Komórki DLD-1: Zastosowania i spostrzeżenia dotyczące komórek DLD-1 w badaniach nad rakiem jelita grubego
DLD-1 to ludzka linia komórkowa raka jelita grubego, powszechnie stosowana w badaniach nad rakiem. Stanowi ona cenne narzędzie do badania różnych aspektów raka jelita grubego, w tym rozwoju nowotworu, jego progresji, podstawowych mechanizmów molekularnych oraz odpowiedzi na środki terapeutyczne. Dzięki temu DLD-1 odgrywa kluczową rolę w zrozumieniu choroby i opracowywaniu potencjalnych strategii leczenia.
- Pożywka
- Do hodowli komórek DLD-1 stosuje się pożywkę RPMI 1640 z dodatkami, w tym 10% surowicy płodowej bydlęcej (FBS), 2,1 mM stabilnej glutaminy i 2,0 g/l NaHCO3. Pożywkę należy wymieniać 2–3 razy w tygodniu.
- Czas podwojenia
- Czas podwojenia DLD-1 wynosi około 15 godzin.
- Typ wzrostu
- DLD-1 to przylegająca ludzka linia komórkowa raka jelita grubego. Komórki rosną w postaci monowarstw.
- Poziom bezpieczeństwa biologicznego
- BSL-1
- Dostępne w
- Cytion — Zamów DLD-1
- Ogólna charakterystyka i pochodzenie komórek DLD-1
- Informacje dotyczące hodowli linii komórkowej DLD-1
- Linia komórkowa DLD-1: zalety i ograniczenia
- Zastosowania badawcze linii komórkowej DLD-1
- 5. Publikacje naukowe dotyczące komórek DLD-1
- Materiały dotyczące linii komórkowej DLD-1: protokoły, filmy i inne
- Często zadawane pytania
Ogólna charakterystyka i pochodzenie komórek DLD-1
Przed rozpoczęciem pracy z linią komórkową naukowcy w pierwszej kolejności zwracają uwagę na jej pochodzenie i ogólne cechy. Ta sekcja artykułu stanowi szczegółowe wprowadzenie do linii komórkowej DLD-1. Obejmuje ona następujące często zadawane pytania: Czym są komórki DLD-1? Czym jest linia komórkowa nowotworowa DLD-1? Jakie są mutacje linii komórkowej DLD-1? Jaka jest wielkość komórki DLD-1? Jaka jest morfologia komórek DLD-1?
- DLD-1, linia komórek raka jelita grubego, pochodzi z jelita grubego 67-letniego pacjenta z gruczolakorakiem jelita grubego. Została wyizolowana przez D.L. Dextera i współpracowników w latach 1977-1979. Linia ta ma to samo pochodzenie co linie komórkowe HCT-8, HCT-15 i HRT-18.
- Podobnie jak nowotwory jelita grubego, komórki DLD-1 wykazują fenotyp niestabilności mikrosatelitarnej [1].
- Mutacje DLD-1 obejmują KRAS, P53, BRAF, BRCA1 i BRCA2. Ze względu na status P53 w DLD-1 oraz mutacje DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 i DLD-1 KRAS komórki te są uważane za idealne do badań nad rakiem.
- Komórki te posiadają morfologię podobną do nabłonkowej.
- Rozmiar komórek linii DLD-1 wynosi około 15 µm.
- Ludzka linia komórkowa raka jelita grubego DLD-1 posiada kariotyp pseudodiploidalny. Około 86% komórek posiada modalną liczbę chromosomów wynoszącą 46. Jednak w 17,1% populacji komórek może również występować poliploidia.
Informacje dotyczące hodowli linii komórkowej DLD-1
Przed rozpoczęciem hodowli jakiejkolwiek linii komórkowej należy zapoznać się z jej podstawowymi wymaganiami dotyczącymi hodowli. W niniejszym rozdziale omówiono najważniejsze kwestie, które należy poznać przed rozpoczęciem pracy z linią komórkową DLD-1. Obejmują one: Jaki jest czas podwojenia DLD-1? Czym jest pożywka do hodowli DLD-1? Jaka jest gęstość wysiewu komórek DLD-1? Jak hoduje się komórki DLD-1?
Kluczowe kwestie dotyczące hodowli komórek DLD-1
Czas podwojenia:
Czas podwojenia DLD-1 wynosi około 15 godzin.
Komórki przylegające czy w zawiesinie:
DLD-1 to przylegająca ludzka linia komórkowa raka jelita grubego. Komórki rosną w postaci monowarstw.
