Linia komórkowa A375 – przewodnik po badaniach nad czerniakiem

A375 to ludzka linia komórkowa czerniaka, szeroko stosowana w badaniach toksykologicznych i immunoonkologicznych. Naukowcy wykorzystują tę linię komórkową do badania biologii nowotworów i szlaków sygnałowych, testowania lub przesiewania potencjalnych środków przeciwnowotworowych oraz opracowywania nowych i skutecznych terapii.

Pochodzenie i ogólna charakterystyka komórek A375

Znajomość pochodzenia i ogólnych cech charakterystycznych linii komórkowej może pomóc w zaplanowaniu jej wykorzystania w badaniach naukowych. W tej części artykułu omówimy pochodzenie i cechy charakterystyczne linii komórkowej A375. Na przykład: czym jest linia komórkowa A375? Jakie są cechy charakterystyczne linii komórkowej A375? Skąd pochodzą komórki A375? Jaka jest morfologia komórek czerniaka A375? Jaka jest wielkość komórek A375?

• Linia komórek raka skóry A375 pochodzi z hodowli eksplantatu guza litygo 54-letniej kobiety z czerniakiem złośliwym [1].
• Komórki A375 mają morfologię podobną do komórek nabłonkowych.
• Rozmiar komórek A375 jest stosunkowo mniejszy w porównaniu z innymi liniami komórkowymi. Ich średnica wynosi około 12 µm.
• Komórki czerniaka A375 są hipotriploidalne. Modalna liczba chromosomów dla tej linii komórkowej wynosi 62. Zazwyczaj każda komórka posiada dziewięć chromosomów markerowych oraz jedną kopię normalnych chromosomów N2, N6 i N22.

Komórki A375: Informacje dotyczące hodowli komórkowej

Hodowle komórek A375 są łatwe w utrzymaniu. Nie mają one żadnych szczególnych wymagań dotyczących hodowli komórkowej. Ta sekcja pomoże Ci poznać niezbędne informacje dotyczące hodowli komórkowej. Na przykład, jaki jest czas podwojenia komórek A375. Jakie jest podłoże dla linii komórkowej A375? Jaka jest gęstość wysiewu komórek A375? Czy komórki czerniaka A375 są adhezyjne?

Kluczowe informacje dotyczące hodowli komórek A375

Czas podwojenia populacji:

Czas podwojenia populacji komórek A375 wynosi 20 godzin.

Przylegające czy w zawiesinie:

A375 to przylegająca ludzka linia komórkowa czerniaka.

Gęstość wysiewu:

Gęstość komórek wynosząca 1 x 10⁴ komórek/cm² jest idealna dla hodowli komórek A375. Komórki adhezyjne płucze się 1 x buforem fosforanowo-solnym (PBS) i inkubuje z roztworem do pasażowania (Accutase). Następnie do komórek dodaje się pożywkę hodowlaną i odwirowuje. Zebrane komórki zawiesza się ponownie w pożywce hodowlanej i umieszcza w nowych kolbach w celu wzrostu.

Pożywka wzrostowa:

Jako idealne podłoże dla linii A375 zaleca się DMEM uzupełnione 10% surowicą płodową bydlęcą (FBS), 4,5 g/l glukozy, 1,5 g/l NaHCO3, 4 mM L-glutaminą i 1,0 mM pirogronianem sodu. Podłoże dla linii A375 należy wymieniać 2–3 razy w tygodniu.

Warunki hodowli:

Komórki czerniaka A375 hoduje się w nawilżanym inkubatorze (37°C) z dopływem 5% CO2.

Przechowywanie:

Zamrożone komórki A375 należy przechowywać w temperaturze poniżej -150°C w fazie gazowej ciekłego azotu lub w zamrażarce elektrycznej.

Proces zamrażania i pożywka:

Do zamrażania linii komórkowej A375 stosuje się pożywki CM-1 lub CM-ACF. W celu ochrony żywotności komórek wybrano proces powolnego zamrażania, który pozwala na stopniowy spadek temperatury o 1°C.

Proces rozmrażania:

Fiolkę z zamrożonymi komórkami czerniaka A375 szybko miesza się w łaźni wodnej przez 40 do 60 sekund, aż pozostanie tylko niewielka grudka lodu. Do komórek dodaje się świeże pożywki i odwirowuje w celu usunięcia elementów pożywki zamrażającej. Uzyskany osad komórkowy ponownie zawiesza się i przelewa do nowych kolb.

Poziom bezpieczeństwa biologicznego:

Hodowle A375 są obsługiwane i utrzymywane w warunkach laboratoryjnych o poziomie bezpieczeństwa biologicznego 1.

Zastosowania badawcze linii komórkowej A375

Linia komórkowa A375 ma szerokie zastosowanie w badaniach nad rakiem. Oto niektóre z typowych obszarów, w których wykorzystuje się komórki A375.

