Komórki NIH-3T3: Postępy w badaniach nad fibroblastami i zastosowaniach komórek NIH-3T3
Linia komórkowa NIH-3T3, wyhodowana w 1962 roku przez Howarda Greena i George'a Todaro w Szkole Medycznej Uniwersytetu Nowojorskiego z tkanki 17-dniowego zarodka myszy rasy Swiss Albino, stała się podstawowym zasobem w badaniach biomedycznych. Znane ze swojej wysokiej podatności na tworzenie ognisk wirusa białaczki i wirusa mięsaka, komórki NIH-3T3 stanowią kluczowe narzędzie w wielu badaniach naukowych, w tym w badaniach onkologii wirusowej, analizie ekspresji genów oraz badaniu dynamiki wzrostu komórkowego. Nazwa „3T3” odzwierciedla metodę hodowli komórkowej, oznaczając 3-dniowy odstęp między przesiewami przy początkowej gęstości wysiewu wynoszącej 3 × 10^5 komórek, co podkreśla znormalizowane warunki, w jakich komórki te zostały po raz pierwszy wyhodowane i namnożone.
- Pożywka wzrostowa
- Zobacz stronę produktu
- Czas podwojenia
- Zobacz stronę produktu
- Typ wzrostu
- Adhezyjny
- Poziom bezpieczeństwa biologicznego
- BSL-1
- Dostępne w
- Cytion — Zamów komórki NIH-3T3
Różnorodne morfologie i zastosowania komórek NIH-3T3
Jedną z charakterystycznych cech komórek NIH-3T3 jest ich zdolność do adaptacji morfologicznej, która zmienia się znacznie w zależności od stopnia zrostu hodowli. Przy niższych gęstościach fibroblasty te mają strukturę pojedynczych komórek o kształcie wrzeciona, która ewoluuje w gęste, wirujące wzory, gdy populacja osiąga zrost. Komórki NIH-3T3, o średniej średnicy około 18 μm, stanowią wszechstronny model do dogłębnych badań z zakresu biologii komórkowej, obejmujących zarówno mechanizmy naprawy tkanek, jak i skomplikowane szlaki regulacji cyklu komórkowego.
Informacje dotyczące hodowli
Najważniejsze informacje dotyczące hodowli:
Czas podwojenia populacji: około 20 godzin.
Typ wzrostu: Hodowle adhezyjne.
Gęstość wysiewu: Zalecana: 3 do 4 x 10^4 komórek/cm^2.
Podłoże hodowlane: DMEM lub Ham's F12, uzupełnione 5% FBS i 2,5 mM L-glutaminy.
Warunki hodowli: Utrzymywać w temperaturze 37 °C w nawilżanym inkubatorze z 5% CO₂.
Przechowywanie: Przechowywać w temperaturze poniżej -195 °C w fazie gazowej ciekłego azotu.
Metoda zamrażania: Należy użyć pożywki CM-1 lub CM-ACF; zastosować metodę powolnego zamrażania (spadek temperatury o 1°C).
Protokół rozmrażania: szybkie ogrzewanie w łaźni wodnej o temperaturze 37 °C, a następnie odwirowanie w celu usunięcia pożywki zamrażającej, po czym ponowne zawieszenie w pożywce hodowlanej.
Poziom bezpieczeństwa biologicznego: Hodowla wymaga warunków zgodnych z poziomem bezpieczeństwa biologicznego 1.
Szwajcarska mysz albinos w laboratorium.
Zalety i wady stosowania komórek NIH 3T3
Zalety
Skuteczność transfekcji: Komórki NIH-3T3, znane z wysokiego wskaźnika transfekcji, doskonale nadają się zarówno do badań nad przejściową, jak i stabilną ekspresją genów, umożliwiając stosowanie różnorodnych technik transfekcji.
Zastosowanie jako warstwa podtrzymująca: Komórki te często służą jako warstwa podtrzymująca w hodowlach mieszanych z komórkami takimi jak keratynocyty i komórki macierzyste, dzięki uwalnianiu czynników wzrostu, które sprzyjają wzrostowi komórek w hodowli mieszanej.