Gęstość wysiewu:
Komórki DLD-1 wysiewa się w gęstości od 1 do 2 x 104 komórek/cm2. Komórki przylegające przemywa się 1x buforem fosforanowo-solnym (PBS) i inkubuje z roztworem do pasażowania (Accutase) w temperaturze otoczenia. Po inkubacji trwającej od 8 do 10 minut odłączone komórki dodaje się do pożywki hodowlanej i odwirowuje. Następnie osad komórkowy ostrożnie zawiesza się ponownie, a komórki przelewa do nowych naczyń hodowlanych zawierających pożywkę wzrostową.
Pożywka wzrostowa:
Do hodowli komórek DLD-1 stosuje się RPMI 1640 z dodatkami, w tym 10% surowicą płodową bydlęcą (FBS), 2,1 mM stabilną glutaminą i 2,0 g/l NaHCO3. Pożywkę należy wymieniać 2–3 razy w tygodniu.
Warunki wzrostu:
Hodowle DLD-1 utrzymuje się w inkubatorze z nawilżaniem w temperaturze 37°C z dopływem 5% CO2.
Przechowywanie:
Komórki DLD-1 przechowuje się w fazie gazowej ciekłego azotu lub w elektrycznej zamrażarce ultra-niskotemperaturowej (w temperaturze poniżej -150°C).
Proces zamrażania i pożywka:
Do zamrażania komórek DLD-1 można używać pożywek zamrażających CM-1 lub CM-ACF. Zawsze zaleca się powolny proces zamrażania, pozwalający na stopniowy spadek temperatury o 1°C, co zapobiega szokowi termicznemu komórek i chroni ich żywotność.
Proces rozmrażania:
Zamrożone komórki rozmraża się w łaźni wodnej ustawionej na temperaturę 37 °C przez 40 do 60 sekund, aż pozostanie niewielka grudka lodu. Następnie komórki dodaje się do świeżego podłoża i odwirowuje. Ten etap jest konieczny, aby usunąć ze komórek składniki podłoża do zamrażania. Zebrane komórki zawiesza się w podłożu wzrostowym i umieszcza w kolbie w celu hodowli.
Poziom bezpieczeństwa biologicznego:
Linia komórkowa DLD-1 jest utrzymywana w laboratoriach o poziomie bezpieczeństwa biologicznego 1.
Linia komórkowa DLD-1: zalety i ograniczenia
W tej części artykułu omówimy zalety i ograniczenia linii komórkowej raka jelita grubego DLD-1.
Zalety
Główne zalety linii komórkowej DLD-1 to:
Model raka jelita grubego
Komórki DLD-1 posiadają mutacje powszechnie występujące u pacjentów z rakiem jelita grubego, takie jak mutacja DLD-1 KRAS, DLD-1 BRCA i DLD-1 BRCA2. Ta zbieżność sprawia, że są one klinicznie odpowiednim modelem komórkowym do badania tej choroby.
Linia komórkowa o właściwościach nowotworowych
Komórki DLD-1 są nowotworowe. Po wstrzyknięciu myszom nagim mogą powodować powstawanie nowotworów. Dlatego naukowcy wykorzystują te komórki do opracowywania modeli nowotworów z przeszczepami heterogenicznymi, które pomagają badać powstawanie, rozwój i progresję nowotworów in vivo.
Ograniczenia
Ograniczenia związane z komórkami DLD-1 to:
Heterogeniczność
Populacje komórek raka jelita grubego DLD-1 wykazują heterogenność genetyczną i fenotypową. Może to wpływać na możliwość uogólnienia wyników badań.
Zastosowania badawcze linii komórkowej DLD-1
Linia komórkowa DLD-1 oferuje szeroki zakres zastosowań w badaniach nad rakiem. W tej sekcji omówiono niektóre z najważniejszych zastosowań.
- Badania nad rakiem: Komórki DLD-1 stanowią cenny model in vitro pozwalający zrozumieć mechanizmy molekularne leżące u podstaw wzrostu, rozwoju i progresji raka jelita grubego. Ponadto są one wykorzystywane do badania ekspresji genów, szlaków sygnałowych oraz wpływu określonych mutacji genetycznych na zachowanie komórek nowotworowych. W badaniach przeprowadzonych w 2022 r. zaobserwowano, że kaskada sygnałowa PI3K/Akt/YAP reguluje migrację i inwazję linii komórkowej raka jelita grubego DLD-1 [2].
