HUH-1 Cells

Mraziace médium CM-1 spoločnosti Cytion je najmodernejšie kryokonzervačné médium navrhnuté na zabezpečenie najvyššej úrovne životaschopnosti a funkčnosti buniek po rozmrazení. Toto univerzálne médium je vhodné pre široké spektrum typov buniek vrátane ľudských aj živočíšnych buniek, čo z neho robí základný nástroj pre rôzne výskumné aplikácie. Médium Freeze Medium CM-1, ktorého zloženie obsahuje starostlivo vyváženú kombináciu kryoprotektantov a základných živín, minimalizuje tvorbu ľadových kryštálov a bunkový stres počas procesu zmrazovania, čím zachováva bunkovú integritu.
Kľúčové vlastnosti Freeze Medium CM-1 zahŕňajú:

Široká kompatibilita: Účinné pre širokú škálu typov buniek vrátane primárnych buniek, kmeňových buniek a zavedených bunkových línií.
Vysoká životaschopnosť: Optimalizované na maximalizáciu obnovy a životaschopnosti buniek po rozmrazení, čo zaručuje spoľahlivé výsledky experimentov.
Pripravené na použitie: Pohodlne pripravené a sterilizované na okamžité použitie, čo skracuje čas prípravy a znižuje riziko kontaminácie.
Zvýšená stabilita: Zachováva konzistentný výkon za štandardných podmienok kryokonzervácie, čím zabezpečuje reprodukovateľné výsledky.
Dlhá skladovateľnosť: CM-1 je médium na kryokonzerváciu s obsahom séra, pripravené na použitie, ktoré sa môže skladovať v chladničke až jeden rok.


Používanie CM-1 na zmrazovanie buniek

Ak chcete použiť CM-1 na zmrazovanie adherentných aj suspenzných buniek, postupujte podľa nasledujúcich krokov

V prípade adherentných buniek ich umyte a oddeľte od kultivačného substrátu. V prípade suspenzných buniek prejdite priamo na ďalší krok.
Spočítajte bunky, aby ste sa uistili, že majú správnu koncentráciu.
Odstreďte bunky, aby sa z nich vytvorili pelety, a potom ich znovu rozpusťte v zmrazovacom médiu CM-1.
Resuspendované bunky preneste do kryovínií.
Pred prenosom buniek na dlhodobé uskladnenie použite metódu pomalého zmrazovania





Metóda
Popis
Kroky





❄️
Manuálne zmrazenie

Postupná metóda zahŕňajúca postupné znižovanie teploty na zabezpečenie životaschopnosti buniek

1️⃣ Umiestnite bunky do zmrazovacieho média do mrazničky s teplotou 4 °C na 40 minút.
2️⃣ Preneste do mrazničky s teplotou -80 °C na 24 hodín.
3️⃣ Uskladnite bunky v tekutom dusíku na dlhodobé uchovanie



❄️
Používanie pána Frostyho

Praktické zariadenie, ktoré umožňuje kontrolovanú rýchlosť zmrazovania bez elektrickej energie

1️⃣ Pripravte bunky v kryovíniách s mraziacim médiom.
2️⃣ Umiestnite kryovílie do nádoby Mr. Frosty.
3️⃣ Pred prenesením do tekutého dusíka uchovávajte pri teplote -80 °C po dobu 24 hodín



❄️
Mraznička s riadenou rýchlosťou

Vysoko presná mraznička od spoločnosti Thermo Fisher alebo iných výrobcov určená na riadené znižovanie teploty

1️⃣ Naprogramujte zariadenie na postupné znižovanie teploty.
2️⃣ Umiestnite pripravené bunky do mrazničky.
3️⃣ Po skončení zmrazovacieho cyklu preneste bunky do tekutého dusíka









Kryovílie skladujte pri teplote nižšej ako -130 °C alebo v tekutom dusíku na dlhodobé uchovávanie.


Zloženie

Obsahuje FBS, DMSO, glukózu, soli
Pufrovacia kapacita: pH = 7,2 až 7,6


Mraziace médium CM-1 spoločnosti Cytion ponúka spoľahlivé riešenie na kryokonzerváciu, ktoré zabezpečuje vysokú životaschopnosť a funkčnosť buniek po rozmrazení pre širokú škálu výskumných aplikácií.

DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) je veľmi univerzálne a široko používané základné médium určené na podporu rastu rôznorodých buniek cicavcov v biologickom výskume. Slúži ako ideálne médium na kultiváciu primárnych fibroblastov, neurónov, gliových buniek, HUVEC, buniek hladkého svalstva, ako aj populárnych bunkových línií, ako sú HeLa, 293, Cos-7 a PC-12.
DMEM sa od ostatných médií odlišuje jedinečným zložením. Obsahuje pôsobivé štvornásobné zvýšenie koncentrácie aminokyselín a vitamínov v porovnaní s pôvodným Eagle's Minimal Essential Medium. DMEM bolo pôvodne vyvinuté s nízkym obsahom glukózy (1 g/l) a pyruvátu sodného, ale často sa používa s vyšším obsahom glukózy, buď s pyruvátom sodným, alebo bez neho. DMEM neobsahuje proteíny, lipidy ani rastové faktory, čo si vyžaduje ich doplnenie. Na dosiahnutie optimálneho rastu je bežným prístupom doplnenie DMEM o 10 % fetálneho hovädzieho séra (FBS). Okrem toho DMEM využíva hydrogenuhličitanový tlmivý systém sodíka, ktorý vyžaduje 5
- 10 % CO2 na udržanie fyziologického pH.
Dulbeccovo modifikované médium Eagle (DMEM) je vysoko cenené medzi definovanými médiami na kultiváciu buniek a tkanív, ktoré uspokojujú rastové potreby rôznych adherentných bunkových fenotypov. Prekonáva pôvodné Eagleovo médium, vyvinuté v 50. rokoch 20. storočia na kultiváciu kuracích buniek, prostredníctvom vylepšeného doplnkového zloženia známeho ako Dulbeccova modifikácia. Táto modifikácia výrazne zvyšuje obsah vybraných aminokyselín a vitamínov až štvornásobne v porovnaní s pôvodným médiom.
V oblasti bunkových kultúr zohráva DMEM dôležitú úlohu ako rastové médium pre rôzne typy buniek vrátane primárnych buniek, kmeňových buniek a transformovaných buniek. Výskumníci používajú modifikovanú verziu DMEM aj na širokú škálu výskumných aplikácií, ako je objavovanie liečiv, tkanivové inžinierstvo a štúdium bunkových signálnych dráh.

Kontrola kvality

Sterilne filtrovaný


Skladovanie a trvanlivosť

Skladujte pri teplote +2 °C až +8 °C, chránené pred svetlom.
Po otvorení skladujte pri teplote 4 °C a spotrebujte do 6 až 8 týždňov.


Podmienky prepravy

Okolitá teplota


Údržba

Uchovávajte v chlade pri teplote +2°C až +8°C v tme. Vyhnite sa zmrazovaniu a častému zohrievaniu na +37 °C, pretože sa tým znižuje kvalita výrobku.
Neohrievajte médium na teplotu vyššiu ako 37 °C ani nepoužívajte nekontrolované zdroje tepla, napríklad mikrovlnné zariadenia.
Ak sa má použiť len časť média, odoberte požadované množstvo a pred použitím ho zohrejte na izbovú teplotu.


Zloženie



Kategória
Zložky
Koncentrácia (mg/l)


