Linia komórkowa RAW 264.7 w badaniach nad makrofagami i immunologią

Linia komórkowa RAW 264.7 stanowi solidny model in vitro mysich makrofagów, mający fundamentalne znaczenie w dziedzinie badań immunologicznych. Komórki te, pochodzące od samca myszy rasy BALB/c, zostały transformowane przez mysiego wirusa białaczki Abelsona, w wyniku czego powstała linia komórkowa o cechach makrofagów. Ze względu na swoją stabilność funkcjonalną oraz naturalną zdolność do fagocytozy i pinocytozy komórki RAW 264.7 są niezbędne do badania interakcji między gospodarzem a patogenem, co czyni je fundamentem badań immunologicznych [1,2].

Cechy morfologiczne i zachowanie wzrostowe

Po zbadaniu komórki RAW 264.7 wykazują wzrost póładhezyjny z tendencją do tworzenia zarówno wrzecionowatych komórek adhezyjnych, jak i sferycznych, pływających komórek żywych, o średnicy komórkowej w zakresie od 10 do 20 µm. Ta polimorficzna natura oraz zdolność adaptacji do warunków hodowli sprawiają, że komórki RAW 264.7 są wszechstronnym narzędziem do eksperymentalnej manipulacji i obserwacji.

Funkcja immunologiczna i prezentacja antygenów

Jako komórki prezentujące antygeny komórki RAW 264.7 odgrywają kluczową rolę w układzie odpornościowym. Ich funkcja wykracza poza proste rozpoznawanie patogenów i obejmuje przetwarzanie oraz prezentację antygenów komórkom T, koordynując w ten sposób kompleksową odpowiedź immunologiczną. Ta dynamika ułatwia głębsze zrozumienie sposobu, w jaki układ odpornościowy identyfikuje i neutralizuje obce czynniki.

Polaryzacja makrofagów: paradygmat M0, M1 i M2

Komórki RAW 264.7 w stanie podstawowym, jako makrofagi M0, posiadają niezwykłą zdolność do polaryzacji w kierunku fenotypu prozapalnego M1 lub przeciwzapalnego M2. Ta zdolność do polaryzacji stanowi dla naukowców model do badania wpływu i skutków różnych cytokin oraz czynników środowiskowych na funkcjonowanie makrofagów i reakcje immunologiczne [3,4].

Osteoklastogeneza i przebudowa kości

Chociaż komórki RAW 264.7 same w sobie nie są osteoklastami, odgrywają kluczową rolę w badaniach nad osteoklastogenezą – procesem powstawania osteoklastów. Komórki te ułatwiają badanie ekspresji genów osteoklastów oraz ich reaktywności na aktywację receptorów. Badania te mają ogromne znaczenie dla zrozumienia patofizjologii schorzeń takich jak osteoporoza, dla których charakterystyczne jest zaburzenie przebudowy kości.

Zalety i wady ogniw RAW 264.7

Zalety

• Łatwa hodowla: Linia komórkowa RAW 264.7 jest łatwa w hodowli i utrzymaniu w warunkach laboratoryjnych, bez żadnych skomplikowanych wymagań.
• Dobrze scharakteryzowana: RAW 264.7 to dobrze scharakteryzowana linia komórkowa, co oznacza, że posiada stabilne cechy fenotypowe i funkcjonalne.
• Model makrofagów in vitro: Ponieważ komórki RAW 264.7 są makrofagami, wykazują one podstawowe funkcje charakterystyczne dla makrofagów, takie jak fagocytoza i pinocytoza. Dlatego są one często wykorzystywane jako model makrofagów in vitro.
• Różnicowanie w osteoklasty: Komórki RAW 264.7 można różnicować w osteoklasty przy użyciu określonych czynników molekularnych. Te zróżnicowane komórki są zdolne do przeprowadzania przebudowy kości, podobnie jak osteoklasty.

Wady

• Słabe odzwierciedlenie pierwotnych makrofagów: Jako transformowana linia komórkowa, RAW 264.7 może nie odzwierciedlać dokładnie cech pierwotnych makrofagów i może wykazywać pewne różnice w ekspresji genów, fenotypie i funkcji.
• Ograniczenia w badaniach przesiewowych leków: Komórki RAW 264.7 mogą nie nadawać się do wszystkich rodzajów testów przesiewowych leków, a ich reakcje na niektóre leki mogą różnić się od reakcji pierwotnych makrofagów.
• Silna adhezja komórek: Komórki RAW 264.7 silnie przylegają do powierzchni kolby hodowlanej i czasami trudno je od niej oddzielić.

