Linia komórkowa HT22
HT22 to mysia neuronalna linia komórkowa powszechnie stosowana w badaniach neurobiologicznych. Jest ona cenna do badania zaburzeń neurogeneracyjnych i testowania potencjalnych terapii lub zabiegów neuroprotekcyjnych. Poza tym, komórki HT22 są wrażliwe na glutaminian, dzięki czemu są wykorzystywane do badania toksyczności wywołanej glutaminianem lub uszkodzenia neuronów.
W tym artykule podkreślono najważniejsze aspekty komórek HT22, które mogą pomóc w pracy badawczej. Omówione zostaną głównie
- Ogólne atrybuty i pochodzenie komórek HT22
- Informacje na temat hodowli linii komórkowej HT22
- Zalety i wady linii komórkowej HT22
- Zastosowania badawcze linii komórkowej HT22
- Publikacje badawcze dotyczące komórek HT22
- Zasoby dotyczące komórek HT22: Protokoły, filmy i nie tylko
1. Ogólne cechy i pochodzenie komórek HT22
Ta sekcja artykułu rzuci światło na pochodzenie i ogólną charakterystykę komórek HT22. Znajomość tych informacji o linii komórkowej jest niezbędna przed rozpoczęciem pracy nad nią. Tutaj dowiesz się: Czym są komórki HT22? Jaka jest morfologia komórek hipokampa HT22? Jaki jest rozmiar komórek HT22?
HT22 to ciągła linia komórkowa pochodząca z regionu hipokampa mózgu myszy. Jest to podklon macierzystej linii komórkowej HT-4 opracowanej przez unieśmiertelnienie mysich tkanek neuronalnych za pomocą wrażliwego na temperaturę antygenu T poliomawirusa symian virus 40 (SV40).
Komórki te różnią się od dojrzałych komórek hipokampa brakiem receptorów glutaminianowych i cholinergicznych, podobnie jak dojrzałe neurony pochodzenia hipokampalnego. W związku z tym nie nadają się do badań związanych z pamięcią [1].
Komórki HT22 mają wygląd przypominający komórki nabłonkowe.
2. Informacje dotyczące hodowli linii komórkowej HT22
Komórki HT22 są wykorzystywane w laboratoriach badawczych neurobiologii. Przed przystąpieniem do hodowli tych komórek badacze poszukują niezbędnych informacji na temat hodowli komórek, które ułatwią im pracę i uczynią ją wydajną. Ta sekcja obejmuje wszystkie kluczowe punkty dotyczące hodowli komórek HT22. Dowiesz się: Jaki jest czas podwojenia komórek HT22? Jak hodować komórki HT22? Jaki jest protokół hodowli komórek HT22? Co to jest pożywka dla komórek HT22?
