Linia komórkowa HT22
HT22 to mysia linia komórek neuronalnych powszechnie stosowana w badaniach neurologicznych. Jest ona cenna w badaniach nad zaburzeniami neurodegeneracyjnymi oraz w testowaniu potencjalnych terapii lub metod leczenia o działaniu neuroprotekcyjnym. Ponadto komórki HT22 są wrażliwe na glutaminian, dlatego wykorzystuje się je do badania toksyczności wywołanej glutaminianem lub uszkodzeń neuronów.
- Pożywka
- Do hodowli komórek HT22 stosuje się pożywkę DMEM. W celu zapewnienia optymalnego wzrostu komórek uzupełnia się ją 10% FBS, 4,5 g/l glukozy, 4 mM L-glutaminy, 1,5 g/l NaHCO3 oraz 1,0 mM pirogronianu sodu.
- Czas podwojenia
- Czas podwojenia komórek HT22 wynosi około 15 godzin.
- Typ wzrostu
- Komórki HT22 są komórkami przylegającymi.
- Poziom bezpieczeństwa biologicznego
- BSL-1
- Dostępne w
- Cytion — Zamów HT22
W niniejszym artykule omówiono najważniejsze cechy komórek HT22, które mogą pomóc w pracach badawczych. Omówiono w nim głównie:
- Ogólne cechy i pochodzenie komórek HT22
- Informacje dotyczące hodowli linii komórkowej HT22
- Zalety i wady linii komórkowej HT22
- Zastosowania badawcze linii komórkowej HT22
- Publikacje naukowe dotyczące komórek HT22
- Materiały dotyczące komórek HT22: protokoły, filmy i inne
Ogólne cechy i pochodzenie komórek HT22
W tej części artykułu omówimy pochodzenie i ogólną charakterystykę komórek HT22. Znajomość tych informacji o linii komórkowej jest niezbędna przed rozpoczęciem pracy z nią. Tutaj dowiesz się: Czym są komórki HT22? Jaka jest morfologia komórek hipokampa HT22? Jaka jest wielkość komórek HT22?
HT22 to ciągła linia komórkowa pochodząca z obszaru hipokampu mózgu myszy. Jest to subklon macierzystej linii komórkowej HT-4, opracowanej poprzez unieśmiertelnienie mysich tkanek neuronalnych za pomocą wrażliwego na temperaturę antygenu T wirusa małpiego 40 (SV40) z rodziny poliomawirusów.
Komórki te różnią się od dojrzałych komórek hipokampa, ponieważ nie posiadają receptorów glutaminianowych i cholinergicznych, jak dojrzałe neurony pochodzące z hipokampa. W związku z tym nie nadają się do badań związanych z pamięcią [1].
Komórki HT22 mają wygląd przypominający komórki nabłonkowe.
Informacje dotyczące hodowli linii komórkowej HT22
Komórki HT22 są wykorzystywane w laboratoriach badawczych zajmujących się neuronauką. Przed rozpoczęciem hodowli tych komórek naukowcy poszukują niezbędnych informacji dotyczących hodowli komórek, które ułatwią im pracę i zwiększą jej wydajność. W tej sekcji omówiono wszystkie kluczowe kwestie związane z hodowlą komórek HT22. Dowiesz się: Jaki jest czas podwojenia komórek HT22? Jak hodować komórki HT22? Jaki jest protokół hodowli komórek HT22? Jakie są pożywki do hodowli komórek HT22?
Kluczowe kwestie dotyczące hodowli komórek HT22
Czas podwojenia:
Czas podwojenia komórek HT22 wynosi około 15 godzin.
Komórki przylegające czy w zawiesinie:
Komórki HT22 są komórkami przylegającymi.
Współczynnik subkultury:
Współczynnik subkultury dla komórek hipokampa HT22 wynosi od 1:3 do 1:6. Krótko mówiąc, usuwa się pożywkę, a komórki przylegające płucze się 1 x PBS. Do kolby dodaje się roztwór rozdzielający Accutase, a komórki inkubuje się przez 8 do 10 minut w temperaturze otoczenia. Następnie dodaje się świeżą pożywkę hodowlaną, a komórki zbiera się do fiolki w celu odwirowania. Uzyskany osad komórkowy ostrożnie zawiesza się ponownie, a komórki przenosi się do kolby hodowlanej w celu wzrostu.