Badania nad komórkami macierzystymi: Komórki NIH-3T3 są preferowanym wyborem w badaniach nad komórkami macierzystymi do indukowania pluripotencji bez modyfikacji genetycznej oraz zapewniania środowiska sprzyjającego różnicowaniu komórek macierzystych.
Stabilność hodowli: Komórki NIH-3T3 są znane ze swojej stabilności i niskiej częstotliwości spontanicznej transformacji. Jednak w pewnych warunkach lub po ekspozycji na określone onkogeny lub mutageny komórki NIH-3T3 mogą ulegać spontanicznej transformacji. Transformacja ta może prowadzić do nabycia właściwości nowotworowych, takich jak niekontrolowany wzrost, utrata hamowania kontaktowego oraz zdolność do tworzenia nowotworów po wstrzyknięciu do podatnych gospodarzy.
Wady
Niespójna wielkość komórek: Wydłużona, wrzecionowata morfologia komórek NIH-3T3 może się różnić, co utrudnia analizę obrazową w testach.
Podatność na infekcje: Komórki te są podatne na infekcje bakteryjne i mykoplazmatyczne, jeśli nie są utrzymywane w rygorystycznych warunkach aseptycznych, co może potencjalnie wpłynąć na integralność eksperymentu.
Zastosowania badawcze komórek NIH-3T3
Badania transfekcji DNA: Wytrzymałość komórek NIH-3T3 sprawia, że idealnie nadają się one do wprowadzania i badania funkcji różnych genów, co wykazano w badaniach dotyczących białek takich jak NAB2-STAT6 i ich roli w procesach komórkowych.
Testy komórkowe: Ich niezawodność obejmuje różne testy, w tym testy żywotności, apoptozy i tworzenia skupisk, dostarczając informacji na temat reakcji komórkowych w różnych warunkach eksperymentalnych.
Badania nad cyklem komórkowym: Możliwość łatwej manipulacji cyklem komórkowym tej linii komórkowej poprzez poziom surowicy sprawia, że stanowi ona potężny model do badania regulacji cyklu komórkowego i jego zaburzeń w kontekście chorób.
Wzbogać swoje badania dzięki komórkom NIH-3T3
Przegląd najważniejszych badań z wykorzystaniem linii komórkowej fibroblastów NIH 3T3
Linia komórkowa NIH-3T3 odegrała kluczową rolę w licznych projektach badawczych obejmujących różne aspekty biologii komórkowej. Poniżej przedstawiono kilka istotnych badań, w których wykorzystano te komórki:
- Badanie białka fuzyjnego NAB2-STAT6: Opublikowane w czasopiśmie „Biochemical and Biophysical Research Communications” badanie to analizuje wpływ białka fuzyjnego NAB2-STAT6 na komórki NIH-3T3, a konkretnie jego rolę w stymulowaniu wzrostu i migracji komórek poprzez regulację EGR-1.
- Badanie APOBEC3 i mysiego wirusa białaczki: Niniejsze badanie, opublikowane w czasopiśmie „Virology”, analizuje hipermutację mysiego wirusa białaczki AKV w komórkach NIH-3T3 wyrażających mysi gen APOBEC3.
- Ocena potencjału przeciwprzerzutowego leków epigenetycznych: W czasopiśmie „Oncotargets and Therapy” niniejsze badanie ocenia działanie przeciwprzerzutowe hydralazyny i kwasu walproinowego na komórki NIH-3T3 poddane transformacji RAS.
- Wpływ bajkaliny na proliferację komórek NIH-3T3 i syntezę kolagenu: W niniejszym badaniu wykorzystano komórki NIH-3T3 w celu zbadania, w jaki sposób bajkalina wpływa na proliferację komórek i produkcję kolagenu poprzez modulację osi miR-9/insulinopodobny czynnik wzrostu 1.