Kluczowe punkty dotyczące hodowli komórek HT22
|
Czas podwojenia: |
Czas podwojenia komórek HT22 wynosi około 15 godzin. |
|
Przylegające lub w zawiesinie: |
Komórki HT22 są przylegające. |
|
Stosunek podhodowli: |
Stosunek podhodowli dla komórek hipokampa HT22 wynosi od 1:3 do 1:6. W skrócie, pożywka jest usuwana, a przylegające komórki są płukane 1 x PBS. Roztwór dysocjujący Accutase jest dodawany do kolby, a komórki są inkubowane przez 8 do 10 minut w temperaturze otoczenia. Następnie dodawane jest świeże podłoże hodowlane, a komórki są zbierane do fiolki w celu odwirowania. Uzyskany osad komórkowy jest ostrożnie zawieszany, a komórki są dozowane do kolby hodowlanej w celu wzrostu. |
|
Podłoże hodowlane: |
Do hodowli komórek HT22 używana jest pożywka DMEM. Jest ona uzupełniona 10% FBS, 4,5 g/L glukozy, 4 mM L-glutaminy, 1,5 g/L NaHCO3 i 1,0 mM pirogronianu sodu dla optymalnego wzrostu komórek. |
|
Warunki wzrostu: |
Hodowle komórkowe HT22 są przechowywane w nawilżanym inkubatorze (temperatura 37°C) z 5%podażą CO2 . |
|
Przechowywanie: |
Zamrożone komórki HT22 mogą być przechowywane w temperaturze poniżej -150 °C w fazie gazowej ciekłego azotu lub w zamrażarce elektrycznej o bardzo niskiej temperaturze przez długi czas. |
|
Proces zamrażania i medium: |
Komórki HT22 mogą być zamrażane w podłożu CM-1 lub CM-ACF przy użyciu metody powolnego zamrażania. Proces ten pozwala na obniżenie temperatury próbki tylko o 1°C na minutę, chroni komórki przed szokiem i pomaga zachować ich żywotność. |
|
Proces rozmrażania: |
Komórki są rozmrażane w łaźni wodnej o temperaturze 37 °C przez 40 do 60 sekund, aż do pozostawienia niewielkiej grudki lodu. Następnie do komórek dodawana jest pożywka hodowlana i są one odwirowywane w celu usunięcia składników pożywki zamrażającej. Osad komórek jest ponownie zawieszany, a komórki są wlewane do nowej kolby zawierającej pożywkę. Następnie komórki są inkubowane w temperaturze 37 °C w inkubatorze przez co najmniej 24 godziny. |
|
Poziom bezpieczeństwa biologicznego: |
Hodowla komórek HT22 wymaga warunków laboratoryjnych na poziomie bezpieczeństwa biologicznego 1. |
3. Zalety i wady linii komórkowej HT22
Komórki hipokampa HT22 mają pewne zalety i wady, które odróżniają je od innych neuronalnych linii komórkowych. Poniżej wymieniono niektóre godne uwagi zalety i wady tej linii komórkowej.
Zalety
Zalety mysiej neuronalnej linii komórkowej HT22 są następujące:
-
Szybkie tempo wzrostu
Komórki HT22 mają czas podwojenia wynoszący 15 godzin, umożliwiając szybkie i wydajne eksperymenty oraz pomagając w uzyskaniu wyników badań na czas.
-
Immortalizacja
HT22 to unieśmiertelniona linia komórkowa, zapewniająca ciągły wzrost przez dłuższy czas. Zapewnia to stałą dostępność komórek, zmniejsza czas i koszty oraz ułatwia długoterminowe eksperymenty ze spójnymi wynikami.
Wady
Wady komórek HT22 są następujące:
-
Pochodzenie mysie
Linia komórkowa HT22 została uzyskana z tkanki hipokampa mózgu myszy, co może nie w pełni odzwierciedlać złożoność fizjologii i zachowania ludzkich komórek neuronowych, ograniczając ich znaczenie translacyjne.
4 Zastosowania badawcze linii komórkowej HT22
Komórki HT22 są szeroko stosowane w badaniach neurobiologicznych. W tej części artykułu omówiono kilka obiecujących zastosowań tej linii komórkowej:
- Badania neurobiologiczne: Komórki HT22 są szeroko stosowane w badaniach nad chorobami neurodegeneracyjnymi, tj. chorobą Alzheimera i Parkinsona. Są one uważane za cenne narzędzie badawcze do badania neurotoksyczności i mechanizmów stresu oksydacyjnego związanych z tymi chorobami. Badania przeprowadzone w 2020 r. wykazały, że szlak PI3K/AKT/CREB jest zaangażowany w toksyczność neuronalną indukowaną hiperglikemią w komórkach HT22 [2]. Podobnie, w niedawnym badaniu zaproponowano, że szlak Nrf2/HO-1 i oś sygnalizacyjna NF- κB odgrywają znaczącą rolę w toksyczności amyloidu beta HT22 [3].
