Komórki Hep3B: badania i odkrycia dotyczące raka wątrobowokomórkowego
HEP3B to nieśmiertelna linia komórkowa raka wątrobowokomórkowego pochodzenia ludzkiego. Jest szeroko stosowana w badaniach nad hepatotoksycznością i metabolizmem leków. Wydajność transfekcji HEP3B jest znaczna, dlatego komórki te są powszechnie wykorzystywane do badania rozwoju i progresji raka wątroby oraz interwencji terapeutycznych. Niniejszy artykuł zawiera wszystkie niezbędne informacje na temat linii komórkowej HEP3B, które pomogą Państwu w pracy z nią. Obejmuje on głównie:
- Pożywka
- Do hodowli komórek HEP3B stosuje się pożywkę EMEM zawierającą 10% FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-glutaminy oraz zrównoważony roztwór soli Earle'a (EBSS).
- Czas podwojenia
- Czas podwojenia komórek HEP3B wynosi około 36 godzin.
- Typ wzrostu
- Ta linia komórek wątrobiaka jest adhezyjna.
- Poziom bezpieczeństwa biologicznego
- BSL-1
- Dostępne w
- Cytion — Zamów HEP3B
- Ogólna charakterystyka i pochodzenie komórek HEP3B
- Informacje dotyczące hodowli linii komórkowej HEP3B
- Linia komórkowa HEP3B: zalety i ograniczenia
- Zastosowania komórek HEP3B w badaniach
- Publikacje dotyczące linii komórkowej HEP3B
- Materiały dotyczące linii komórkowej HEP3B: protokoły, filmy i inne
- Ogólna charakterystyka i pochodzenie komórek HEP3B
- Informacje dotyczące hodowli linii komórkowej HEP3B
- Linia komórkowa HEP3B: zalety i ograniczenia
- Zastosowania komórek HEP3B w badaniach naukowych
- 5. Publikacje dotyczące linii komórkowej HEP3B
- Materiały dotyczące linii komórkowej HEP3B: protokoły, filmy i inne
- Często zadawane pytania
Ogólna charakterystyka i pochodzenie komórek HEP3B
Podstawowe informacje, których potrzebujesz na temat linii komórkowej, to jej pochodzenie i ogólna charakterystyka. Pomogą Ci one zdecydować o jej zastosowaniu w badaniach i ułatwią pracę z nią. Ta sekcja artykułu zawiera wszystkie niezbędne informacje na temat pochodzenia i charakterystyki HEP3B. Tutaj dowiesz się: Czym są linie komórkowe Hep 3B? Jakie jest pochodzenie komórek Hep3B? Jaka jest morfologia komórek HEP3B?
- HEP3B, ciągła ludzka linia komórkowa wątrobiaka, pochodzi z tkanki wątroby 8-letniego afrykańskiego chłopca z rakiem wątrobowokomórkowym (HCC). Została ona założona przez Adena i współpracowników w 1979 roku w laboratorium Barbary B. Knowles w Wistar Institute w Filadelfii w USA [1].
- Komórki HEP3B charakteryzują się integracją genomu wirusa zapalenia wątroby typu B (HBV) w swoim chromosomie.
- Te komórki raka wątrobowokomórkowego wykazują morfologię nabłonkową.
- Komórki HEP3B mają modalną liczbę chromosomów wynoszącą 60. W przeciwieństwie do HepG2 nie posiadają one rearanżowanego chromosomu 1.
Jaka jest różnica między HepG2 a Hep3B?
HepG2 i HEP3B różnią się liczbą chromosomów na komórkę. HEP3B zawiera 60 chromosomów, podczas gdy komórki HepG2 mają średnio 55 chromosomów. Ponadto HepG2 nie jest nowotworowe i jest ujemne pod względem wirusa zapalenia wątroby typu B, podczas gdy HEP3B jest nowotworowe i HBV-dodatnie.
Informacje dotyczące hodowli linii komórkowej HEP3B
Znajomość informacji dotyczących hodowli linii komórkowej może ułatwić pracę z nią. W tej sekcji omówiono wszystkie kluczowe kwestie związane z hodowlą linii komórkowej HEP3B HBV, w tym: Jaki jest czas podwojenia komórek Hep3B? Jakie są warunki hodowli HEP3B? Jak hoduje się komórki HEP3B HCC?
Kluczowe kwestie dotyczące hodowli komórek HEP3B
Czas podwojenia:
Czas podwojenia komórek HEP3B wynosi około 36 godzin.
Komórki przylegające czy w zawiesinie:
Ta linia komórek wątrobiaka jest przylegająca.
Współczynnik podziału:
Komórki HEP3B są subkultywowane w stosunku 1:2 do 1:4. Komórki HEP3B przylegające są płukane 1 x PBS, a następnie inkubowane z roztworem dysocjacyjnym Accutase. Po 8–10 minutach dodaje się świeżą pożywkę, a komórki poddaje się wirowaniu. Zebrane komórki są następnie ostrożnie zawieszane i przelewane do kolb zawierających pożywkę hodowlaną w zalecanym stosunku podziału.