Aminokyseliny
Glycín
30.00



L-arginín HCl
84.00



L-cystín 2 HCl
62.57



L-Glutamín
584.00



L-histidín HClH2O
42.00



L-izoleucín
105.00



L-leucín
105.00



L-Lyzín HCl
146.00



L-metionín
30.00



L-fenylalanín
66.00



L-serín
42.00



L-Treonín
95.00



L-tryptofán
16.00



L-Tyrozín 2 Na 2H2O
103.79



L-Valín
94.00


Vitamíny
Cholínchlorid
4.00



D-pantotenát vápenatý
4.00



Kyselina listová
4.00



myo-Inozitol
7.20



Nikotínamid
4.00



Pyridoxal HCl
4.00



Riboflavín
0.40



Tiamín HCl
4.00


Anorganické soli
CaCl2 2H2O
265.00



Fe(NO3)3 9H2O
0.10



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
200.10



NaCl
6400.00



NaHCO3
3700.00



NaH2PO4 2H2O
141.73


Ostatné zložky
D-glukóza
4500.00



Fenolová červená sodná soľ
15.90



Pyruvát sodný
110.00

Roztok na uvoľňovanie buniek Accutase s EDTA a fenolovou červenou – 100 ml

Accutase je pripravený na použitie, sterilne filtrovaný roztok na oddelenie buniek, navrhnutý ako šetrná alternatíva k trypsínu/EDTA na disociáciu adhezívnych cicavčích buniek zo štandardných plastových nádob na tkanivové kultúry a povrchov s adhezívnou vrstvou. Kombinuje proteolytickú a kolagenolytickú enzýmovú aktivitu vo vyváženom soľnom roztoku, aby zabezpečil účinnú, ale kontrolovanú disociáciu, zachoval proteíny na povrchu buniek a podporil vysokú životaschopnosť po pasáži a rýchle opätovné pripojenie.

Zloženie Accutase je založené na Dulbeccovom fosfátovom pufrovanom fyziologickom roztoku (DPBS) s EDTA a fenolovou červenou ako vizuálnym indikátorom pH. Enzýmy sú nemamalského a nebakteriálneho pôvodu, vďaka čomu je Accutase obzvlášť vhodný pre výskum kmeňových buniek, pracovné postupy pri výrobe vakcín a akékoľvek použitie, kde je potrebné minimalizovať kontamináciu pochádzajúcu zo zvierat alebo mikroorganizmov. Roztok sa pri 37 °C automaticky inhibuje, takže po oddelenie nie je potrebné žiadne neutralizačné činidlo ani médium obsahujúce sérum – bunky je možné preniesť priamo do čerstvého média.

Kľúčové vlastnosti

Pripravená na použitie 1x sterilne filtrovaná kvapalina – nie je potrebné riedenie ani rekonštitúcia
Kombinovaná proteolytická a kolagenolytická enzýmová aktivita pre šetrnú disociáciu
Každá šarža je štandardizovaná na definovanú disociačnú aktivitu pre konzistentnosť medzi šaržami
Enzýmy nepochádzajúce z cicavcov ani z baktérií
Automatická inhibícia pri 37 °C – nie je potrebný neutralizačný roztok
Formulované v Dulbeccovom PBS s EDTA
Obsahuje fenolovú červenú ako vizuálny indikátor pH
pH 6,8 – 7,8


Typické použitie
Accutase jemne disociuje širokú škálu adhezívnych a citlivých typov buniek, vrátane ľudských embryonálnych kmeňových buniek (hESCs), ľudských indukovaných pluripotentných kmeňových buniek (iPSCs), neurálnych kmeňových buniek, primárnych neurónov a bežne kultivovaných adhezívnych línií, ako sú HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 a A549. Typické prípady použitia zahŕňajú:

Bežnú subkultiváciu a pasážovanie adhezívnych cicavčích buniek
Šetrná disociácia jednotlivých buniek hESCs, iPSCs a iných citlivých línií
Príprava vzoriek pre prietokovú cytometriu a analýzu FACS
Analýzu markerov na povrchu buniek, kde záleží na integritě epitopu
Testovanie migrácie, proliferácie a apoptózy buniek
Testovanie kľudového stavu prostredníctvom štúdií o deprivácii séra a transfekcii onkogénov
Testovanie migrácie nádorových buniek a buniek neurálnej lišty
Zvýšenie produkcie v pracovných postupoch s bioreaktormi

Pri bežnej práci naneste približne 10 ml Accutase na 75 cm2 kultivačnej plochy a inkubujte 5–10 minút pri izbovej teplote. Optimálny čas inkubácie by sa mal stanoviť pre každú bunkovú líniu a nemal by presiahnuť jednu hodinu. Pred pridaním opláchnite bunkovú vrstvu roztokom soli bez Ca2+/Mg2+, napríklad DPBS bez vápnika a horčíka, aby ste odstránili zvyšky séra a dvojmocné katióny.