Zastosowania komórek RAW 264.7 w modelowaniu makrofagów i badaniach immunologicznych

Modelowanie komórkowych odpowiedzi immunologicznych

Linia komórkowa RAW 264.7, odzwierciedlająca funkcjonalność autentycznych makrofagów, stanowi kluczowy model do badania reakcji komórkowych na patogeny i bodźce immunologiczne. Badanie podkreślające ten aspekt oceniło działanie immunomodulujące i przeciwutleniające bakterii kwasu mlekowego zabitych przez podgrzanie na te komórki, dostarczając istotnych wyników w zakresie regulacji układu odpornościowego [5 ].

Uzupełnieniem tych badań są prace przeprowadzone w 2019 r., które wyjaśniły immunologiczny wpływ ekspozycji komórek RAW 264.7 na polisacharydy pochodzące z rośliny Polygonatum sibiricum. W badaniu stwierdzono, że związki te wywołują odpowiedź immunologiczną poprzez aktywację szlaków sygnałowych NF-κB/MAPK, co pozwala na dogłębne zrozumienie procesów molekularnych [6].

Badania nad osteoklastogenezą

Komórki RAW 264.7, pełniące rolę modelu zastępczego w badaniach nad różnicowaniem osteoklastów, przyczyniają się do wyjaśnienia zachowania osteoklastów i szlaków ich różnicowania. Badania te poszerzają naszą wiedzę na temat mechanizmów resorpcji kości oraz patogenezy osteoporozy. Do monitorowania zmian wewnątrzkomórkowych i analizy metabolizmu hemu w tych komórkach często wykorzystuje się zaawansowane techniki obrazowania.

Zdobywanie wiedzy molekularnej na temat osteoklastogenezy

Pomimo swojej podstawowej roli jako modelu makrofagów, komórki RAW 264.7 są również wykorzystywane do badań nad osteoklastogenezą in vitro. Poprzez indukowanie cech podobnych do osteoklastów w tych komórkach naukowcy uzyskują wgląd w proces różnicowania i zachowanie preosteoklastów, choć w badaniach tych kluczowe znaczenie ma uwzględnienie nieodłącznych cech i pochodzenia tej linii komórkowej.

Badania przesiewowe bioaktywności produktów naturalnych

Badania przesiewowe pod kątem bioaktywności produktów naturalnych to kolejne zastosowanie, w którym komórki RAW 264.7 sprawdzają się znakomicie. Na przykład ich wykorzystanie w koreańskim badaniu poświęconym właściwościom immunostymulującym mieszanki ziołowej wykazało skuteczność tej linii komórkowej w identyfikacji związków bioaktywnych w substancjach naturalnych [7 ].

Zostań pionierem w swoich badaniach dzięki naszym komórkom RAW 264.7

Publikacje naukowe wykorzystujące komórki RAW 264.7

Dostępnych jest wiele publikacji naukowych dotyczących mysiej linii komórkowej makrofagów RAW 264.7:

• Polisacharydy z Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute indukują odpowiedź immunologiczną w linii komórkowej RAW 264.7 poprzez szlak NF-κB/MAPK: W badaniu tym wysunięto hipotezę, że polisacharydy pozyskane z rośliny Polygonatum sibiricum mogą wywoływać odpowiedź immunologiczną w mysiej linii komórkowej makrofagów RAW 264.7 poprzez regulację kaskady sygnałowej NF-κB/MAPK.
• Działanie immunomodulujące wyciągu z Tinospora crispa i jego głównych składników na funkcje immunologiczne makrofagów RAW 264.7: Artykuł opublikowany w czasopiśmie „International Immunopharmacology” opisuje, że ekstrakt z rośliny Tinospora crispa i jego główne składniki wywierają działanie immunomodulujące i immunostymulujące na linię komórkową makrofagów RAW 264.7.
• Bakterie kwasu mlekowego zabite ciepłem hamują produkcję tlenku azotu poprzez indukowalną syntazę tlenku azotu i cyklooksygenazę-2 w komórkach RAW 264.7: W badaniu tym wysunięto hipotezę, że bakterie kwasu mlekowego zabite ciepłem mogą potencjalnie znaleźć zastosowanie w syntezie produktów probiotycznych, ponieważ wykazują właściwości immunomodulujące i przeciwutleniające. Naukowcy wykorzystali komórki RAW 264.7 do zbadania tych aktywności biologicznych.
• Wpływ preparatu ziołowego na wzmocnienie odpowiedzi immunologicznej w makrofagach RAW 264.7: W niniejszym badaniu wykorzystano komórki RAW 264.7 do zbadania immunostymulującego działania preparatu ziołowego o nazwie KM1608. Badanie sugeruje, że KM1608 może być potencjalnym środkiem wzmacniającym odpowiedź immunologiczną.
• Przegląd roślin stosowanych w tradycyjnej medycynie kolumbijskiej ujawnił potencjał przeciwzapalny kielichów Physalis angulata: W artykule opublikowanym w czasopiśmie „Saudi Journal of Biological Sciences” zbadano potencjał przeciwzapalny 10 powszechnie stosowanych tradycyjnych roślin kolumbijskich, wykorzystując komórki RAW 264.7 stymulowane LPS.

Komórki RAW 264.7: materiały, protokoły, filmy i nie tylko

Komórki RAW 264.7 są często wykorzystywane w badaniach nad transfekcją. Poniższe zasoby wyjaśniają różne metody transfekcji stosowane w przypadku linii komórkowej RAW 264.7.

• Transfekcja komórek RAW 264.7: Ta strona internetowa zawiera protokół transfekcji makrofagów RAW 264.7 przy użyciu odczynnika Lipofectamine.
• Protokół transfekcji: Ten opublikowany artykuł opisuje szczegółowy protokół transfekcji komórek RAW 264.7.
• Skuteczna metoda transfekcji komórek RAW 264.7: Niniejszy dokument opisuje inne praktyczne podejście do transfekcji z wykorzystaniem komórek RAW 264.7.

Filmy dotyczące linii komórkowej RAW 264.7

• Hodowla komórek RAW 264.7: Ten film wyjaśnia protokół pasażowania komórek RAW 264.7.
• Metoda transfekcji: Ten film przedstawia transfekcję komórek RAW 264.7 genem reporterowym.

Najważniejsze pytania i odpowiedzi dotyczące linii komórkowej RAW 264.7: spostrzeżenia dotyczące badań nad naśladowaniem makrofagów i osteoklastogenezą

Bibliografia

1. Taciak, B. i in., Ocena stabilności fenotypowej i funkcjonalnej linii komórkowej RAW 264.7 w trakcie kolejnych pasażowań. PloS one, 2018. 13(6): s. e0198943.
2. Wang, S. i in., Makrofagi zapalne zakłócają dojrzewanie i mineralizację osteocytów poprzez regulację szlaku sygnałowego Notch. Molecular Medicine, 2022. 28(1): s. 102.
3. Orekhov, A.N. i in., Różnicowanie monocytów i polaryzacja makrofagów. Vessel Plus, 2019. 3: s. 10.
4. Khabipov, A. i in., Polaryzacja makrofagów RAW 264.7 przez komórki raka trzustki – model do badania makrofagów sprzyjających rozwojowi nowotworów. Anticancer Research, 2019. 39(6): s. 2871–2882.
5. Kang, C.-H. i in., Zabite ciepłem bakterie kwasu mlekowego hamują produkcję tlenku azotu poprzez indukowalną syntazę tlenku azotu i cyklooksygenazę-2 w komórkach RAW 264.7. Probiotics and Antimicrobial Proteins, 2021. 13(6): s. 1530–1538.
6. Zhang, J. i in., Polisacharydy z Polygonatum sibiricum Delar. ex Redoute indukują odpowiedź immunologiczną w linii komórkowej RAW264.7 poprzez szlak NF-κB/MAPK. RSC Advances, 2019. 9(31): s. 17988–17994.
7. Trinh, T.A. i in., Wpływ preparatu ziołowego na wzmocnienie odpowiedzi immunologicznej w makrofagach RAW 264.7. Biomolecules, 2020. 10(3): s. 424.