Pożywka wzrostowa:
Do hodowli komórek HT22 stosuje się pożywkę DMEM. W celu zapewnienia optymalnego wzrostu komórek uzupełnia się ją 10% FBS, 4,5 g/l glukozy, 4 mM L-glutaminy, 1,5 g/l NaHCO3 i 1,0 mM pirogronianu sodu.
Warunki wzrostu:
Hodowle komórek HT22 są przechowywane w inkubatorze z nawilżaniem (temperatura 37 °C) z dopływem 5% CO2.
Przechowywanie:
Zamrożone komórki HT22 można przechowywać w temperaturze poniżej -150 °C w fazie gazowej ciekłego azotu lub w elektrycznej zamrażarce o bardzo niskiej temperaturze przez długi czas.
Proces zamrażania i pożywka:
Komórki HT22 można zamrażać w pożywkach CM-1 lub CM-ACF przy użyciu metody powolnego zamrażania. Proces ten pozwala na spadek temperatury próbki o zaledwie 1 °C na minutę, chroni komórki przed szokiem termicznym i pomaga zachować ich żywotność.
Proces rozmrażania:
Komórki rozmraża się w łaźni wodnej o temperaturze 37 °C przez 40 do 60 sekund, aż pozostanie niewielka grudka lodu. Następnie do komórek dodaje się pożywkę hodowlaną i odwirowuje się je w celu usunięcia składników pożywki zamrażającej. Osad komórkowy zawiesza się ponownie, a komórki przelewa się do nowej kolby zawierającej pożywkę hodowlaną. Następnie komórki inkubuje się w temperaturze 37 °C w inkubatorze przez co najmniej 24 godziny.
Poziom bezpieczeństwa biologicznego:
Do hodowli komórek HT22 wymagane są warunki laboratoryjne zgodne z poziomem bezpieczeństwa biologicznego 1.
Zalety i wady linii komórkowej HT22
Komórki hipokampa HT22 mają pewne zalety i wady, które odróżniają je od innych linii komórek neuronalnych. Poniżej wymieniono niektóre istotne zalety i wady tej linii komórkowej.
Zalety
Zalety mysiej linii komórkowej HT22 to:
-
Szybkie tempo wzrostu
Komórki HT22 mają czas podwojenia wynoszący 15 godzin, co umożliwia szybkie i wydajne prowadzenie eksperymentów oraz pomaga w terminowym uzyskiwaniu wyników badań.
-
Nieśmiertelność
HT22 to nieśmiertelna linia komórkowa, co zapewnia ciągły wzrost przez długi czas. Zapewnia to stałą dostępność komórek, zmniejsza czas i koszty oraz ułatwia długoterminowe eksperymenty z powtarzalnymi wynikami.
Wady
Wady komórek HT22 to:
-
Mysie pochodzenie
Linia komórkowa HT22 pochodzi z tkanki hipokampu myszego mózgu, co może nie odzwierciedlać w pełni złożoności fizjologii i zachowania ludzkich komórek neuronowych, ograniczając jej znaczenie translacyjne.
4. Zastosowania badawcze linii komórkowej HT22
Komórki HT22 są szeroko stosowane w badaniach neurobiologicznych. W tej części artykułu omówiono kilka obiecujących zastosowań tej linii komórkowej:
- Badania w dziedzinie neuronauki: Komórki HT22 są szeroko stosowane w badaniach nad chorobami neurodegeneracyjnymi, tj. chorobą Alzheimera i chorobą Parkinsona. Są one uważane za cenne narzędzie badawcze do badania mechanizmów neurotoksyczności i stresu oksydacyjnego związanych z tymi chorobami. Badania przeprowadzone w 2020 r. wykazały, że szlak PI3K/AKT/CREB bierze udział w toksyczności neuronalnej wywołanej hiperglikemią w komórkach HT22 [2]. Podobnie, w niedawnym badaniu zasugerowano, że szlak Nrf2/HO-1 oraz oś sygnałowa NF-κB odgrywają znaczącą rolę w toksyczności beta-amyloidu w komórkach HT22 [3].