Pożywka wzrostowa:
Do hodowli komórek HEP3B stosuje się pożywkę EMEM zawierającą 10% FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-glutaminy oraz zrównoważony roztwór soli Earle'a (EBSS).
Warunki wzrostu:
Komórki HEP3B hoduje się w inkubatorze z nawilżaniem w temperaturze 37°C przy ciągłym dopływie 5% CO2.
Przechowywanie:
Zamrożone komórki HEP3B przechowuje się w temperaturze poniżej -150°C w zamrażarce elektrycznej lub w fazie gazowej ciekłego azotu.
Proces zamrażania i pożywka:
Polecanym podłożem do zamrażania komórek HEP3B jest CM-1 lub CM-ACF. Komórki zamraża się metodą powolnego zamrażania, która pozwala na spadek temperatury o zaledwie 1°C na minutę, aby chronić żywotność komórek.
Proces rozmrażania:
Zamrożone komórki rozmraża się w łaźni wodnej ustawionej na 37°C przez 40 do 60 sekund. Następnie komórki te dodaje się do świeżego pożywki wzrostowej i odwirowuje w celu usunięcia elementów pożywki zamrażającej. Zebrane komórki ponownie zawiesza się i umieszcza w nowych kolbach w celu wzrostu.
Poziom bezpieczeństwa biologicznego:
Do hodowli komórek HEP3B wymagane jest laboratorium o poziomie bezpieczeństwa biologicznego 1.
Linia komórkowa HEP3B: zalety i ograniczenia
HEP3B to szeroko stosowana linia komórkowa raka wątrobowokomórkowego. W tej sekcji skupimy się na niektórych kluczowych zaletach i ograniczeniach tych komórek raka wątroby.
Zalety
Główne zalety komórek HEP3B to:
Łatwość hodowli
Komórki HEP3B nie mają wygórowanych wymagań dotyczących hodowli, co sprawia, że są łatwe w obsłudze i utrzymaniu w laboratorium badawczym. Upraszcza to procedury eksperymentalne.
Wysoka skuteczność transfekcji
Komórki HEP3B charakteryzują się niezwykłą skutecznością transfekcji, dzięki czemu są szeroko stosowane w manipulacjach genetycznych i badaniach związanych z ekspresją genów.
Tumorogenność
HEP3B to nowotworowa linia komórkowa raka wątrobowokomórkowego, zdolna do tworzenia nowotworów po wstrzyknięciu myszom z obniżoną odpornością. Ułatwia to badanie progresji i rozwoju nowotworów przy użyciu modeli ksenotransplantatów HEP3B.
Status P53 w HEP3B
Komórki HEP3B posiadają mutację genu P53 podobną do tej występującej w raku wątrobowokomórkowym (HCC) i innych nowotworach, co sprawia, że są one przydatne do badania wpływu mutacji P53 na wzrost, rozwój i progresję nowotworu.
Ograniczenia
Ograniczenia związane z linią komórkową HEP3B to:
Model komórkowy in vitro
Linia komórkowa HEP3B służy jako model in vitro komórek raka wątrobowokomórkowego (HCC). Jednak może ona nie odzwierciedlać w pełni złożoności HCC występującego w organizmach żywych. W związku z tym wyniki eksperymentów in vitro mogą różnić się od tych obserwowanych in vivo.
Zastosowania komórek HEP3B w badaniach
Linia komórkowa HEP3B ma kilka zastosowań w badaniach biomedycznych. Niektóre z kluczowych zastosowań komórek HEP3B w badaniach obejmują:
- Biologia nowotworów: HEP3B to ludzka linia komórkowa raka wątrobowokomórkowego. Jest to nieoceniony model komórkowy do badania mechanizmów komórkowych i molekularnych leżących u podstaw rozwoju i progresji HCC. Naukowcy wykorzystują te komórki do badania mutacji genetycznych, procesów komórkowych i szlaków sygnałowych związanych z rakiem wątroby. Na przykład w jednym z badań wykorzystano komórki HEP3B i stwierdzono, że mikroRNA-223-3p reguluje składniki inflamasomu NLRP3, hamuje proliferację i wzmacnia apoptozę komórek raka wątrobowokomórkowego HEP3B [2].
- Badania przesiewowe i opracowywanie leków: Linia komórkowa HEP3B jest również wykorzystywana do testowania, badań przesiewowych i opracowywania nowych terapii przeciwko rakowi wątroby. Ponadto służy do oceny toksyczności i skuteczności różnych leków przeciwnowotworowych oraz metod leczenia. Naukowcy wykorzystali również te komórki raka wątroby do badania metabolizmu leków. Wykorzystali komórki HEP3B i ocenili potencjał cytotoksyczny wyciągu z rośliny Cotinus coggygria na komórki raka wątroby HEP3B [3].