- Badanie niedoboru ryboflawiny a powstawanie nowotworów: Niniejsze badanie przedstawia wyniki dotyczące tego, w jaki sposób niedobór ryboflawiny w komórkach NIH-3T3 przyczynia się do powstawania nowotworów poprzez stymulowanie proliferacji komórek i zaburzenie regulacji genów cyklu komórkowego.
Niezbędne zasoby do badań nad komórkami NIH-3T3
Dla naukowców zainteresowanych pracą z komórkami NIH-3T3 dostępne są różnorodne zasoby zawierające wytyczne dotyczące hodowli i protokołów eksperymentalnych:
- Tworzenie sferoidów w komórkach NIH-3T3: Ten film przedstawia szczegółowy przewodnik po tworzeniu sferoidów – technice hodowli komórek 3D, która powoduje agregację komórek NIH-3T3 w skupiska, oferując model bardziej zbliżony do warunków fizjologicznych do celów badań.
- Monitorowanie wzrostu komórek NIH-3T3: Dzięki systemowi obrazowania żywych komórek JuLI Br ten film przedstawia dynamikę wzrostu komórek NIH-3T3 w ciągu 65 godzin, pokazując proliferację komórek w czasie rzeczywistym.
Materiały te mają na celu wsparcie Państwa badań z wykorzystaniem komórek NIH-3T3, stanowiąc podstawę udanych eksperymentów i odkryć.
Często zadawane pytania dotyczące komórek NIH-3T3
Bibliografia
- Rahimi, A.M., M. Cai i S. Hoyer-Fender, „Heterogeniczność linii komórkowej fibroblastów NIH3T3”. Cells, 2022. 11(17): s. 2677.
- Leibiger, C. i in., Pierwsza charakterystyka molekularno-cytogenetyczna linii komórkowej NIH 3T3 w wysokiej rozdzielczości za pomocą mysiego barwienia wielokolorowego. Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2013. 61(4): s. 306–312.
- Wang, H.-X. i in., Analiza porównawcza różnych warstw komórek podtrzymujących z fibroblastami 3T3 do hodowli komórek macierzystych rąbka rogówki królików. International Journal of Ophthalmology, 2017. 10(7): s. 1021.
- Wang, Z. i in., Różnicowanie komórek neuronalnych z fibroblastów NIH/3T3 w określonych warunkach. Development, growth & differentiation, 2011. 53(3): s. 357–365.
- Park, Y.-S. i in., Białko fuzyjne NAB2-STAT6 pośredniczy w proliferacji komórek i progresji onkogenicznej poprzez regulację EGR-1. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2020. 526(2): s. 287–292.
- Mattsson, M., Ekspresja Sloppymerase™ w komórkach NIH/3T3: badanie wszechstronności podatnej na błędy polimerazy fuzyjnej. 2021.
- Sahinturk, V. i in., Akrylamid wywiera działanie cytotoksyczne w komórkach fibroblastów NIH/3T3 poprzez apoptozę. Toxicology and Industrial Health, 2018. 34(7): s. 481–489.
- Lusi, E.A. i F. Caicci, Odkrycie pierwszego ludzkiego retrowirusa olbrzymiego: opis jego morfologii, kinazy retrowirusowej oraz zdolności do wywoływania nowotworów u myszy. bioRxiv, 2019: s. 851063.
- Endo, M. i in., Szlak sygnałowy E2F1-Ror2 pośredniczy w skoordynowanej regulacji transkrypcji, sprzyjając przejściu z fazy G1 do fazy S w fibroblastach NIH/3T3 stymulowanych bFGF. The FASEB Journal, 2020. 34(2): s. 3413–3428.
- Long, L. i in., Niedobór ryboflawiny sprzyja powstawaniu nowotworów w komórkach HEK293T i NIH3T3 poprzez podtrzymywanie proliferacji komórek i regulację transkrypcji genów związanych z cyklem komórkowym. The Journal of Nutrition, 2018. 148(6): s. 834–843.