Komórki AGS – wykorzystanie komórek AGS pochodzących z gruczolakoraka żołądka w badaniach nad rakiem
Komórki AGS stanowią ludzką linię komórkową gruczolakoraka żołądka, która jest szeroko stosowana w badaniach biomedycznych. Wykorzystuje się ją w szczególności do badania biologii raka żołądka, w tym wzrostu, rozwoju i progresji nowotworu oraz interwencji terapeutycznych. Ponadto służy do badania interakcji między gospodarzem a patogenem.
- Pożywka
- Do hodowli komórek AGS stosuje się pożywkę DMEM zawierającą 10% FBS, 4 mM L-glutaminy, 4,5 g/l glukozy, 1,5 g/l NaHCO3 i 1,0 mM pirogronianu sodu. Pożywkę należy wymieniać 2–3 razy w tygodniu.
- Czas podwojenia
- Czas podwojenia komórek AGS wynosi od 24 do 48 godzin.
- Typ wzrostu
- Komórki AGS są komórkami przylegającymi. Tworzą one monowarstwy.
- Poziom bezpieczeństwa biologicznego
- BSL-2
- Dostępne w
- Cytion — Zamów AGS
- Ogólna charakterystyka i pochodzenie komórek AGS
- Informacje dotyczące hodowli linii komórkowej AGS
- Linia komórkowa AGS: zalety i ograniczenia
- Zastosowania komórek AGS
- 5. Publikacje naukowe dotyczące linii komórkowej AGS
- Materiały dotyczące linii komórkowej AGS: protokoły, filmy i inne
- Często zadawane pytania
Ogólna charakterystyka i pochodzenie komórek AGS
Przed rozpoczęciem pracy z linią komórkową konieczna jest znajomość jej pochodzenia i ogólnej charakterystyki. W tej sekcji omówiono następujące zagadnienia: Czym są komórki AGS? Jakie jest pochodzenie komórek AGS? Jaka jest morfologia linii komórkowej AGS?
- Linia komórkowa AGS została wyizolowana z tkanki żołądka 54-letniej kobiety rasy kaukaskiej z gruczolakorakiem żołądka. Wyizolowano ją w 1979 roku [1].
- Komórki AGS mają morfologię podobną do komórek nabłonkowych.
- Komórki AGS nabłonka żołądkowego są hiperdiploidalne. Modalna liczba chromosomów dla komórek AGS wynosi 49, co występuje w prawie 60% komórek. Poliploidia występuje również w około 3,6% komórek.
Informacje dotyczące hodowli linii komórkowej AGS
Aby właściwie obchodzić się z linią komórkową i nią zarządzać, należy znać podstawowe zasady jej hodowli. W szczególności należy dowiedzieć się: Jaki jest czas podwojenia komórek AGS? Jakie jest podłoże hodowlane komórek AGS? Jak przeprowadza się subkulturę komórek AGS? Jakie podłoża do zamrażania stosuje się w przypadku komórek nabłonka żołądkowego AGS?
Kluczowe informacje dotyczące hodowli komórek AGS
Czas podwojenia:
Czas podwojenia komórek AGS wynosi od 24 do 48 godzin.
Komórki przylegające lub w zawiesinie:
Komórki AGS są komórkami przylegającymi. Tworzą one monowarstwy.
Gęstość wysiewu:
Komórki AGS wysiewa się w gęstości 1 x 104 komórek/cm2. Przy tej gęstości komórki tworzą zlewającą się monowarstwę w ciągu 3 do 5 dni. Po usunięciu starej pożywki komórki płucze się 1 x PBS i inkubuje z roztworem dysocjującym Accutase. Oddzielone komórki zawieszono w pożywce hodowlanej i odwirowano. Osad komórkowy ponownie zawieszono, a po zliczeniu komórek AGS przeniesiono je do nowej kolby w celu dalszego wzrostu.
Pożywka wzrostowa:
Do hodowli komórek AGS stosuje się pożywkę DMEM zawierającą 10% FBS, 4 mM L-glutaminy, 4,5 g/l glukozy, 1,5 g/l NaHCO3 i 1,0 mM pirogronianu sodu. Pożywkę należy wymieniać 2–3 razy w tygodniu.
Warunki hodowli:
Komórki AGS są przechowywane w nawilżanym inkubatorze (w temperaturze 37°C) z dopływem 5% CO2.
Przechowywanie:
Zamrożone komórki AGS przechowuje się w zamrażarkach elektrycznych w temperaturze poniżej -150°C lub w fazie gazowej ciekłego azotu przez dłuższy czas.
