מפרק	אקוטאז
תת-תרבות	הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
צפיפות זריעה	1 עד 3 x 10⁴ תאים/סמ^"ר
חידוש נוזלים	2 עד 3 פעמים בשבוע
חומר הקפאה	כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה.
הפשרה וגידול תאים	ודא שהבקבוקון נשאר קפוא לחלוטין בעת המסירה, שכן התאים נשלחים בקרח יבש כדי לשמור על טמפרטורה אופטימלית במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, אחסן את הבקבוקון הקריוגני מיד בטמפרטורה נמוכה מ-150°C כדי להבטיח את שמירת שלמות התאים, או המשך לשלב 3 אם נדרשת תרבית מיידית. לצורך תרבית מיידית, הפשיר את הבקבוקון במהירות על ידי טבילתו באמבט מים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם מים נקיים וחומר אנטי-מיקרוביאלי, תוך ערבוב עדין במשך 40-60 שניות עד שנותר גוש קרח קטן. בצע את כל השלבים הבאים בתנאים סטריליים במנדף, וחטא את בקבוקון הקריוואלי באתנול 70% לפני הפתיחה. פתח בזהירות את הבקבוקון המחוטא והעבר את תמיסת התאים לצינור צנטריפוגה בנפח 15 מ"ל המכיל 8 מ"ל של מצע תרבית בטמפרטורת החדר, תוך ערבוב עדין. סובבו את התערובת בצנטריפוגה ב-200 x g למשך 5 דקות, והיפטרו בזהירות מהנוזל העליון המכיל את מצע ההקפאה. פעל לפי ההליך המתואר תחת התאוששות לאחר הפשרה
אטמוספירת דגירה	37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.
תנאי משלוח	שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
תנאי אחסון	לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

מספר לוט	סוג התעודה	תאריך	מספר קטלוגי
305665-200426	תעודת ניתוח	24. Jun. 2026	305665

A375-GFP

מידע כללי

מאפיינים

נתונים רגולטוריים

נתונים ביו-מולקולריים

טיפול

בקרת איכות וניתוח מולקולרי

תעודת ניתוח (CoA)