- Badania przesiewowe leków: Komórki HT22 są szeroko stosowane do testowania i przesiewania leków. Pomagają one naukowcom w identyfikacji potencjalnych środków terapeutycznych wykazujących działanie neuroprotekcyjne w walce z chorobami neurodegeneracyjnymi. W badaniu przeprowadzonym w 2019 r. zbadano potencjał neuroprotekcyjny związku tetrahydrokurkuminy w komórkach hipokampa HT22 poddanych działaniu glutaminianu. W tym przypadku glutaminian wywołuje stres oksydacyjny w komórkach HT22 i powoduje śmierć komórek poprzez aktywację kinaz białkowych aktywowanych mitogenem [4].
5. Publikacje naukowe dotyczące linii komórkowej HT22
Oto kilka interesujących artykułów naukowych dotyczących linii komórkowej HT22:
W badaniu opublikowanym w International Journal of Molecular Medicine (2019) zaproponowano neuroprotekcyjny potencjał krocyny, związku wyizolowanego z Crocus sativus L., w komórkach HT22 uszkodzonych przez L-glutaminian.
W publikacji w czasopiśmie „Neuropharmacology” (2018) stwierdzono, że pochodne oksindolu chronią przed śmiercią komórek HT22 wywołaną stresem oksydacyjnym.
Artykuł ten został opublikowany w czasopiśmie „Journal of Ginseng Research” w 2019 roku. W badaniu tym zbadano neuroprotekcyjne działanie naturalnego produktu, ginsenozydu Rb2, z wykorzystaniem linii komórkowej HT22. Badanie wykazało, że ginsenozyd Rb2 skutecznie zmniejszał stres oksydacyjny wywołany glutaminianem oraz śmierć komórek w mysich komórkach hipokampa HT22.
W badaniu opublikowanym w czasopiśmie „Ecotoxicology and Environmental Safety” (2021) oceniono potencjał cytotoksyczny nanocząstek srebra w linii komórkowej HT22.
Ferrostatyna-1 chroni komórki HT-22 przed toksycznością oksydacyjną
Ten artykuł naukowy został opublikowany w 2020 r. w czasopiśmie „Neural regeneration research”. Sugeruje on, że ferrostatyna-1, inhibitor ferroptozy, zapobiega toksyczności oksydacyjnej w komórkach hipokampa HT22.
Materiały dotyczące komórek HT22: protokoły, filmy i inne
Niektóre zasoby internetowe dotyczące komórek HT22 wyjaśniają protokoły ich transfekcji, różnicowania i hodowli komórkowej:
- Transfekcja HT22: Ten dokument zawiera zoptymalizowany protokół transfekcji HT22 w 24- i 96-dołkowych płytkach do hodowli komórkowej.
- Różnicowanie komórek HT22: Ten artykuł zawiera wyczerpujące informacje na temat protokołu różnicowania komórek HT22.
Poniższy link zawiera protokół hodowli komórek HT22:
- Subkultury komórek HT22: ten link pomoże Ci poznać protokół subkultury linii komórkowej HT22. Ponadto pomoże Ci on w nauce protokołu indukowania neurotoksyczności w komórkach.
- Komórki hipokampa HT22: Ta strona internetowa zawiera wiele przydatnych informacji na temat czasu podwojenia komórek HT22, pożywek i protokołów hodowli komórkowej.
Referencje
- He, M. i in., Różnicowanie powoduje podatność na ekscytotoksyczność w neuronach HT22. Neural Regen Res, 2013. 8(14): s. 1297-306.
- Zhang, S. i in., Fisetina zapobiega neurotoksyczności komórek HT22 wywołanej wysokim poziomem glukozy poprzez szlak sygnałowy PI3K/Akt/CREB. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: s. 241.
- Zhang, R.-l. i in., Ochronne działanie berberyny przed neurotoksycznością wywołaną przez β-amyloid w komórkach HT22 poprzez szlak Nrf2/HO-1. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: s. 106-210.
- Park, C.-H. i in., Neuroprotekcyjne działanie tetrahydrokurkuminy przeciwko stresowi oksydacyjnemu wywołanemu przez glutaminian w komórkach HT22 hipokampa. Molecules, 2019. 25(1): s. 144.