Manipulácia a skladovanie
Neotvorenú fľašu skladujte zmrazenú pri teplote -15 °C alebo nižšej. Rozmrazujte buď pri izbovej teplote, alebo cez noc pri teplote +2 °C až +8 °C. Accutase nerozmrazujte vo vodnom kúpeli pri teplote 37 °C, pretože zvýšené teploty znižujú aktivitu enzýmu. Po rozmrazení sa roztok môže skladovať až 2 mesiace pri teplote +2 °C až +8 °C; neskladujte pri izbovej teplote. Pred použitím nereagent nezahrievajte na 37 °C – pridajte ho priamo do prepláchnutých buniek pri izbovej teplote. Pre dlhodobú skladovateľnosť sa odporúča rozdelenie na jednorazové dávky, aby sa zabránilo opakovaným cyklom rozmrazovania. Vždy pracujte v aseptických podmienkach.

Kvalita
Vyrobené podľa prísnych noriem kvality. Každá šarža Accutase je sterilizovaná filtráciou a testovaná na sterilitu, pH, vzhľad a disociačnú aktivitu, aby sa zabezpečil konzistentný a reprodukovateľný výkon v rámci jednotlivých šarží.

Špecifikácie produktu



Špecifikácia
Podrobnosti



Typ produktuReagent na uvoľňovanie/disociáciu buniek
FormátSterilne filtrovaná kvapalina, pripravená na použitie
Objem100 ml
Pracovná koncentrácia1x (pripravené na použitie)
Enzymatická aktivitaKombinovaná proteolytická a kolagenolytická
Pôvod enzýmuNesavčí a nebakteriálny
Pufrový systémDulbeccoho PBS s EDTA
Indikátor pHFenolová červená
Rozsah pH6,8 – 7,8
VzhľadČíry, bledočervený až oranžový roztok
Skladovacia teplota-15 °C alebo nižšia
Stabilita po rozmrazeníAž 2 mesiace pri teplote +2 °C až +8 °C
Odporúčaný objem použitia~10 ml na 75 cm2 kultivačnej plochy
Typická doba inkubácie5 – 10 minút pri izbovej teplote
Prepravné podmienkyZmrazené v suchom ľade
Určené použitieIba na výskumné účely a ďalšiu výrobu



Zloženie (zloženie na liter)



Zložka
Koncentrácia (mg/l)




Anorganické soli

Chlorid sodný (NaCl)8000,00
Hydrogénfosforečnan disodný (Na2HPO4)1150,00
Chlorid draselný (KCl)200,00
Dihydrogénfosforečnan draselný (KH2PO4)200,00

Ostatné zložky

EDTA · 4Na (tetrasodný EDTA)220,00
Fenolová červená3,00
Vlastná zmes enzýmov (proteolytická a kolagenolytická aktivita)1x



Accutase je registrovaná ochranná známka spoločnosti Innovative Cell Technologies, Inc.

Prehľad produktov
Objem: 100 ml Skladovanie: ≤-15 °C Sterilita: Sterilná filtrácia
Roztok antibiotík/antimykotík (100x ) je sterilný koncentrát pripravený na použitie určený na zníženie rizika mikrobiálnej kontaminácie v bunkových kultúrach a súvisiacich laboratórnych aplikáciách. Tento 100x roztok obsahuje osvedčenú kombináciu penicilínu, streptomycínu a amfotericínu B, ktorá poskytuje široké spektrum antimikrobiálnej aktivity proti grampozitívnym a gramnegatívnym baktériám, kvasinkám a vláknitým hubám. Prípravok je vhodný na použitie v kultúrach eukaryotických buniek, bakteriálnych médiách a iných systémoch citlivých na kontamináciu, čím podporuje čistú a konzistentnú laboratórnu prevádzku.
Použitie a výhody Tento roztok optimalizovaný pre bežné výskumné protokoly sa široko používa na udržiavanie aseptických podmienok v pracovných postupoch bunkových kultúr. Ponúka spoľahlivý výkon v prostrediach citlivých na kontamináciu, čím pomáha výskumníkom znížiť riziko nadmerného rastu mikroorganizmov bez toho, aby bolo ohrozené zdravie buniek alebo reprodukovateľnosť experimentov. Sterilne filtrované zloženie eliminuje potrebu ďalších krokov solubilizácie, čím podporuje zjednodušenú prípravu médií a znižuje variabilitu každodenných laboratórnych postupov.
Použitie a kompatibilita Na dosiahnutie štandardných pracovných koncentrácií roztok zrieďte v pomere 1:100 do kompletného kultivačného média. Produkt je kompatibilný so širokou škálou bunkových línií cicavcov a základných médií. Vďaka stálej dostupnosti zásob môžu výskumní pracovníci využívať výhody spoľahlivej kontinuity dodávok a zjednodušeného plánovania logistiky. Roztok by sa mal skladovať pri teplote ≤ -15 °C a chrániť pred opakovanými cyklami zmrazovania a rozmrazovania, aby sa zachovala jeho stabilita. Len na výskumné účely. Nie je určený na použitie pri diagnostických alebo terapeutických postupoch. Nie je určený na použitie u ľudí alebo zvierat.