Proces zamrażania i pożywka:
Do zamrażania komórek AGS stosuje się pożywkę CM-1 lub CM-ACF. Zamrażanie komórek odbywa się w procesie powolnego zamrażania, który pozwala na spadek temperatury o zaledwie 1°C na minutę i chroni żywotność komórek.
Proces rozmrażania:
Zamrożone komórki nabłonka żołądkowego są szybko mieszane w łaźni wodnej o temperaturze 37°C przez 40 do 60 sekund. Rozmrożone komórki są ponownie zawieszane w świeżym podłożu hodowlanym i przelewane do nowych kolb w celu wzrostu. Po 24-godzinnej inkubacji pożywkę wymienia się w celu usunięcia składników pożywki zamrażającej. Natomiast rozmrożone komórki odwirowuje się i usuwa elementy pożywki zamrażającej. Następnie zebrane komórki ponownie zawiesza się i umieszcza w kolbie zawierającej pożywkę hodowlaną.
Poziom bezpieczeństwa biologicznego:
Do hodowli komórek AGS niezbędne są warunki laboratoryjne zgodne z poziomem bezpieczeństwa biologicznego 2.
Linia komórkowa AGS: zalety i ograniczenia
W tej części artykułu omówiono niektóre z kluczowych zalet i ograniczeń związanych z komórkami AGS.
Zalety
Główne zalety komórek nabłonka żołądkowego AGS to:
Łatwość hodowli
Linia komórkowa raka żołądka AGS jest łatwa w utrzymaniu w laboratoriach hodowli komórkowej. Nie ma żadnych skomplikowanych i wymagających warunków hodowli. Ponadto wykazuje dobre właściwości wzrostowe, co czyni ją idealnym wyborem do badań nad biologią raka żołądka.
Związek z rakiem żołądka
Komórki AGS pochodzą z ludzkiego gruczolakoraka żołądka, dzięki czemu są szeroko stosowane do badania biologii raka żołądka i interwencji terapeutycznych.
Ograniczenia
Ograniczenia związane z linią komórkową AGS to:
Model komórkowy in vitro
Komórki AGS są hodowane w laboratoriach badań biomedycznych w sztucznych warunkach. Dlatego też mogą one nie odzwierciedlać w pełni mikrośrodowiska raka żołądka in vivo oraz innych interakcji komórkowych i molekularnych.
Zastosowania komórek AGS
Komórki AGS są wykorzystywane przede wszystkim do badań nad biologią raka żołądka. Mają one jednak wiele innych obiecujących zastosowań w dziedzinie biomedycyny. Niektóre z interesujących zastosowań komórek AGS w badaniach naukowych to:
- Badania nad rakiem żołądka: Komórki AGS są doskonałym narzędziem badawczym do analizy mechanizmów komórkowych i molekularnych leżących u podstaw wzrostu, przerzutów i inwazji raka żołądka. Naukowcy wykorzystują również komórki nabłonka żołądkowego AGS do badania różnych procesów komórkowych, mutacji genetycznych i szlaków sygnałowych w rozwoju raka żołądka. Badanie opublikowane w czasopiśmie „Oncology Reports” (2019) wykazało, że mikroRNA-183-5p.1 sprzyja proliferacji, migracji i inwazji komórek nowotworowych poprzez hamowanie kaskady sygnałowej Bcl 2/P53. Ponadto, aby wywołać te efekty, hamuje on również ekspresję genu TPM1. W związku z tym zarówno mikroRNA, jak i TPM1 są proponowane jako skuteczne cele molekularne do opracowywania ukierunkowanych terapii przeciwko rakowi żołądka [2].
- Badania przesiewowe leków: Komórki AGS są powszechnie wykorzystywane do badań przesiewowych nowych i skutecznych leków przeciwnowotworowych stosowanych w leczeniu raka żołądka. Naukowcy oceniają cytotoksyczność i skuteczność potencjalnych leków przy użyciu linii komórkowej AGS. Przeprowadzono również badania mające na celu identyfikację nowych celów molekularnych i opracowanie nowatorskich terapii celowanych w walce z nowotworami żołądka. W badaniach przeprowadzonych w 2021 r. wykorzystano komórki raka żołądka AGS i zbadano działanie terapeutyczne leku paklitaksel. Wyniki badań wykazały, że paklitaksel wywołuje katastrofę mitotyczną, która jest integralnym mechanizmem apoptozy, czyli śmierci komórkowej w komórkach AGS. Ponadto lek ten sprzyjał autofagii w komórkach raka żołądka [3].
