Linia komórkowa RAW 264.7 w badaniach nad makrofagami i immunologią

Linia komórkowa RAW 264.7 służy jako solidny model in vitro dla mysich makrofagów, mający fundamentalne znaczenie w dziedzinie badań immunologicznych. Pochodzące od samców myszy BALB/c, komórki te zostały przekształcone przez wirus białaczki mysiej Abelsona, w wyniku czego powstała linia komórkowa podobna do makrofagów. Ze względu na ich stabilność funkcjonalną i nieodłączną zdolność do wykonywania zarówno fagocytozy, jak i pinocytozy, komórki RAW 264.7 są niezbędne do badania interakcji gospodarz-patogen, co czyni je kamieniem węgielnym w badaniach immunologicznych [1,2].

Charakterystyka morfologiczna i zachowanie podczas wzrostu

Po zbadaniu, komórki RAW 264.7 wykazują częściowo przylegający wzrost ze skłonnością do tworzenia zarówno wrzecionowatych przylegających komórek, jak i kulistych pływających żywych komórek, o średnicy komórkowej od 10 do 20 µm. Ta polimorficzna natura i zdolność adaptacji w warunkach hodowli sprawiają, że komórki RAW 264.7 są wszechstronnym narzędziem do eksperymentalnej manipulacji i obserwacji.

Funkcja immunologiczna i prezentacja antygenu

Jako komórki prezentujące antygen, komórki RAW 264.7 odgrywają kluczową rolę w układzie odpornościowym. Ich funkcja wykracza poza zwykłe rozpoznawanie patogenów i obejmuje przetwarzanie i prezentację antygenów limfocytom T, organizując w ten sposób kompleksową odpowiedź immunologiczną. Ta dynamika ułatwia głębsze zrozumienie, w jaki sposób układ odpornościowy identyfikuje i neutralizuje obce jednostki.

Polaryzacja makrofagów: Paradygmat M0, M1 i M2

Komórki RAW 264.7, w stanie podstawowym jako makrofagi M0, posiadają niezwykłą zdolność do polaryzacji do fenotypu prozapalnego M1 lub przeciwzapalnego M2. Ta zdolność polaryzacji zapewnia naukowcom model do badania wpływu różnych cytokin i czynników środowiskowych na funkcję makrofagów i odpowiedzi immunologiczne [3,4].

Osteoklastogeneza i przebudowa kości

Chociaż same nie są osteoklastami, komórki RAW 264.7 odegrały kluczową rolę w badaniu osteoklastogenezy - procesu tworzenia osteoklastów. Komórki te ułatwiają badanie ekspresji genów osteoklastów i ich reakcji na aktywację receptora. Badania te mają głębokie implikacje dla zrozumienia patofizjologii stanów takich jak osteoporoza, w których rozregulowana przebudowa kości jest cechą charakterystyczną.

Zalety i wady komórek RAW 264.7

Zalety

• Łatwa hodowla: Linia komórkowa RAW 264.7 jest łatwa w hodowli i utrzymaniu w laboratorium bez żadnych skomplikowanych wymagań.
• Dobrze scharakteryzowana: RAW 264.7 jest dobrze scharakteryzowaną linią komórkową, co oznacza, że ma stabilne cechy fenotypowe i funkcjonalne.
• Model makrofagów in vitro: Ponieważ komórki RAW 264.7 są makrofagami, wykazują one podstawowe funkcje podobne do makrofagów, takie jak fagocytoza i pinocytoza. Dlatego też są one często wykorzystywane jako model makrofagów in vitro.
• Różnicowanie do osteoklastów: Komórki RAW 264.7 mogą być różnicowane do osteoklastów przy użyciu specyficznych czynników molekularnych. Te zróżnicowane komórki są zdolne do przebudowy kości, podobnie jak osteoklasty.