- Infekcje wirusowe: HEP3B jest linią komórkową zakażoną wirusem zapalenia wątroby typu B; dlatego jest wykorzystywana do badania infekcji wirusowych, które mogą prowadzić do rozwoju raka wątroby, tj. HBV i HCV. Może to pomóc w lepszym zrozumieniu infekcji wirusowych i opracowaniu potencjalnych terapii przeciwwirusowych. Na przykład w jednym z badań wykorzystano komórki raka wątroby HEP3B i zbadano znaczenie ubikwitynacji dla rozprzestrzeniania się wirusa zapalenia wątroby typu C. Wyniki sugerowały, że proteaza specyficzna dla ubikwityny 15 (USP15) bierze udział w rozprzestrzenianiu się HCV poprzez regulację funkcji specyficznych dla hepatocytów, w tym tworzenia kropelek lipidowych i translacji RNA HCV [4].
5. Publikacje dotyczące linii komórkowej HEP3B
W tej części artykułu omówimy kilka interesujących publikacji naukowych dotyczących komórek HEP3B.
Regulacja apoptozy i autofagii przez luteolinę w komórkach Hep3B ludzkiego raka wątrobowokomórkowego
W publikacji w czasopiśmie „Biochemical and Biophysical Research Communications” (2019) wysunięto hipotezę, że stres retikulum endoplazmatycznego wywołany przez luteolinę może wywierać działanie przeciwnowotworowe w komórkach HEP3B bez genu P53 w sposób niezależny od P53.
W badaniu opublikowanym w czasopiśmie „Archiv der Pharmazie” (2021) zaproponowano pentacykliczny triterpenoid, lupeol, jako potencjalny środek przeciwnowotworowy przeciwko komórkom HEP3B.
Artykuł ten został opublikowany w czasopiśmie „Molecular Medicine Reports” (2017). Wyniki badania wskazują, że ekstrakt etanolowy z Cnidium monnieri (L.) Cusson indukuje śmierć komórkową (apoptozę) i zatrzymanie cyklu komórkowego w komórkach raka wątrobowokomórkowego HepG2 i HEP3B poprzez regulację szlaku sygnałowego p53 oraz Akt/GSK-3β.
W badaniach opublikowanych w czasopiśmie „Biomolecules and Therapeutics” (2020) wysunięto hipotezę, że auranofin wykazuje działanie synergiczne i sprzyja apoptozie komórek HEP3B wywołanej przez sulforafan poprzez aktywację szlaku PI3K/AKT.
W artykule naukowym opublikowanym w czasopiśmie „BioFactors” (2023) wysunięto hipotezę, że circular RNA-0072309 wywiera działanie przeciwnowotworowe w komórkach raka wątrobowokomórkowego HEP3B poprzez oddziaływanie na miRNA-665.
Materiały dotyczące linii komórkowej HEP3B: protokoły, filmy i inne
Poniżej znajduje się kilka zasobów dotyczących komórek HEP3B:
- Transfekcja HEP3B: Ten film wyjaśnia protokół transfekcji komórek HEP3B.
- Skuteczność transfekcji HEP3B: Ten link pomoże Ci poznać skład pożywki DMEM dla HEP3B, procedurę pasażowania komórek oraz protokół transfekcji komórek HEP3B. Ponadto zawiera informacje dotyczące optymalizacji stosowania odczynnika Lipofectamine 3000 w protokole transfekcji komórek HEP3B.
Poniższy link zawiera protokół hodowli komórek HEP3B:
- Warunki hodowli HEP3B: Ten link pomoże Ci poznać protokół postępowania z hodowlami Huh7 i HEP3B oraz ich utrzymania.
- Komórki HEP3B: Ta strona internetowa zawiera wiele informacji na temat komórek HEP3B, w tym pożywki HEP3B, protokół podziału komórek, rozmrażania oraz postępowania z hodowlami proliferacyjnymi i kriokonserwowanymi.
Referencje
- Puttahanumantharayappa, L.D. i in., Pochodzenie i właściwości linii komórkowych raka wątrobowokomórkowego. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): s. 1040.
- Wan, L. i in., miRNA-223-3p reguluje NLRP3 w celu promowania apoptozy i hamowania proliferacji komórek Hep3B. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): s. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. i S. Selen-Isbilir, Działanie cytotoksyczne wyciągu z Cotinus coggygria na linię komórek nowotworowych Hep3B. Natural Product Research, 2022: s. 1-4.
- Kusakabe, S. i in., USP15 bierze udział w rozprzestrzenianiu się wirusa zapalenia wątroby typu C poprzez regulację translacji wirusowego RNA i tworzenia kropelek lipidowych. Journal of Virology, 2019. 93(6): s. 10.1128/jvi. 01708-18.