- Interakcje między gospodarzem a patogenem: Linia komórek nowotworowych AGS służy również do badania interakcji między gospodarzem a patogenem. Pomaga to naukowcom zrozumieć mechanizmy komórkowe i reakcje związane z infekcją. Na przykład w badaniu przeprowadzonym w 2020 r. zaobserwowano, że małe niekodujące RNA obecne w pęcherzykach błony zewnętrznej Helicobacter pylori zmniejszają wydzielanie interleukiny 8 w ludzkich komórkach AGS [4].
5. Publikacje naukowe dotyczące linii komórkowej AGS
W tej części artykułu omówimy kilka interesujących i najczęściej cytowanych publikacji naukowych dotyczących komórek AGS.
W badaniu opublikowanym w czasopiśmie „Biomedicine & Pharmacotherapy” (2020) wysunięto hipotezę, że salidrosid, związek naturalny, indukuje ochronną autofagię i śmierć komórek w komórkach nabłonka żołądka AGS poprzez modulację szlaku sygnałowego PI3K/AKT/mTOR.
Badanie to zostało opublikowane w czasopiśmie „Biomedicine & Pharmacotherapy” (2018). Zbadano w nim synergiczne działanie przeciwnowotworowe polisacharydu astragalusa i leku apatynibu w komórkach AGS. Wyniki badania wykazały, że astragalus wzmacnia działanie przeciwnowotworowe apatynibu poprzez hamowanie sygnalizacji AKT.
W badaniach opublikowanych w czasopiśmie „Journal of Ethnopharmacology” (2018) wysunięto hipotezę, że kurkuzedoalid, naturalny związek pochodzący z rośliny Curcuma zedoaria Roscoe, przyczynia się do jej potencjału cytotoksycznego wobec komórek AGS.
Nadekspresja FOXA1 hamuje proliferację komórek i EMT komórek ludzkiego raka żołądka AGS
W publikacji w czasopiśmie „Gene” (2018) zasugerowano, że regulacja w górę FOXA1 hamuje proliferację komórek gruczolakoraka żołądka AGS oraz przejście nabłonkowo-mezenchymalne (EMT) i inwazję.
Ten artykuł naukowy został opublikowany w czasopiśmie „International Journal of Medical Microbiology” w 2020 r. W badaniu tym wykorzystano komórki AGS do zbadania interakcji między gospodarzem a patogenem. Wyniki wykazały, że Helicobacter pylori zawiera w pęcherzykach błony zewnętrznej pewne niekodujące RNA, które wpływają na poziom IL-8 w komórkach AGS.
Materiały dotyczące linii komórkowej AGS: protokoły, filmy i inne
Poniżej znajduje się kilka zasobów dotyczących komórek AGS.
- Protokół transfekcji komórek AGS: Ten film jest przewodnikiem krok po kroku, który pomoże Ci poznać protokół transfekcji komórek nabłonka żołądkowego AGS.
Poniższy link zawiera protokół hodowli komórek AGS.
- Protokół hodowli komórek AGS: Ta strona internetowa zawiera przydatne informacje na temat pożywek dla komórek AGS oraz protokołów hodowli komórkowej. W skrócie, zawiera protokół subkultury komórek nabłonka żołądkowego AGS oraz postępowania z proliferującymi i kriokonserwowanymi hodowlami AGS.
- Subkulturowanie komórek AGS: Ta strona szczegółowo wyjaśnia procedurę subkulturowania komórek AGS.
Referencje
- Phuc, B.H. i in., Genomika porównawcza dwóch wietnamskich szczepów Helicobacter pylori, CHC155 pochodzącego od pacjenta z rakiem żołądka poza odźwiernikiem oraz VN1291 pochodzącego od pacjenta z wrzodem dwunastnicy. Scientific Reports, 2023. 13(1): s. 8869.
- Lin, J. i in., miRNA‑183‑5p. 1 sprzyja migracji i inwazji komórek AGS raka żołądka poprzez oddziaływanie na TPM1. Sprostowanie w /10.3892/or. 2020.7902. Oncology reports, 2019. 42(6): s. 2371-2381.
- Khing, T.M. i in., Wpływ paklitakselu na apoptozę, autofagię i katastrofę mitotyczną w komórkach AGS. Scientific Reports, 2021. 11(1): s. 23490.
- Zhang, H. i in., sncRNA pakowane przez pęcherzyki błony zewnętrznej Helicobacter pylori osłabiają wydzielanie IL-8 w komórkach ludzkich. International Journal of Medical Microbiology, 2020. 310(1): s. 151356.