• Badania nad rakiem: Komórki A375 mają szerokie zastosowanie w badaniach nad czerniakiem. Naukowcy wykorzystali te komórki do zbadania biologii raka skóry, procesów i podstawowych mechanizmów sygnalizacji komórkowej, w tym proliferacji, migracji i inwazji komórek. Może to również pomóc naukowcom w identyfikacji nowych molekularnych celów terapeutycznych. W badaniu przeprowadzonym przez Lin Zhu i współpracowników w 2019 r. wykorzystano wysoce agresywne komórki czerniaka A375 i odkryto rolę mikroRNA-3662 w wzroście i inwazji komórek czerniaka A375. Wyniki badania wskazują, że mikroRNA-3662 oddziałuje na gen ZEB1 i reguluje wzrost komórek czerniaka in vitro oraz in vivo w modelu nowotworowym A375 [2]. Podobnie, badania przeprowadzone w 2018 roku wykazały, że szlaki PI3K/AKT i MAPK/ERK biorą udział w proliferacji i przerzutach linii komórkowej A375 [3].
• Odkrywanie i testowanie leków: Linia komórkowa A375 jest użytecznym modelem nowotworowym in vitro do testowania i przesiewania potencjalnych środków przeciwnowotworowych. Naukowcy oceniają toksyczność i skuteczność nowych leków chemioterapeutycznych, związków i innych terapii, wykorzystując komórki czerniaka A375. Na przykład w jednym z badań zbadano właściwości przeciwnowotworowe mikro- i nanovesikuli pochodzących z grejpfruta na komórkach ludzkiego czerniaka A375. Wyniki wykazały, że mikro- i nanovesikule indukują zatrzymanie cyklu komórkowego i apoptozę oraz hamują ekspresję genów odpowiedzialnych za proliferację, migrację i inwazję komórek [4].

Komórki A375: Publikacje

Poniżej wymieniono kilka istotnych publikacji naukowych dotyczących komórek A375.

Witamina D i jej analogi o niskim działaniu kalcemicznym modulują właściwości przeciwnowotworowe cisplatyny i dakarbazyny w ludzkiej linii komórkowej czerniaka A375

Badanie to zostało opublikowane w czasopiśmie „Journal of Oncology” w 2019 r. W badaniu tym wysunięto hipotezę, że jednoczesne stosowanie witaminy D i jej analogów poprawia działanie przeciwnowotworowe cisplatyny i dakarbazyny w komórkach czerniaka A375.

Ocena in vitro działania przeciwnowotworowego (linia komórkowa A375) żelu i ekstraktów z całych liści wybranych gatunków aloesu

Badanie to zostało opublikowane w czasopiśmie „Journal of Herbal Medicine” w 2022 roku. W badaniu tym zbadano działanie przeciwnowotworowe żelu z aloesu w komórkach czerniaka A375.

Członek rodziny fermityny 2 sprzyja progresji czerniaka poprzez wzmocnienie wiązania p-α-Pix z Rac1 w celu aktywacji szlaku MAPK

W badaniu opublikowanym w czasopiśmie „Oncogene” (2021) wysunięto hipotezę, że członek rodziny fermityn 2 (FERMT2 lub kindlin-2) sprzyja progresji czerniaka poprzez aktywację szlaku MAPK w wyniku wiązania się z p-α-Pix i Rac1.

FARP1 ułatwia proliferację komórek poprzez modulowanie szlaku sygnałowego MAPK w czerniaku skóry

W badaniu opublikowanym w czasopiśmie „The American Journal of Dermatopathology” (2019) wysunięto hipotezę, że FARP1 może sprzyjać rozwojowi i progresji czerniaka skóry. W związku z tym może on stanowić użyteczny cel terapeutyczny.

Potencjał cytotoksyczny i apoptyczny ekstraktów z Phyllodium elegans na ludzkie linie komórkowe nowotworowe

Ten artykuł naukowy został opublikowany w czasopiśmie „Bioengineered” (2019). W badaniu tym zbadano aktywność cytotoksyczną i apoptyczną ekstraktu z rośliny Phyllodium elegans na ludzkich liniach komórkowych nowotworowych, w tym A375.

Materiały dotyczące linii komórkowej A375: protokoły, filmy i inne

Poniżej znajduje się kilka zasobów internetowych dotyczących komórek A375.

• Transfekcja komórek A375: Ten film instruktażowy pomoże Ci krok po kroku nauczyć się transfekcji komórek A375.
• Hodowla komórek: Ten film zawiera bardzo przydatne informacje dotyczące hodowli linii komórkowych.

Protokoły hodowli komórek A375 są wymienione tutaj.

• Linia komórkowa A375: Ten link zawiera przydatne informacje na temat hodowli i utrzymania linii komórkowej A375, w tym pożywki A375 oraz postępowania z zamrożonymi i namnażającymi się hodowlami A375.

Bibliografia

1. Avram, S. i in., Standaryzacja modeli ludzkiego czerniaka A375 na błonie kosmówkowo-omoczniowej zarodków kurzych i myszach nagich Balb/c. Oncol Rep, 2017. 38(1): s. 89-99.
2. Zhu, L. i in., MicroRNA-3662 działa na ZEB1 i osłabia inwazję wysoce agresywnej linii komórkowej czerniaka A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: s. 5845-5856.
3. Peng, X. i in., Oxyfadichalcone C hamuje proliferację i przerzuty komórek czerniaka A375 poprzez supresję szlaków PI3K/Akt i MAPK/ERK. Life sciences, 2018. 206: s. 35-44.
4. Stanly, C. i in., Mikro- i nanovesikule pochodzące z grejpfruta wykazują zróżnicowane profile metabolomiczne i działanie przeciwnowotworowe w ludzkiej linii komórkowej czerniaka A375. Cells, 2020. 9(12): s. 2722.