- Opracowywanie leków: Naukowcy wykorzystują linię komórkową DLD-1 do testowania skuteczności leków przeciwnowotworowych i oceny ich potencjału w leczeniu raka jelita grubego. Pomaga to w opracowywaniu leków i skutecznym zwalczaniu choroby. W badaniu przeprowadzonym w 2022 r. wykorzystano linię komórek nowotworowych DLD-1 i zbadano działanie przeciwnowotworowe ftalocianin krzemowych, związków syntetyzowanych chemicznie. Wyniki badania sugerowały, że związki te są silnymi środkami przeciwnowotworowymi [3]. Co ciekawe, w innym badaniu odkryto potencjał przeciwnowotworowy białka P8 pochodzącego z probiotyków przy użyciu komórek DLD-1 [4].
5. Publikacje naukowe dotyczące komórek DLD-1
W tej sekcji przedstawimy kilka interesujących i często cytowanych publikacji dotyczących linii komórkowej raka jelita grubego DLD-1.
Publikacja ta ukazała się w czasopiśmie „Journal of Biologically Active Products from Nature” (2022). Badanie wykazało, że diosmina, flawonoid, indukowała śmierć komórek w komórkach DLD-1, a także powodowała zatrzymanie cyklu komórkowego; w związku z tym może być potencjalnym środkiem przeciwnowotworowym.
Bromelaina skutecznie hamuje raka jelita grubego z mutacją Kras poprzez stymulację ferroptozy
W badaniu opublikowanym w czasopiśmie „Animal Cells and Systems” (2018) wysunięto hipotezę, że bromelaina, enzym, hamuje mutację DLD-1 KRAS i wywiera silne działanie cytotoksyczne.
Ten artykuł naukowy został opublikowany w 2019 roku w czasopiśmie „Environmental Toxicology”. W badaniu zbadano działanie przeciwnowotworowe naturalnego związku, bergaptenu, przy użyciu linii komórkowej raka jelita grubego DLD-1.
Badanie opublikowane w czasopiśmie „Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials” (2023) wykazało, że nanokompozyty kurkuminy i tlenku żelaza są wysoce skuteczne przeciwko komórkom raka jelita grubego DLD-1.
Ten artykuł naukowy został opublikowany w 2020 r. w czasopiśmie „Turkish Journal of Biology”. W badaniu wysunięto hipotezę, że naturalny produkt, epibrassinolid, poprzez aktywację AKT w komórkach DLD-1 stymuluje autofagię związaną z poliaminami.
Materiały dotyczące linii komórkowej DLD-1: protokoły, filmy i inne
Poniżej znajduje się kilka zasobów dotyczących komórek DLD-1:
- Transfekcja DLD-1: Ten film instruktażowy to kompleksowy przewodnik po protokole transfekcji in vitro DLD-1.
- Komórki DLD-1: Ten artykuł naukowy krótko opisuje wymagania dotyczące hodowli komórek DLD-1, w tym pożywki i warunki hodowli. Ponadto może pomóc w zapoznaniu się z protokołem transfekcji stosowanym w przypadku komórek DLD-1.
Poniższe linki zawierają protokół hodowli DLD-1, komórek raka jelita grubego pochodzenia ludzkiego.
- Linia komórkowa DLD-1: Ta strona internetowa zawiera podstawowe informacje na temat linii komórkowej DLD-1. Pomoże Ci ona zapoznać się z różnymi protokołami hodowli komórek DLD-1, w tym z subkulturą oraz postępowaniem z hodowlami kriokonserwowanymi i proliferującymi.
Referencje
- Gavrilas, L.I. i in., Geny proapoptotyczne jako nowe cele dla terapii pojedynczych i skojarzonych z użyciem resweratrolu i kurkuminy w raku jelita grubego. Food & function, 2019. 10(6): s. 3717-3726.
- Takeda, T. i in., Sygnalizacja PI3K/Akt/YAP sprzyja migracji i inwazji komórek raka jelita grubego DLD-1. Oncology Letters, 2022. 23(4): s. 1-9.
- Farajzadeh, N. i in., Działanie przeciwnowotworowe nowych ftalocianin krzemowych przeciwko linii komórkowej gruczolakoraka jelita grubego (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): s. 19863-19873.
- An, B.C. i in., Rola białka P8 pochodzącego z probiotyków w zwalczaniu raka jelita grubego w linii komórkowej DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): s. 9857.