- Badanie przesiewowe leków: Komórki HT22 są szeroko stosowane do testowania leków i badań przesiewowych. Pomagają one badaczom zidentyfikować potencjalne środki terapeutyczne wykazujące działanie neuroprotekcyjne w zwalczaniu chorób neurodegeneracyjnych. W badaniu przeprowadzonym w 2019 r. zbadano potencjał neuroprotekcyjny związku tetrahydro-kurkuminy w komórkach hipokampa HT22 poddanych działaniu glutaminianu. W tym przypadku glutaminian indukuje stres oksydacyjny w komórkach HT22 i powoduje śmierć komórek poprzez aktywację kinaz białkowych aktywowanych mitogenami [4].
5. Publikacje naukowe dotyczące komórek HT22
Oto kilka interesujących artykułów naukowych dotyczących linii komórkowej HT22:
W badaniu opublikowanym w International Journal of Molecular Medicine (2019) zaproponowano neuroprotekcyjny potencjał krocyny, związku wyizolowanego z Crocus sativus L. wuszkodzonychL-glutaminianemkomórkach HT22.
Publikacja w Neuropharmacology (2018) donosi, że pochodne oksindolu chronią przed śmiercią komórek HT22 indukowaną stresem oksydacyjnym.
Ten artykuł badawczy został opublikowany w Journal of Ginseng Research w 2019 roku. W badaniu tym zbadano neuroprotekcyjne działanie naturalnego produktu, ginsenozydu Rb2, przy użyciu linii komórkowej HT22. Badanie wykazało, że ginsenozyd rb2 skutecznie zmniejszał stres oksydacyjny indukowany glutaminianem i śmierć komórek w mysich komórkach hipokampa HT22.
W badaniu opublikowanym w czasopiśmie Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) oceniono potencjał cytotoksyczny nanocząstek srebra w linii komórkowej HT22.
Ferrostatyna-1 chroni komórki HT-22 przed toksycznością oksydacyjną
Ten artykuł badawczy został opublikowany w 2020 r. w Neural Regeneration Research. Zaproponowano w nim, że ferrostatyna-1, inhibitor ferroptozy, zapobiega toksyczności oksydacyjnej w komórkach hipokampa HT22.
6. Zasoby dla komórek HT22: Protokoły, filmy i nie tylko
Niektóre zasoby internetowe dotyczące komórek HT22 wyjaśniają ich transfekcję, różnicowanie i protokoły hodowli komórkowej:
- Transfekcja HT22: Ten dokument zawiera zoptymalizowany protokół transfekcji HT22 w 24- i 96-dołkowych płytkach do hodowli komórkowej.
- Różnicowanie komórek HT22: Ten artykuł zawiera szczegółowe informacje na temat protokołu różnicowania komórek HT22.
Poniższy link zawiera protokół hodowli komórek HT22:
- Podhodowla komórek HT22: Ten link pomoże ci poznać protokół podhodowli dla linii komórkowej HT22. Ponadto, pomoże on w zapoznaniu się z protokołem indukowania neurotoksyczności w komórkach.
- Komórki hipokampa HT22: Ta strona internetowa zawiera wiele przydatnych informacji na temat czasu podwojenia komórek HT22, mediów i protokołów hodowli komórkowej.
Odniesienia
- He, M., et al., Differentiation renders susceptibility to excitotoxicity in HT22 neurons. Neural Regen Res, 2013. 8(14): p. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetin zapobiega neurotoksyczności komórek HT22 indukowanej wysokim poziomem glukozy poprzez szlak sygnałowy PI3K/Akt/CREB. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: p. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Ochronne działanie berberyny na neurotoksyczność indukowaną β-amyloidem w komórkach HT22 poprzez szlak Nrf2/HO-1. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: p. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Neuroprotekcyjne działanie tetrahydrokurkuminy przeciwko stresowi oksydacyjnemu indukowanemu glutaminianem w komórkach HT22 hipokampa. Molecules, 2019. 25(1): p. 144.