Wady

• Słaba reprezentacja pierwotnych makrofagów: Jako przekształcona linia komórkowa, RAW 264.7 może niedokładnie reprezentować cechy pierwotnych makrofagów i może mieć pewne różnice w ekspresji genów, fenotypie i funkcji.
• Ograniczenia w badaniach przesiewowych leków: Komórki RAW 264.7 mogą nie być odpowiednie do wszystkich rodzajów testów przesiewowych leków, a ich reakcje na niektóre leki mogą różnić się od pierwotnych makrofagów.
• Silna adhezja komórek: Komórki RAW 264.7 silnie przylegają do powierzchni kolby hodowlanej i czasami mogą być trudne do odłączenia.

Zastosowania komórek RAW 264.7 w naśladowaniu makrofagów i badaniach immunologicznych

Modelowanie komórkowych odpowiedzi immunologicznych

Linia komórkowa RAW 264.7, odzwierciedlająca funkcje autentycznych makrofagów, jest kluczowym modelem do badania odpowiedzi komórek na patogeny i bodźce immunologiczne. W badaniu podkreślającym ten aspekt oceniano immunomodulujący i przeciwutleniający wpływ zabitych termicznie bakterii kwasu mlekowego na te komórki, dostarczając istotnych odkryć w zakresie regulacji układu odpornościowego[5]

Uzupełniając to, badania przeprowadzone w 2019 r. wyjaśniły immunologiczny wpływ ekspozycji RAW 264.7 na polisacharydy z rośliny Polygonatum sibiricum. Badanie wykazało, że związki te wywołują odpowiedź immunologiczną poprzez aktywację szlaków sygnałowych NF-κB/MAPK, oferując głębokie zrozumienie molekularne[6]

Badanie osteoklastogenezy

Funkcjonując jako surogat w badaniach nad różnicowaniem osteoklastów, komórki RAW 264.7 przyczyniają się do wyjaśnienia zachowania osteoklastów i szlaków różnicowania. Takie badania poszerzają naszą wiedzę na temat mechanizmów resorpcji kości i patogenezy osteoporozy. Zaawansowane techniki obrazowania są często wykorzystywane do monitorowania zmian wewnątrzkomórkowych i analizy metabolizmu hemu w tych komórkach

Uzyskanie molekularnego wglądu w osteoklastogenezę

Pomimo ich podstawowej roli jako modelu makrofagów, komórki RAW 264.7 są również wykorzystywane do badań osteoklastogenezy in vitro. Indukując cechy podobne do osteoklastów w tych komórkach, naukowcy uzyskują wgląd w proces różnicowania i zachowanie przedosteoklastów, chociaż kluczowe znaczenie ma uwzględnienie w tych badaniach nieodłącznych cech i pochodzenia linii komórkowej

Badanie bioaktywności produktów naturalnych

Badania przesiewowe pod kątem bioaktywności produktów naturalnych to kolejne zastosowanie, w którym wyróżniają się komórki RAW 264.7. Na przykład ich wykorzystanie w koreańskim badaniu immunostymulujących właściwości mieszanki ziołowej wykazało skuteczność linii komórkowej w identyfikacji związków bioaktywnych w substancjach naturalnych[7]

Pionierskie badania z wykorzystaniem naszych komórek RAW 264.7

Publikacje naukowe wykorzystujące komórki RAW 264.7

Dostępnych jest wiele publikacji naukowych dotyczących mysiej linii komórkowej makrofagów RAW 264.7:

• Polisacharydy z Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute indukują odpowiedź immunologiczną w linii komórkowej RAW264.7 poprzezszlakNF-κB/MAPK: W badaniu tym zaproponowano, że polisacharydy uzyskane z rośliny Polygonatum s ibiricum mogą wywoływać odpowiedź immunologiczną w mysiej linii komórkowej makrofagów RAW 264.7 poprzez regulację kaskady sygnalizacyjnej NF-κB/MAPK.
• Immunomodulujący wpływ ekstraktu z Tinospora crispa i jego głównych związków na funkcje immunologiczne makrofagów RAW 264.7: W artykule opublikowanym w czasopiśmie International Immunopharmacology opisano, że ekstrakt roślinny Tinosporacrispa i jego główne składniki mają działanie immunomodulujące i immunostymulujące na linię komórkową makrofagów RAW 264.7.
• Zabite termicznie bakterie kwasu mlekowego hamują produkcję tlenku azotu poprzez indukowalną syntazę tlenku azotu i cyklooksygenazę-2 w komórkach RAW 264.7: W badaniu tym zaproponowano, że zabite termicznie bakterie kwasu mlekowego mogą być potencjalnie wykorzystywane w syntezie produktów probiotycznych, ponieważ posiadają właściwości immunomodulujące i przeciwutleniające. Naukowcy wykorzystali komórki RAW 264.7 do zbadania tych aktywności biologicznych.
• Wpływ preparatu ziołowego na wzmocnienie odpowiedzi immunologicznej makrofagów RAW 264.7: W badaniu tym wykorzystano komórki RAW 264.7 do zbadania immunostymulującego działania preparatu ziołowego o nazwie KM1608. Badanie zasugerowało KM1608 jako potencjalny środek wzmacniający odpowiedź immunologiczną.
• Badanie przesiewowe roślin stosowanych w tradycyjnej medycynie kolumbijskiej ujawniło potencjał przeciwzapalny Physalis angulata calyces: W artykule opublikowanym w Saudi Journal of Biological Sciences zbadano potencjał przeciwzapalny 10 powszechnie stosowanych tradycyjnych roślin kolumbijskich przy użyciu komórek RAW 264.7 stymulowanych LPS.

Komórki RAW 264.7: Zasoby, protokoły, filmy i nie tylko

Komórki RAW 264.7 są często wykorzystywane w badaniach nad transfekcją. Poniższe zasoby wyjaśniają różne metody transfekcji stosowane dla linii komórkowej RAW 264.7.

• Transfekcja komórek RAW 264.7: Ta strona internetowa zawiera protokół transfekcji makrofagów RAW 264.7 przy użyciu odczynnika lipofektaminy.
• Protokół transfekcji: Ten opublikowany artykuł opisuje szczegółowy protokół transfekcji komórek RAW 264.7.
• Skuteczna metoda transfekcji komórek RAW 264.7: Ten dokument opisuje inne praktyczne podejście do transfekcji przy użyciu komórek RAW 264.7.

Filmy związane z linią komórkową RAW 264.7

• Hodowla komórek RAW 264.7: Ten film wyjaśnia protokół pasażowania komórek RAW 264.7.
• Metoda transfekcji: Ten film dotyczy transfekcji komórek RAW 264.7 genem reporterowym.

Niezbędne FAQ na temat linii komórkowej RAW 264.7: Wgląd w badania nad mimikrą makrofagów i osteoklastogenezą

Piśmiennictwo

1. Taciak, B., et al., Ocena stabilności fenotypowej i funkcjonalnej linii komórkowej RAW 264.7 w kolejnych pasażach. PloS one, 2018. 13(6): p. e0198943.
2. Wang, S., et al., Makrofagi zapalne przerywają dojrzewanie i mineralizację osteocytów poprzez regulację szlaku sygnałowego Notch. Molecular Medicine, 2022. 28(1): p. 102.
3. Orekhov, A.N., et al., Różnicowanie monocytów i polaryzacja makrofagów. Vessel Plus, 2019. 3: p. 10.
4. Khabipov, A., et al., RAW 264.7 macrophage polarization by pancreatic cancer cells-a model for studying tumour-promoting macrophages. Anticancer Research, 2019. 39(6): p. 2871-2882.
5. Kang, C.-H., et al., Zabite termicznie bakterie kwasu mlekowego hamują produkcję tlenku azotu poprzez indukowalną syntazę tlenku azotu i cyklooksygenazę-2 w komórkach RAW 264.7. Probiotyki i białka przeciwdrobnoustrojowe, 2021. 13(6): p. 1530-1538.
6. Zhang, J., et al., Polisacharydy z Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute indukują odpowiedź immunologiczną w linii komórkowej RAW264.7 poprzez szlak NF-κB/MAPK. Postępy RSC, 2019. 9(31): p. 17988-17994.
7. Trinh, T.A., et al., wpływ preparatu ziołowego na wzmocnienie odpowiedzi immunologicznej w makrofagach RAW 264.7. Biomolecules, 2020. 10(3): p. 424.