Roztok fosfátového tlmivého roztoku (PBS)
Fyziologický roztok s fosfátovým pufrom (PBS) je široko používaný tlmivý roztok v biologickom a chemickom výskume. Zohráva kľúčovú úlohu pri udržiavaní rovnováhy pH a osmolarity počas rôznych experimentálnych postupov vrátane spracovania tkanív a bunkových kultúr. Náš roztok PBS je starostlivo pripravený z vysoko čistých zložiek, aby sa zabezpečila stabilita a spoľahlivosť pri každom experimente. Osmolarita a koncentrácie iónov nášho roztoku PBS presne kopírujú koncentrácie v ľudskom tele, takže je izotonický a netoxický pre väčšinu buniek.

Zloženie nášho roztoku PBS
Náš roztok PBS je zmesou fosfátových pufrov a fyziologických roztokov ultračistej kvality s upraveným pH. V 1X pracovnej koncentrácii obsahuje:

8000 mg/l chloridu sodného (NaCl)
200 mg/L chlorid draselný (KCl)
1150 mg/L fosforečnan sodný dvojzložkový bezvodý (Na2HPO4)
200 mg/L Fosforečnan draselný jednozložkový bezvodý (KH2PO4)

Toto zloženie zabezpečuje optimálne pH a iónovú rovnováhu, vhodné pre širokú škálu biologických aplikácií.

Aplikácie nášho roztoku PBS
Náš roztok PBS je ideálny na rôzne aplikácie v biologickom výskume. Vďaka svojim izotonickým a netoxickým vlastnostiam je vhodný na riedenie látok a oplachovanie bunkových nádob. Roztoky PBS obsahujúce EDTA sú účinné na uvoľnenie prichytených a zhlukovaných buniek. Do PBS by sa však nemali pridávať dvojmocné kovy, ako napríklad zinok, pretože môžu spôsobiť zrážanie. V takýchto prípadoch sa odporúčajú Goodove pufre. Okrem toho je náš roztok PBS prijateľnou alternatívou vírusového transportného média na transport a skladovanie RNA vírusov vrátane SARS-CoV-2.

Kontrola kvality

Sterilne filtrované


Skladovanie a trvanlivosť

Skladujte pri teplote +2 °C až +25 °C, chránené pred svetlom.
Po otvorení skladujte pri teplote 2 °C až 25 °C a spotrebujte do 24 mesiacov.


Podmienky prepravy

Okolitá teplota


Údržba

Uchovávajte v chlade pri teplote +2°C až +8°C v tme. Vyhnite sa zmrazovaniu a častému zohrievaniu na +37 °C, pretože sa tým znižuje kvalita výrobku.
Neohrievajte médium na teplotu vyššiu ako 37 °C ani nepoužívajte nekontrolované zdroje tepla, napríklad mikrovlnné zariadenia.
Ak sa má použiť len časť média, odoberte požadované množstvo a pred použitím ho zohrejte na izbovú teplotu.

Zloženie



Kategória
Zložky
Koncentrácia (mg/l)


Soli
Chlorid draselný
200



Fosforečnan draselný monobázický bezvodý
200



Chlorid sodný
8000



Fosforečnan sodný dvojzložkový bezvodý
1150